一種決明子多糖定量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品、藥物分析領(lǐng)域，公開了一種決明子多糖定量檢測方法。以決明子為原料，粉碎后，用丙酮浸泡脫脂去色，然后熱水提取、過濾、濃縮，醇沉和聚乙烯聚吡咯烷酮處理除去多酚類和其他蛋白質(zhì)，最后經(jīng)離心、定容后得到?jīng)Q明子多糖。按照決明子多糖組成的單糖摩爾比，配制混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，用顯色法測定決明子多糖含量。采用本發(fā)明方法可對決明子多糖進(jìn)行更為準(zhǔn)確、快捷的定量檢測。
【專利說明】一種決明子多糖定量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品、藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種決明子多糖定量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，用于決明子多糖含量的測定方法主要借多糖的方法來測定決明子多糖的含量:包括顯色法、同位素標(biāo)記法、免疫學(xué)法、生物檢測法、高效液相色譜-示差檢測法和蒸發(fā)光散射檢測法等。顯色法不需要大型儀器、且操作簡單，易滿足快速測定的需要，因此廣泛應(yīng)用于決明子多糖的檢測。例如蒽酮-硫酸法(鐘先鋒，謝明勇，黃桂東，決明子有效成分的提取.南昌大學(xué)學(xué)報，2004，28:96-98)和硫酸-苯酚法(郭曉強(qiáng)，顏軍，部曉勇，徐光域，范春華，茍小軍.決明子水溶性多糖的純化及抗氧化活性研究.食品科學(xué)，2007，08:205-208)。
[0003]但是顯色法存在方法學(xué)干擾較大、重現(xiàn)性較差等缺點(diǎn)。首先，現(xiàn)有方法對于決明子含量的干擾物質(zhì)考慮較少。常規(guī)決明子樣品前處理方法“決明子-粉碎一脫脂一沸水提取一濃縮(得到粗多糖)一除蛋白一醇沉一離心轉(zhuǎn)溶(得到精多糖)”，操作繁瑣，樣品量損失大。因此，對于顯色法而言，找到影響最終結(jié)果的決明子干擾物，從而簡化前處理步驟是非常必要的。聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)具有良好的生物安全性和吸附絡(luò)合性，能夠有效除去多酚物質(zhì)、蛋白質(zhì)，多酚類物質(zhì)通過競爭吸附占據(jù)PVPP的吸附活性點(diǎn)，因此，多酚類物質(zhì)被吸附的量遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)(黎新明，崔英德，廖列文，PVPP對啤酒中多酚類物質(zhì)和蛋白質(zhì)的吸附作用比較.食品科學(xué)，2002，8:74-76)。目前PVPP已用于啤酒行業(yè)中除去多酚和蛋白質(zhì)，從而提高穩(wěn)定性(李超，劉東品，常智剛.PVPP吸附啤酒中多酚類物質(zhì)的分析.釀酒科技，2009,02:110-112)。目前也有PVPP用于其他飲料中除去多酚物質(zhì)的研究報道(易國斌，崔英德，廖列文，黎新明，PVPP吸附綠茶飲料中茶多酚的研究.食品科學(xué).2001，22:14-16)。
[0004]其次，決明子多糖為多種單糖按照一定比例組成，而現(xiàn)有方法一般以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線來獲取決明子多糖含量，所以結(jié)果往往與真實(shí)值偏差較大。因此該類方法測定決明子多糖含量時，對照品的選擇尤為重要。
[0005]結(jié)合決明子多糖的理化性質(zhì)，通過對前處理步驟、對照品的選擇進(jìn)行研究，研發(fā)一種標(biāo)準(zhǔn)化、簡便化、快捷化的決明子專屬的多糖定量檢測方法，對于此類物質(zhì)的生產(chǎn)、科研都具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種決明子多糖定量檢測方法。
[0007]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0008]一種決明子多糖定量檢測方法，包括以下步驟:
[0009](I)粉碎:將待測決明子進(jìn)行粉碎，過20?80目篩得到?jīng)Q明子粉料，干燥后備用；
[0010](2)脫脂去色:用丙酮浸泡決明子粉料，振搖30min后，靜置30min，倒去上層清液；重復(fù)該步驟至上層清液無色后，固液分離得脫脂粉料；[0011](3)熱水提取:用80~100°C熱水對脫脂粉料進(jìn)行提取2~3小時，合并濾液獲得提取液；
[0012](4)純化處理:
[0013]a.聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)處理:按0.5~5g/100mL的濃度往步驟(3)的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌I~3小時后，過濾，合并濾液；將濾液加入去離子水，定容，得待測樣品液；或，
[0014]b.聚乙烯聚吡咯烷酮/醇沉處理:按0.5~5g/100mL的濃度往步驟(3)的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌I~3小時后，過濾，合并濾液；緩慢加入相當(dāng)于濾液3倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，離心后取沉淀物；往沉淀物加入去離子水復(fù)溶，定容，得待測樣品液；
