一種參芪扶正注射液核磁共振質(zhì)量控制方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種采用質(zhì)子核磁共振指紋圖譜結(jié)合多成分含量測(cè)定的方法來(lái)控制參芪扶正注射液中氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)的質(zhì)量。本發(fā)明采用定性、定量的質(zhì)子核磁共振指紋圖譜技術(shù)，建立一種針對(duì)參芪扶正注射液中氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)化合物的質(zhì)量控制方法，在工業(yè)生產(chǎn)中可與HPLC指紋圖譜聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)對(duì)參芪扶正注射液產(chǎn)品的全面質(zhì)量控制。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種參苗扶正注射液核磁共振質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及參芪扶正注射液的質(zhì)量控制方法，特別涉及采用質(zhì)子核磁共振指紋圖譜結(jié)合多成分含量測(cè)定的方法來(lái)控制參芪扶正注射液中氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)的質(zhì)量。
【背景技術(shù)】
[0002]參芪扶正注射液是麗珠集團(tuán)利民制藥廠研制開(kāi)發(fā)成功的國(guó)家二類(lèi)中藥新藥參芪扶正注射液，該藥為國(guó)內(nèi)首創(chuàng)的純中藥澄明大輸液，1999年11月獲國(guó)家藥品監(jiān)督管理局正式生產(chǎn)批文。參芪扶正注射是由傳統(tǒng)補(bǔ)氣藥黨參、黃芪組成的復(fù)方制劑，具有益氣扶正之功效，用于肺脾氣虛引起的神疲乏力，少氣懶言，自汗眩暈；肺癌、胃癌見(jiàn)上述癥候者的輔助治療。
[0003]在2009年I月28日公開(kāi)的200710136382.0號(hào)中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)中報(bào)道了有關(guān)參芪扶正注射液的質(zhì)量控制方法，按照該專(zhuān)利公開(kāi)中記載的方法，建立起了參芪扶正注射液的HPLC指紋圖譜。該專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)中記載的方法據(jù)盡管有許多優(yōu)點(diǎn)，但仍存在不足，采用高效液相色譜法(HPLC)分析方法對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行研究，需要經(jīng)過(guò)提取、精制等預(yù)處理，操作較煩瑣，且效率低。而且ODS色譜柱在分離過(guò)程中，性較大的水溶性成分損失被。因此，HPLC指紋圖譜技術(shù)不能檢測(cè)到參芪扶正注射液中的氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)化合物。
[0004]近年來(lái)由于現(xiàn)代超導(dǎo)高磁場(chǎng)的脈沖Fourier變換核磁共振譜儀的應(yīng)用，核磁共振技術(shù)應(yīng)用于天然產(chǎn)物分析已日趨成熟。核磁共振定量分析法操作簡(jiǎn)便，樣品用量少，定性鑒定和定量分析同步完成，無(wú)須被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，只須一般標(biāo)準(zhǔn)品(內(nèi)標(biāo))即可完成定量分析，分析速度和精密度可以接近HPLC法。
[0005]所以，本發(fā)明采用定性、定量的質(zhì)子核磁共振指紋圖譜技術(shù)，建立一種針對(duì)參芪扶正注射液中氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)化合物的質(zhì)量控制方法，在工業(yè)生產(chǎn)中可與HPLC指紋圖譜聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)對(duì)參芪扶正注射液產(chǎn)品的全面質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種參芪扶正注射液的1H-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，可以有效解決參芪扶正注射液中氨基酸、有機(jī)酸和糖類(lèi)化合物的含量測(cè)定問(wèn)題，為參芪扶正注射液全面質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。
[0007]本發(fā)明是通過(guò)下列步驟實(shí)現(xiàn)的:
[0008](I)參芪扶正注射液1H-NMR指紋圖譜的建立和定性鑒別
[0009]①參芪扶正注射液樣品溶液的制備
[0010]參芪扶正注射液樣品凍干后精密稱(chēng)取10mg，加入0.6ml D20(含內(nèi)標(biāo)TSP0.0Olg /ml),轉(zhuǎn)移至5mm核磁管中,加封直接用于1H-NMR測(cè)試。
[0011]②1H-NMR指紋圖譜的測(cè)定
[0012]將核磁管置于核磁共振儀中，采用水峰抑制脈沖序列測(cè)定參芪扶正注射液樣品溶液的1H-NMR指紋圖譜和對(duì)照品溶液的1H-NMR圖譜。[0013]優(yōu)化的測(cè)試參數(shù)及條件為:抑水峰序列zgcppr，觀測(cè)頻率600.23MHz，測(cè)定溫度298K，譜寬7211.5Hz, 90°脈沖寬度13.87 μ s，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)65536，掃描次數(shù)16次，延遲時(shí)間2s，接受增益114。
