一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，包括以下步驟：(1)制備樣品處理液；(2)取樣品處理液進(jìn)行反相高效液相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；(3)取苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈水混合溶液作溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得苯并(a)芘校正因子；(4)將步驟(2)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與苯并(a)芘的校正因子比對(duì)，得到花生油中苯并(a)芘的含量。該方法操作簡(jiǎn)便易行，能有效減少操作誤差，測(cè)定花生油中的苯并(a)芘含量的結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
【專利說(shuō)明】一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)花生油中苯并(a)芘含量的方法的改進(jìn)，尤其是一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花生油是風(fēng)味型食用油，因具有炒熟花生的濃郁香味而受到部分消費(fèi)者的喜愛，由于在炒制花生和提取花生油的過程中需在較高溫度加熱一段時(shí)間，故而會(huì)導(dǎo)致成品花生油中可能含有少量的苯并(a)芘，不同工藝條件生產(chǎn)的花生油中的苯并(a)芘各有不同。苯并(a)芘是一種公認(rèn)的致癌物質(zhì)，我國(guó)的食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求苯并(a)芘含量不得超過lOyg/kg，因此，花生油生產(chǎn)廠家和各級(jí)質(zhì)監(jiān)機(jī)構(gòu)會(huì)對(duì)花生油產(chǎn)品中的苯并(a)芘含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，確保符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。目前有關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22509-2008《動(dòng)植物油脂苯并(a)芘的測(cè)定反相高效液相色譜法》和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.27-2003《食品中苯并(a)芘的測(cè)定》，在實(shí)際檢測(cè)中則多采用GB/T 22509-2008中的方法，GB/T5009.27-2003的檢測(cè)方法因操作繁瑣，測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定，實(shí)際中很少使用，目前也已經(jīng)在互聯(lián)網(wǎng)上進(jìn)行修訂意見征求稿的收集，其擬修訂后的操作方法與第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)基本相同。
[0003]不過，標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22509-2008的方法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量中也還是存在以下問題的:
(1)以甲苯為溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣測(cè)定時(shí)所出的色譜峰會(huì)出現(xiàn)前沿畸形，當(dāng)溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)也會(huì)出現(xiàn)前沿畸形。
[0004](2)以乙腈-四氫呋喃混合溶液為溶劑，用其制備的樣品處理液所出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間存在較大的偏離。
[0005](3)檢測(cè)準(zhǔn)確度低:在裝填層析柱時(shí)易出現(xiàn)有空洞的情況，包括脂肪在內(nèi)的各組分的吸附和洗脫的效率不穩(wěn)定，脂肪等組分被洗脫出來(lái)的量時(shí)多時(shí)少，造成最終獲得的殘?jiān)繒r(shí)多時(shí)少，因而加標(biāo)回收率不穩(wěn)定，難以準(zhǔn)確測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量。