[0015](5)測定:以混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以苯酚-硫酸法測定待測樣品液的多糖濃度，即為待測決明子的多糖濃度；
[0016]所述混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品是由混合單糖配制而成，所述混合單糖包括摩爾百分?jǐn)?shù)90%以上的甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖；甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的摩爾比例為43:8:21:19。
[0017]步驟(1)所述的干燥后備用是將決明子粉料在60°C下干燥6小時，然后置于干燥器中備用。
[0018]步驟(2)所 述的決明子粉料與丙酮的料液重量比為1: (15~30)。
[0019]步驟(3)所述的脫脂粉料與熱水的料液比為1: (20~35) (g/mL)。
[0020]步驟(5)所述混合單糖在配成混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品前先于102°C烘干至恒重后備用。
[0021]步驟(5)所述混合單糖還包括葡萄糖醛酸、氨基半乳糖和阿拉伯糖；所述甘露糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖的摩爾比為43:4:1:8:21:19:5。
[0022]步驟(5)所述的苯酚-硫酸法包括如下步驟:取ImL待測樣品液加入具塞試管中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的苯酚溶液2mL，混勻，緩慢加入7mL濃硫酸，混勻，沸水浴15min，取出，冰水冷卻至室溫，在490nm處測定吸光值；根據(jù)吸光值及標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品液濃度。
[0023]步驟(5)所述的苯酚-硫酸法是一種已公開并在本領(lǐng)域普遍使用的分析方法，如苯酚-硫酸法測定廣東蟲草菌絲體多糖含量(鄭必勝，唐芳勇，聞文娟，李泰輝.苯酚-硫酸法測定廣東蟲草菌絲體多糖含量的研究.2008，08:17-21)、苯酚-硫酸法測定膠囊中多糖含量(司梁宏，張梅，馬丹華，談恒山.苯酚-硫酸顯色法測定枸杞益腎膠囊中多糖的含量.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27 (6):836-837)。故任何可達(dá)到本發(fā)明該步驟目的，具體操作不同的苯酚-硫酸法，都應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0024]決明子待測樣品液可采用Folin-Ciocalteau (FC)法測量總多酹物質(zhì)，采用Bicinchoninic acid(BCA)法測定蛋白質(zhì)。
[0025]多糖、總多酹、蛋白質(zhì)分別表示以波長490nm、765nm、562nm處的吸光度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)
曲線計(jì)算濃度。
[0026]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0027](I)結(jié)合決明子多糖的理化性質(zhì)，通過對前處理步驟、標(biāo)準(zhǔn)樣品的選擇進(jìn)行研究，提供一種標(biāo)準(zhǔn)化、簡便化、快捷化的決明子專屬的多糖定量檢測方法，對于此類物質(zhì)的生產(chǎn)、科研都具有重要意義。
[0028](2)決明子多糖為多種單糖按照一定比例組成，按照決明子多糖組成的單糖摩爾t匕，建立混合單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而測定得到的決明子多糖含量與真實(shí)值偏差最小。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1實(shí)施例4、5及對比例2的測定多糖、總多酚以及蛋白質(zhì)濃度的吸光度值；
[0030]圖2葡萄糖、混合單糖I (甘露糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖)和混合單糖II (甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及公式。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0032]實(shí)施例1
[0033]取5克決明子粉碎過20目篩，得到樣品決明子粉料。
[0034]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0035]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0036]PVPP/醇沉處理:按濃度0.5g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌I小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液三倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4500rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin后取沉淀。加入去離子水復(fù)溶，定容到250mL，得待測樣品液。