[0014]③質(zhì)子信號(hào)峰的定性鑒別
[0015]參芪扶正注射液對(duì)照品溶液的1H-NMR圖譜上質(zhì)子信號(hào)峰分布在δ 0-5.5之間，其中δ 0.0-3.2是氨基酸和有機(jī)酸質(zhì)子特征信號(hào)區(qū)，δ 3.3-5.5是糖基質(zhì)子特征信號(hào)區(qū)(圖1)。根據(jù)質(zhì)子信號(hào)峰的化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參芪扶正注射液的二維核磁圖譜信息和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的1H-NMR圖譜，共鑒定出17個(gè)氨基酸類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)和糖類(lèi)化合物，分別
為:
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種參芪扶正注射液的1H-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，包括以下步驟: a.稱(chēng)取凍干參芪扶正注射液樣品，加入含內(nèi)標(biāo)TSP0.0Olg / ml的D2O,轉(zhuǎn)移至核磁管中后，加封用于1H-NMR測(cè)試，1H-NMR測(cè)試是采用水峰抑制脈沖序列測(cè)定參芪扶正注射液樣品溶液的1H-NMR指紋圖譜和對(duì)照品溶液的1H-NMR圖譜； b.質(zhì)子信號(hào)峰的定性鑒別； c.選擇各個(gè)化合物中獨(dú)立的特征質(zhì)子信號(hào)峰作為定量峰，TSP為內(nèi)標(biāo)化合物，應(yīng)用以下公式測(cè)定參芪扶正注射液中蔗糖、葡萄糖、焦谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、琥珀酸、蘇氨酸、蘋(píng)果酸的含量:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述步驟a中稱(chēng)取IOmg的凍干參芪扶正注射液樣品，加入含內(nèi)標(biāo)TSP0.0Olg / ml的0.6ml D2O,轉(zhuǎn)移至5mm核磁管測(cè)定。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述步驟b中質(zhì)子信號(hào)峰的定性鑒別為:根據(jù)質(zhì)子信號(hào)峰的化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參芪扶正注射液對(duì)照樣品的二維核磁圖譜信息和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的IH-NMR圖譜鑒定出蔗糖、葡萄糖、果糖、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、乙酸、脯氨酸、焦谷氨酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸、天門(mén)冬氨酸、丙二酸、氨基丁酸和甲酸共17個(gè)化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述步驟d中采用MetresNova軟件對(duì)得到的1H-NMR指紋圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)處理包括相位調(diào)整、基線校正、分段積分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述步驟d中采用MetresNova軟件對(duì)全譜進(jìn)行分段積分，以0.04為最小間隔積分，得到500個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，即每段化學(xué)位移值下的相對(duì)峰面積積分值，與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦值法計(jì)算定性相似度，相似度大于0.95則認(rèn)為注射液合格。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的參芪扶正注射液的IH-NMR指紋圖譜質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述步驟a中1H-NMR的測(cè)試參數(shù)及條件為:抑水峰序列zgcppr，觀測(cè)頻率600.23MHz，測(cè)定溫度298K，譜寬7211.5Hz, 90。脈沖寬度13.8700 μ S，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)65536，掃描次數(shù)16次，延遲時(shí)間2s，接受增益114。
【文檔編號(hào)】G01N24/08GK103884731SQ201310756866
【公開(kāi)日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2013年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月28日
【發(fā)明者】曹暉, 姜苗苗, 許磊, 黃文華, 劉東來(lái), 謝海燕 申請(qǐng)人:麗珠集團(tuán)利民制藥廠, 珠海現(xiàn)代中藥高科技有限公司