[0006](4)試劑利用率低:甲苯屬于易制毒化學(xué)品，采購(gòu)手續(xù)復(fù)雜，且購(gòu)回的規(guī)格至少在500ml以上甚至4L，然而甲苯的利用率并不高，通常100ml甲苯就可以用上數(shù)年，多余的試劑將處于閑置浪費(fèi)狀態(tài)并增加了相關(guān)易制毒化學(xué)品的管理壓力。
[0007](5)檢測(cè)成本高:2.5L規(guī)格裝的四氫呋喃價(jià)格需800-900元/瓶，2.5L規(guī)格裝的色譜純四氫呋喃價(jià)格將近千元,使檢測(cè)成本偏高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供了一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，該方法操作簡(jiǎn)便易行，能有效減少操作誤差，測(cè)定花生油中的苯并(a)芘含量的結(jié)果準(zhǔn)
確可靠。
[0009]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)措施來(lái)實(shí)現(xiàn):一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其包括以下步驟:
(1)稱取花生油樣品，用石油醚I將樣品溶解稀釋，然后轉(zhuǎn)入預(yù)填充氧化鋁層析柱中，用石油醚I進(jìn)行淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)吹氮濃縮至干后，殘?jiān)捎靡译嫠旌先芤簻u旋溶解，獲得樣品處理液；
(2)取樣品處理液進(jìn)行反相高效液相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；
(3)取苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈水混合溶液作溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得苯并(a)芘校正因子；
(4)將步驟(2)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與苯并(a)芘的校正因子比對(duì)，得到花生油中苯并(a)芘的含量。[0010]本發(fā)明步驟(1)中花生油樣品的稱樣量為4~5g，較大的樣品量相對(duì)更具有代表性，可減少因大宗油樣中苯并(a)芘分布不均勻所造成的偶然誤差。生油中苯并(a)芘含量的方法，其包括以下步驟:
(1)稱取花生油樣品，用石油醚I將樣品溶解稀釋，然后轉(zhuǎn)入預(yù)填充氧化鋁層析柱中，用石油醚I進(jìn)行淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)吹氮濃縮至干后，殘?jiān)捎靡译嫠旌先芤簻u旋溶解，獲得樣品處理液；
(2)取樣品處理液進(jìn)行反相高效液相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)；
(3)取苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈水混合溶液作溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得苯并(a)芘校正因子；
(4)將步驟(2)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與苯并(a)芘的校正因子比對(duì)，得到花生油中苯并(a)芘的含量。[0010]本發(fā)明步驟(1)中花生油樣品的稱樣量為4~5g，較大的樣品量相對(duì)更具有代表性，可減少因大宗油樣中苯并(a)芘分布不均勻所造成的偶然誤差。
[0011]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述的步驟(1)中的預(yù)填充氧化鋁層析柱采用以下方法制成:將22g中性氧化鋁裝入內(nèi)徑為iri6mm的玻璃層析柱中，輕敲柱壁，使氧化鋁填充密實(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉，無(wú)水硫酸鈉的填充高度為27~33mm，關(guān)閉柱旋塞，在柱頂端覆蓋一層石蠟封口膜，充入干燥潔凈的氮?dú)夂?，用封口膜封?yán)柱頂端，制成預(yù)填充氧化鋁層析柱，避光備用。此操作中，填充料先裝柱，輕敲柱壁，使填充物料填充密實(shí)、均勻，不易形成空洞，再進(jìn)行充氮密閉保存，確保填充物料的性能不受環(huán)境溫度影響，可提前批量制作備用，使用方便。