[0037]取待測樣品液，采用硫酸-苯酚法測定多糖。多糖含量的計(jì)算按照圖2混合單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y2=5.9833x-0.0231 (R2=0.9984 )計(jì)算。其中混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品中各單糖的摩爾比例:甘露糖:葡萄糖醛酸:氨基半乳糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖=43:4:1:8:21:19:5
[0038]實(shí)施例2
[0039]取5克決明子粉碎過40目篩，得到樣品決明子粉料。
[0040]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0041]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0042]PVPP/醇沉處理:按濃度2g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌2小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液三倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4500rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin取沉淀。加入去離子水復(fù)溶,定容到250mL,得待測樣品液。
[0043]取待測樣品液，采用硫酸-苯酚法測定多糖。多糖含量的計(jì)算按照圖2混合單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y3=6.095x-0.0052 (R2=0.9969)計(jì)算。其中混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品中各單糖的摩爾比例為甘露糖:葡萄糖:半乳糖:木糖=43:8:21:19。
[0044]實(shí)施例3
[0045]取5克決明子粉碎過40目篩，得到樣品決明子粉料。
[0046]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min。倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0047]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0048]PVPP/醇沉處理:按濃度2g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌2小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液三倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4500rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin取沉淀。加入去離子水復(fù)溶,定容到250mL,得待測樣品液。
[0049]取待測樣品液，采用硫酸-苯酚法測定多糖。多糖含量的計(jì)算按照圖2混合單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y2=5.9833x-0.0231 (R2=0.9984 )計(jì)算。其中混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品中各單糖的摩爾比例:甘露糖:葡萄糖醛酸:氨基半乳糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖=43:4:1:8:21:19:5。
[0050]實(shí)施例4
[0051]取5克決明子粉碎過40目篩，得到樣品決明子粉料。
[0052]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0053]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0054]PVPP處理:按濃度0.5g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌3小時后，過濾，合并濾液，定容到250mL，得待測樣品液。
[0055]取待測樣品液，采用硫酸-苯酹法測定多糖，F(xiàn)olin-Ciocalteau(FC)法測量總多酹物質(zhì)，采用Bicinchoninic acid(BCA)法測定蛋白質(zhì)。多糖、總多酹、蛋白質(zhì)濃度分別表示為在波長490nm、765nm、562nm的吸光度。結(jié)果見圖1。
[0056]實(shí)施例5
[0057]取5克決明子粉碎過40目篩，得到樣品決明子粉料。
[0058]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0059]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0060]PVPP/醇沉處理:按濃度0.5g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌2小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液3倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4500rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin取沉淀。加入去離子水復(fù)溶,定容到250mL,得待測樣品液。
