專利名稱：一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，屬于儀器科學、生物醫(yī)學工程等技術領域，特別涉及免疫層析試條的定量檢測技術。
背景技術：
現(xiàn)有的免疫層析定量檢測儀專利以闡述定量檢測原理為主，大多是基于光反射原理，米用一定波長和強度的光源照射至免疫層析試條測試窗口，以光纖作為光信號傳輸媒介，通過光電傳感器件(如光電二極管、光電三極管、CCD、CIS、CMOS等)將試條測試窗口中測試線、質控線及空白區(qū)域三個區(qū)域的反射光信號轉變?yōu)殡娦盘?，建立起電信號與被測液濃度之間的關系。專利號為ZL 200710037553.4的一種層析試條的檢測方法及其檢測裝置，它是以熒光微粒為標記物，掃描儀產(chǎn)生的激發(fā)光逐點掃描層析試條的測試區(qū)；檢測儀以平行于測試區(qū)條帶的線狀激發(fā)光激發(fā)，通過時間分辨熒光檢測方法檢測層析試條測試點的熒光強度，得到測試點的序列測試值，繪制擬合曲線，計算測試值曲線波峰的面積確定熒光信號強度。專利號為ZL 03137101.9的一種膠體金免疫層析檢測裝置和檢測方法，它是以膠體金作為標志物，包被有質控帶和檢測帶的試條條固定在試條板上，數(shù)據(jù)處理裝置讀取IC卡上參數(shù)后控制掃描裝置對試條條掃描，并對質控帶和檢測帶光密度值進行識別、濃度計算和技術分析，并將檢測結果傳輸給輸出裝置。專利號為ZL 200710065332.8的一種多參數(shù)免疫層析試條定量檢測儀，它是采用光纖作為光傳輸媒介，通過CCD同時檢測測試線和質控線的光學信號，分析吸收率，得到樣品溶液中待測物濃度，并可對多聯(lián)免疫層析試條進行定量測量。專利號為ZL 200610029498.X的一種金標免疫試紙條的反射式光度計，它設計了一套由多個照明光源和聚焦鏡組成的照明光路，以及準直鏡、濾光片、聚焦鏡和狹縫光欄構成的接收光路。通過光電轉換器件和前置放大器件，由計算機數(shù)據(jù)采集卡動態(tài)檢測免疫層析的反應過程。以上專利技術以光電轉換為基礎，運用不同手段實現(xiàn)了免疫層析試條的定量檢測，說明了技術上的可行性。然而，從儀器研制的角度來看，上述專利均未涉及免疫層析試定量檢測儀在生產(chǎn)和臨床使用中的校準問題。校準環(huán)節(jié)的缺失將直接影響到定量測試儀器檢測結果的一致性和準確性。免疫層析試條上的抗原抗體結合是一個動態(tài)反應過程。在毛細管原理和虹吸作用下，層析過程沒有終止時間。試條測試線的顏色深淺隨著時間推移而漸變。不僅如此，待測液粘稠度以及硝酸纖維膜的孔徑?jīng)Q定了待測液在試條上的爬行速度，直接影響到抗原抗體的結合程度和硝酸纖維膜的泛白程度，導致免疫層析試條具有一定的批內變異和批間變異?，F(xiàn)階段臨床上和科研中使用的免疫層析定量試條的批內變異和批間變異系數(shù)一般大于5%。從可重復性和準確性的角度考慮，采用真實反應的免疫層析試條來校準定量檢測儀顯然不可行。必須發(fā)明一種可重復、易于獲取和保存、與真實試條顏色接近的校準試條來執(zhí)行免疫層析試條定量檢測儀的校準工作。

實用新型內容本實用新型為解決免疫層析試條定量檢測儀的校準問題，提供一種免疫層試條定量檢測儀的校準試條及其制作方法，彌補儀器校準環(huán)節(jié)的缺失，確保檢測結果的一致性和準確性。一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，包括試條外殼，所述試條外殼具有測試窗口，所述試條外殼內腔設置有校準試條樣板，所述校準試條樣板包括設置有硝酸纖維素膜的塑料基板，所述塑料基板的顯色窗口中設置有測試線和質控線，所述測試線和質控線由彩色打印機按照真實免疫層析試條采集到的尺寸和顏色打印在硝酸纖維素膜上。上述測試線顏色由淺至深應至少具有5個梯度。上述免疫層析試條定量檢測儀的校準試條的制作方法按以下步驟進行:步驟1:選取一批免疫層析試條，用含有不同濃度抗原的免疫標準品或者用已知抗原濃度的血清依次加樣；步驟2:待免疫層析試條反應時間到后，分別挑選出光密度值(0D值)檢測結果為