[0012]本發(fā)明所述步驟(1)中樣品處理液的制備具體為:在氧化鋁層析柱中加入石油醚I進(jìn)行活化，然后稱量花生油樣品，用石油醚I溶解稀釋后移入氧化鋁層析柱中，用石油醚I淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液置于燒瓶?jī)?nèi)并在4(T50°C水浴上吹氮濃縮至
0.1-0.5ml，將濃縮液轉(zhuǎn)移入樣品瓶中，用石油醚I洗滌燒瓶?jī)?nèi)壁，洗滌液移入樣品瓶中，吹氮至干，再重復(fù)一次洗滌吹氮操作，殘?jiān)靡译嫠旌先芤喝芙?，即得樣品處理液?br> [0013]所述乙腈水混合溶液中乙腈和水的體積比為9: f 19:1。
[0014]本發(fā)明所述的步驟(2)推薦的色譜條件為:毛細(xì)管色譜柱采用多環(huán)芳烴分析柱；柱溫為25~35°C ;流速為1.1-l.2ml/min ；自動(dòng)進(jìn)樣10~20 μ 1，流動(dòng)相為乙腈和水體積比為9~19:1的乙腈水混合溶液，增益值12~16，激發(fā)波長(zhǎng)380nm，發(fā)射波長(zhǎng)410nm。
[0015]本發(fā)明中所述多環(huán)芳烴分析柱要求能將殘留的干擾物質(zhì)與目標(biāo)組分實(shí)現(xiàn)良好分離，可以不使用保護(hù)柱，推薦米用Ultimate PAH、Supelcosil LC-PAH、Eclipse PAH等。
[0016]本發(fā)明所述步驟(4)中苯并(a)芘的校正因子是通過用含0-l2yg/L的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的設(shè)定的反相高效液相色譜條件下測(cè)得。
[0017]本發(fā)明所述的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)工作液的溶劑采用乙腈水混合溶液，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制的溶劑則采用乙腈。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
(I)誤差少，精密度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高可靠:
本發(fā)明稱樣量為4~5g，是GB/T 22509-2008中0.4g稱樣量的10倍，較大的樣品量顯然相對(duì)更具有代表性，可減少因大宗油樣中苯并(a)芘不均勻分布所造成的偶然誤差。目標(biāo)物的洗脫效率高，干擾物的殘留小，殘?jiān)磕芊€(wěn)定地控制在0.0050g以下。從色譜圖來(lái)看，只有少量的雜質(zhì)峰，并且比目標(biāo)物提前2分鐘以上出峰，不會(huì)形成干擾。[0011]作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述的步驟(1)中的預(yù)填充氧化鋁層析柱采用以下方法制成:將22g中性氧化鋁裝入內(nèi)徑為iri6mm的玻璃層析柱中，輕敲柱壁，使氧化鋁填充密實(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉，無(wú)水硫酸鈉的填充高度為27~33mm，關(guān)閉柱旋塞，在柱頂端覆蓋一層石蠟封口膜，充入干燥潔凈的氮?dú)夂?，用封口膜封?yán)柱頂端，制成預(yù)填充氧化鋁層析柱，避光備用。此操作中，填充料先裝柱，輕敲柱壁，使填充物料填充密實(shí)、均勻，不易形成空洞，再進(jìn)行充氮密閉保存，確保填充物料的性能不受環(huán)境溫度影響，可提前批量制作備用，使用方便。
[0012]本發(fā)明所述步驟(1)中樣品處理液的制備具體為:在氧化鋁層析柱中加入石油醚I進(jìn)行活化，然后稱量花生油樣品，用石油醚I溶解稀釋后移入氧化鋁層析柱中，用石油醚I淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液置于燒瓶?jī)?nèi)并在4(T50°C水浴上吹氮濃縮至
0.1-0.5ml，將濃縮液轉(zhuǎn)移入樣品瓶中，用石油醚I洗滌燒瓶?jī)?nèi)壁，洗滌液移入樣品瓶中，吹氮至干，再重復(fù)一次洗滌吹氮操作，殘?jiān)靡译嫠旌先芤喝芙?，即得樣品處理液?br> [0013]所述乙腈水混合溶液中乙腈和水的體積比為9: f 19:1。
[0014]本發(fā)明所述的步驟(2)推薦的色譜條件為:毛細(xì)管色譜柱采用多環(huán)芳烴分析柱；柱溫為25~35°C ;流速為1.1-l.2ml/min ；自動(dòng)進(jìn)樣10~20 μ 1，流動(dòng)相為乙腈和水體積比為9~19:1的乙腈水混合溶液，增益值12~16，激發(fā)波長(zhǎng)380nm，發(fā)射波長(zhǎng)410nm。