[0061]取待測樣品,采用硫酸-苯酹法測定多糖，F(xiàn)olin-Ciocalteau (FC)法測量總多酹物質(zhì)，采用Bicinchoninic acid(BCA)法測定蛋白質(zhì)。多糖、總多酹、蛋白質(zhì)濃度分別表示為在波長490nm、765nm、562nm的吸光度。結(jié)果見圖1。
[0062]實(shí)施例6
[0063]取5克決明子粉碎過80目篩，得到樣品決明子粉料。
[0064]按照料液比1:30 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0065]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:20(g/mL)，用100°C熱水對脫脂粉料進(jìn)行提取I小時，合并濾液獲得提取液。[0066]PVPP/醇沉處理:按濃度5g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌I小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液3倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4500rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin取沉淀。加入去離子水復(fù)溶,定容到250mL,得待測樣品液。
[0067]取待測樣品液，采用硫酸-苯酚法測定多糖。多糖含量的計(jì)算按照圖2混合單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y2=5.9833x-0.0231 (R2=0.9984 )計(jì)算。其中混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品中各單糖的摩爾比例:甘露糖:葡萄糖醛酸:氨基半乳糖:葡萄糖:半乳糖:木糖:阿拉伯糖=43:4:1:8:21:19:5。
[0068]對比例I
[0069]取5克決 明子粉碎過20目篩，得到樣品決明子粉料。
[0070]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0071]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0072]PVPP/醇沉處理:按濃度0.5g/100ml往提取液中添加PVPP，慢速攪拌I小時后，過濾，合并濾液。在濾液加入相當(dāng)于濾液三倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4000rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin后取沉淀。加入去離子水復(fù)溶，定容到250mL，得待測樣品液。
[0073]取待測樣品液，采用硫酸-苯酚法測定多糖。多糖含量按照圖2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y1=?.525x+0.0113 (R2=0.9994)計(jì)算。
[0074]對比例2
[0075]取5克決明子粉碎過40目篩，得到樣品決明子粉料。
[0076]按照料液比1:15 (w/w)用丙酮浸泡決明子粉料,振搖30min,靜置30min ;倒去上層清液，再按相同料液比重復(fù)操作，至上層無色，固液分離得決明子脫脂粉料。
[0077]經(jīng)丙酮處理過的決明子脫脂粉料按照料液比1:35 (g/mL)，用80°C熱水提取3小時，合并濾液得提取液。
[0078]醇沉處理:在提取液加入相當(dāng)于提取液三倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，4000rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin后取沉淀。加入去離子水復(fù)溶,定容到250mL,得待測樣品液。
[0079]取待測樣品液,采用硫酸-苯酹法測定多糖，F(xiàn)olin-Ciocalteau(FC)法測量總多酹物質(zhì)，采用Bicinchoninic acid(BCA)法測定蛋白質(zhì)。多糖、總多酹、蛋白質(zhì)濃度分別表示為在波長490nm、765nm、562nm的吸光度。結(jié)果見圖1。
[0080]對照例
[0081](I)稱取5.0g過40目的決明子樣品，用800目濾布包好，封口，置于安裝好的索氏提取器中在水浴溫度50°C的條件下，以石油醚(30-60°C)回流脫脂6h，取出決明子樣品放入60°C的烘箱內(nèi)干燥4h。
[0082](2)將脫脂干燥后的決明子樣品置于圓底燒瓶中，加水100ml，在80°C水浴并磁力攪拌3h，合并濾液。
[0083](3)準(zhǔn)確稱取木瓜蛋白酶0.1g (決明子樣品干重1/50的量)，加入到濾液中，置于60°C恒溫水浴振蕩器中，設(shè)置振蕩速度“I檔”，緩慢振蕩2h，冷卻至室溫。
[0084](4 ) sevaga法除蛋白:Sevaga液:按氯仿:正丁醇=4:1的比例，配制sevaga液1000mL,備用。在上述酶解的糖提取液中加入34mL的sevaga液(按1/3體積提取液的量)，在恒溫振蕩器上快速振蕩15min,將混合液體轉(zhuǎn)入50ml的離心管中，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，分相后取其上清液，再重復(fù)上述“sevaga法除蛋白”的過程，直至上下兩相間無乳白色絮狀沉淀，以除盡提取液中的植物蛋白。