[0015]本發(fā)明中所述多環(huán)芳烴分析柱要求能將殘留的干擾物質(zhì)與目標(biāo)組分實(shí)現(xiàn)良好分離，可以不使用保護(hù)柱，推薦米用Ultimate PAH、Supelcosil LC-PAH、Eclipse PAH等。
[0016]本發(fā)明所述步驟(4)中苯并(a)芘的校正因子是通過用含0-l2yg/L的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的設(shè)定的反相高效液相色譜條件下測(cè)得。
[0017]本發(fā)明所述的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)工作液的溶劑采用乙腈水混合溶液，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制的溶劑則采用乙腈。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
(I)誤差少，精密度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高可靠:
本發(fā)明稱樣量為4~5g，是GB/T 22509-2008中0.4g稱樣量的10倍，較大的樣品量顯然相對(duì)更具有代表性，可減少因大宗油樣中苯并(a)芘不均勻分布所造成的偶然誤差。目標(biāo)物的洗脫效率高，干擾物的殘留小，殘?jiān)磕芊€(wěn)定地控制在0.0050g以下。從色譜圖來(lái)看，只有少量的雜質(zhì)峰，并且比目標(biāo)物提前2分鐘以上出峰，不會(huì)形成干擾。[0019]本發(fā)明中的樣品處理液、標(biāo)準(zhǔn)工作液、流動(dòng)相中的溶劑采用統(tǒng)一配比的乙腈水混合溶液，一方面以乙腈水混合溶液代替甲苯進(jìn)行苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，有效改善了目標(biāo)物的峰形，提高了分離效果，另一方面，可避免因溶劑的不同造成樣品處理液與標(biāo)準(zhǔn)工作液分別上機(jī)測(cè)定時(shí)目標(biāo)物保留時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)，從而提高目標(biāo)物出峰時(shí)間的穩(wěn)定性，進(jìn)一步減少操作誤差，提高花生油中的苯并(a)芘定性定量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。
[0020](2)本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高，其檢出限低至0.5 μ g/kg。
[0021](3)本發(fā)明采用介于石油醚I沸程之間的4(T50°C溫度進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，既能加速濃縮，又能確保目標(biāo)組分在濃縮殘?jiān)械耐耆Ａ?，加?biāo)回收率高，結(jié)果重現(xiàn)性好。
[0022](4)操作簡(jiǎn)單:本發(fā)明提供了預(yù)填充氧化鋁層析柱的制備方法，柱填充質(zhì)量好，可保存一個(gè)月，隨用隨取，操作方便。
[0023](5)色譜柱的損耗低:本發(fā)明的洗脫效率高，干擾組分殘留小，洗凈晾干后可重復(fù)使用，減少色譜柱的損耗。在不使用保護(hù)柱的情況下，色譜柱長(zhǎng)時(shí)間使用后的分離效果與靈敏度仍非常好，使用壽命長(zhǎng)，節(jié)省保護(hù)柱和色譜柱的消耗費(fèi)用。
[0024](6)降低成本、減少污染、利于環(huán)保:
本發(fā)明不需要使用價(jià)格昂貴的一次性商品固相萃取小柱，氧化鋁層析柱可洗凈晾干后重復(fù)使用，節(jié)約氧化鋁層析柱的費(fèi)用，降低檢測(cè)成本。
[0025]本發(fā)明不需要使用甲苯和四氫呋喃，因而減少了因使用甲苯、四氫呋喃試劑造成的環(huán)境污染和對(duì)操作人員的身體危害，并且節(jié)省了價(jià)格昂貴的色譜純甲苯和四氫呋喃的采購(gòu)費(fèi)用，避免多余的試劑處于閑置浪費(fèi)狀態(tài)，并減少相關(guān)易制毒化學(xué)品的管理壓力。
[0026](7)易于推廣，社會(huì)效益好:本發(fā)明所需條件不復(fù)雜、不昂貴，利用常規(guī)配置的檢測(cè)儀器與試劑，即能達(dá)到準(zhǔn)確的測(cè)定效果，這有利于將這個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目普及應(yīng)用于各油脂生產(chǎn)廠家，從而對(duì)原料、半成品和成品質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制，減少相關(guān)質(zhì)量事故的發(fā)生，增加公眾對(duì)油類產(chǎn)品質(zhì)量安全的信任度。本發(fā)明并不僅限于對(duì)花生油的檢測(cè)，還可推廣應(yīng)用于芝麻油、山茶籽油等可能含有苯并(a)芘的其它品類油中苯并(a)芘含量的檢測(cè)。
[0027]【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
圖1是本發(fā)明實(shí)施例一的液相色譜圖。
[0028]圖2是本發(fā)明實(shí)施例二的液相色譜圖。
[0029]圖3是本發(fā)明實(shí)施例三的液相色譜圖。
[0030]圖4是本發(fā)明實(shí)施例四的液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031]以下實(shí)施例中的預(yù)填充氧化鋁層析柱采用以下方法制成:將22g中性氧化鋁裝入內(nèi)徑為iri6mm的玻璃層析柱中，輕敲柱壁，使氧化鋁填充密實(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉，無(wú)水硫酸鈉的填充高度為27?33mm，關(guān)閉柱旋塞，在柱頂端覆蓋一層石蠟封口膜，充入干燥潔凈的氮?dú)夂?，用封口膜封?yán)柱頂端，制成預(yù)填充氧化鋁層析柱，避光備用。此操作中，填充料先裝柱，輕敲柱壁，使填充物料填充密實(shí)、均勻，不易形成空洞，再進(jìn)行充氮密閉保存，確保填充物料的性能不受環(huán)境溫度影響，可提前批量制作備用，使用方便。
[0032]實(shí)施例一
1.色譜條件: 配置熒光檢測(cè)器的液相色譜儀；
色譜柱為 Eclipse PAH (4.6 X 250mm)，柱溫:30°C 流動(dòng)相為乙腈水混合溶液，其中，VV水=9:1 流速 1.0ml/min 自動(dòng)進(jìn)樣20 μ I
激發(fā)波長(zhǎng)380nm，發(fā)射波長(zhǎng)410nm，狹縫10nm，PMT增益16
2.校正因子測(cè)定
配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:精確稱取苯并(a)芘g標(biāo)準(zhǔn)品0.0125g，用乙腈溶解并定容至IOOml ；配制系列標(biāo)準(zhǔn)工作液:移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液I ml，用乙腈水混合溶液(Vill: V#=9:l)稀釋并定容至25ml，即得濃度為5 μ g/ml的苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，從中分別吸取0、2、4、8、16、24 μ I，再用乙腈水混合溶液(Vill: V水=9:1)稀釋并定容至10ml，制得系列苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0、1、2、4、8、12μ g/L。
[0033]在上述色譜條件下，用系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以峰面積和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得苯并(a)芘的校正因子，建立相應(yīng)的外標(biāo)分析方法。
[0034]3.樣品處理
①取出預(yù)填充氧化鋁層析柱，加入石油醚I，打開柱旋塞，使石油醚I自然流出到硫酸鈉層的頂端。
[0035]②量取80mL石油醚I用于樣品的淋洗與洗脫。稱取4g花生油樣品A置于IOOml容量瓶中，加入石油醚I溶解并定容，制成樣品稀釋液，從中移取IOml樣品稀釋液放入氧化鋁層析柱中，加入10 mL石油醚I后打開柱旋塞，調(diào)節(jié)流速為每2?3秒I滴，柱下用量筒接取淋洗液，至20ml時(shí)換上磨口圓底燒瓶，收集洗脫液。
[0036]③在45°C水浴上吹氮濃縮至約0.2ml，將濃縮液轉(zhuǎn)移入2ml樣品瓶中，用1.5ml石油醚I洗滌燒瓶?jī)?nèi)壁，洗滌液移入2ml樣品瓶中，吹氮至干，再重復(fù)一次洗滌吹氮操作。在樣品瓶中加入400 μ L乙腈水混合溶液(Vill: V#=9:l)，渦旋溶解殘?jiān)?，即得樣品溶液，供上機(jī)用。
[0037]4.樣品測(cè)定
在上述色譜條件下，選取相應(yīng)的外標(biāo)分析方法，進(jìn)樣測(cè)定，從色譜工作站讀取測(cè)定結(jié)果，色譜圖如圖1所示。