[0085](5)雙氧水脫色過程:測量上述經(jīng)“sevaga法除蛋白”后的提取液體積，按其體積加入15% (V/V)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%的H2O2,置于60°C水浴中反應(yīng)6h (注:水溫不可超過60°C )。 [0086](6)樣品多糖成分的醇沉過程:將脫色后的提取液倒入500ml的燒杯中，用恒壓滴液漏斗緩慢滴入無水乙醇(按其體積的3倍)，同時置于磁力攪拌器上快速攪拌，室溫靜置4小時,4000rpm轉(zhuǎn)速下離心IOmin取沉淀。
[0087](7)往步驟(6)所得沉淀中加入9ml丙酮,于超聲清洗器中超聲5min,再以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，重復(fù)一次。在離心后的殘?jiān)屑尤?ml無水乙醚，超聲洗滌5min，離心，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心lOmin，重復(fù)洗滌一次，將離心后所得的殘?jiān)玫獨(dú)獯蹈?，稱重，密封，冰箱中保存，備用，即得到精制決明子多糖。多糖質(zhì)量將步驟(4)到(6)、(8)的損失率(23.4%)考慮在內(nèi)ο
[0088]實(shí)施例4、5及對比例2的測定多糖、總多酚以及蛋白質(zhì)濃度的吸光度值如圖1所示。由圖1可知PVPP對多酚和蛋白質(zhì)均有吸附作用，效果相當(dāng)于醇沉處理。同時使用PVPP和醇沉，可以大大降低多酚和蛋白質(zhì)物質(zhì)，最大程度消除了干擾物質(zhì)對多糖測定結(jié)果的影響。
[0089]實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對比例I以及對照例的多糖含量測定結(jié)果及相對差值如表1所示:
[0090]表1多糖含量測定結(jié)果及相對差值
【權(quán)利要求】
1.一種決明子多糖定量檢測方法，其特征在于包括以下步驟: (1)粉碎:將待測決明子進(jìn)行粉碎，過20?80目篩得決明子粉料，干燥后備用； (2)脫脂去色:用丙酮浸泡決明子粉料，振搖30min后，靜置30min，倒去上層清液；重復(fù)該步驟至上層清液無色后，固液分離得脫脂粉料； (3)熱水提取:用80?100°C熱水對脫脂粉料進(jìn)行提取I?3小時，合并濾液獲得提取液； (4)純化處理: a.聚乙烯聚吡咯烷酮處理:按0.5?5g/100mL的濃度往步驟(3)的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌I?3小時后，過濾，合并濾液；將濾液加入去離子水，定容，得待測樣品液；或， b.聚乙烯聚吡咯烷酮/醇沉處理:按0.5?5g/100mL的濃度往步驟(3)的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌I?3小時后，過濾，合并濾液；加入相當(dāng)于濾液3倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，離心后取沉淀物；往沉淀物加入去離子水復(fù)溶，定容，得待測樣品液； (5)測定:以混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以苯酚-硫酸法測定待測樣品液的多糖濃度，即為待測決明子的多糖濃度； 所述混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品是由混合單糖配制而成，所述混合單糖包括摩爾百分?jǐn)?shù)90%以上的甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖；甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的摩爾比例為43:8:21:19。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(I)所述的干燥后備用是將決明子粉料在60°C下干燥6小時，然后置于干燥器中備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(2)所述的決明子粉料與丙酮的料液重量比為1: (15?30)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(3)所述的脫脂粉料與熱水的料液比為1: (20?35) (g/mL)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(5)所述混合單糖在配成混合單糖標(biāo)準(zhǔn)樣品前先于102°C烘干至恒重后備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(5)所述混合單糖還包括葡萄糖醛酸、氨基半乳糖和阿拉伯糖；所述甘露糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖的摩爾比為43:4:1:8:21:19:5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的決明子多糖定量檢測方法，其特征在于:步驟(5)所述的苯酚-硫酸法包括如下步驟:取ImL待測樣品液加入具塞試管中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的苯酚溶液2mL，混勻，緩慢加入7mL濃硫酸，混勻，沸水浴15min，取出，冰水冷卻至室溫，在490nm處測定吸光值；根據(jù)吸光值及標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品液濃度。
【文檔編號】G01N21/31GK103728263SQ201310754301
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】姚松君, 高新開, 熊斌 申請人:無限極（中國）有限公司