[0038]5.對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣測(cè)定，以苯并(a)芘的濃度值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。
[0039]對(duì)低濃度的苯并(a)芘空白加標(biāo)樣品進(jìn)行20次檢測(cè)，按Q=3Sb/b計(jì)算方法檢出限。
[0040]對(duì)加標(biāo)濃度分別為0.5、5、10 μ g/kg的花生油樣品分別進(jìn)行6次平行測(cè)定，計(jì)算回
收率與變異系數(shù)。
【權(quán)利要求】
1.一種反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，包括以下步驟: (1)稱取花生油樣品，用石油醚I將樣品溶解稀釋，然后轉(zhuǎn)入預(yù)填充氧化鋁層析柱中，用石油醚I進(jìn)行淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)吹氮濃縮至干后，殘?jiān)捎靡译嫠旌先芤簻u旋溶解，獲得樣品處理液； (2)取樣品處理液進(jìn)行反相高效液相色譜分析，獲得色譜分析數(shù)據(jù)； (3)取苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈水混合溶液作溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得苯并(a)芘校正因子； (4)將步驟(2)的獲得的色譜分析數(shù)據(jù)與苯并(a)芘的校正因子比對(duì)，得到花生油中苯并(a)芘的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述的步驟(1)中的預(yù)填充氧化鋁層析柱采用以下方法制成:將22g中性氧化鋁裝入內(nèi)徑為iri6mm的玻璃層析柱中，輕敲柱壁，使氧化鋁填充密實(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉，無(wú)水硫酸鈉的填充高度為27~33_，關(guān)閉柱旋塞，在柱頂端覆蓋一層石蠟封口膜，充入干燥潔凈的氮?dú)夂螅梅饪谀し鈬?yán)柱頂端，制成預(yù)填充氧化鋁層析柱，避光備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述步驟(1)中樣品處理液的制備具體為:在在氧化鋁層析柱中加入石油醚I進(jìn)行活化，然后稱量花生油樣品，用石油醚I溶解稀釋后移入氧化鋁層析柱中，用石油醚I淋洗與洗脫，收集洗脫液，洗脫液置于燒瓶?jī)?nèi)并在4(T50°C水浴上吹氮濃縮至0.1-0.5ml，將濃縮液轉(zhuǎn)移入樣品瓶中，用石油醚I洗滌燒瓶?jī)?nèi)壁，洗滌液移入樣品瓶中，吹氮至干，再重復(fù)一次洗滌吹氮操作，殘?jiān)靡译嫠旌先芤喝芙?，即得樣品處理液?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述乙腈水混合溶液中乙腈和水的體積比為9: 1-19:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述步驟(2)的色譜條件為:毛細(xì)管色譜柱采用多環(huán)芳烴分析柱；柱溫為25~35。。;流速為1.(Tl.2ml/min ;自動(dòng)進(jìn)樣10~20 μ 1，流動(dòng)相為乙腈和水體積比為9~19:1的乙腈水混合溶液，增益值12~16，激發(fā)波長(zhǎng)380nm，發(fā)射波長(zhǎng)410nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述多環(huán)芳烴分析柱為Ultimate PAH、Supelcosil LC-PAH或Eclipse PAH。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述步驟(1)中的稱樣量為4~5g。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的反相高效液相色譜外標(biāo)法測(cè)定花生油中苯并(a)芘含量的方法，其特征是，所述步驟(4)中苯并(a)芘的校正因子是通過用含(Tl2yg/L的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的反相高效液相色譜條件下測(cè)得。
【文檔編號(hào)】G01N30/89GK103760291SQ201310733115
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】曾亞麗, 楊明泉, 賈愛娟, 陳穗, 劉占, 孫麗霞, 李嘉玲 申請(qǐng)人:廣東美味鮮調(diào)味食品有限公司