1.5 ±10%，3.5 ±8%，5.5 ±5%，8.5 ±3%，12.5 ±2% 的免疫層析試條共 5 批，編號為 I 至 5號，每批試條不少于20條；步驟3:分別剪去或揭去試條上的吸水紙，終止免疫層析試條的層析反應，放置于陰涼處晾干；步驟4:晾干后，用圖像采集裝置依次獲取每批免疫層析試條測試窗口中的圖像，包括測試線、質控線和硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡稱NC膜)空白區(qū)域這三部分。步驟5:在電腦中采用圖像處理軟件對測試窗口中的測試線、質控線和硝酸纖維素膜圖像分別取色，獲取各顯色區(qū)域的尺寸和顏色數(shù)據(jù)，并采用圖像處理方法進行處理，依據(jù)各自尺寸大小，在圖像處理軟件中繪制出每批試條測試窗口中相應的圖像；步驟6:采用彩色打印機在附有硝酸纖維素膜的塑料基板上按對應尺寸和顏色分別打印出I至5號免疫層析試條所對應的校準圖像，并按對應位置將打印出有校準圖像的塑料基板放置于免疫層析試條的外殼中，制作成校準試條。這里需要說明的是:所述圖像采集裝置為彩色掃描儀或數(shù)碼相機。所述圖像采集裝置的光學分辨率不低于2400X4800dpi。所述圖像處理方法包括漸變和銳化。所述彩色打印機的打印分辨率不小于9600X 2400dpi。當然，為了提高校準試條的產(chǎn)品質量，該制作方法還包括校準試條的檢驗步驟，所述檢驗步驟為用免疫層析試條測試儀測試I至5號原始免疫層析試條對應的校準試條，其校準試條與原始免疫層析試條的光密度值檢測結果的偏差分別不大于10%，8%，5%，3%，2% ；每個顏色梯度的校準試條按同樣方法制作10條，其變異系數(shù)分別不大于5%，4%，2%，1%，1%。本實用新型的有益效果在于:本實用新型為免疫層析定量檢測儀提供一種通用的校準方法，以解決免疫層析試條批內、批間差異較大，缺少儀器校準方法的問題。本實用新型的實施可以提高免疫層析試條定量檢測儀實際使用中的一致性和準確性。同時，本實用新型具有可重復性好、易于獲取、準確性高、成本低廉等優(yōu)點。

圖1為免疫層析試條定量檢測儀的校準試條的結構視圖。圖2為免疫層析試條定量檢測儀的校準試條的俯視圖。標號說明:1 一加樣孔 2 —樣品墊 3 —玻璃纖維膜 4 一塑料基板 5 —測試線 6—硝酸纖維膜 7—測試窗口 8 —質控線 9 一吸水紙 10 —試條外殼。
具體實施方式
為詳細說明本實用新型的技術內容、構造特征、所實現(xiàn)目的及效果，以下結合實施方式并配合附圖詳予說明。—種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，可以用來校準由納米金顆粒、高分子納米熒光微粒等長壽命物質作為顯色標記物的免疫層析試條定量檢測儀。它包括試條外殼10，所述試條外殼10具有測試窗口 7，所述試條外殼10內腔設置有校準試條樣板，所述校準試條樣板包括設置有硝酸纖維素膜6的塑料基板4，所述塑料基板4的顯色窗口中設置有測試線5和質控線8，所述測試線5和質控線8由彩色打印機按照真實免疫層析試條采集到的尺寸和顏色打印在硝酸纖維素膜6上。該校準試條的測試線顏色由淺至深應至少具有5個梯度，即校準試條至少由5塊組成；測試線和質控線的顏色(RGB、HSV等)由對應顏色的真實試條經(jīng)過掃描儀、數(shù)碼相機等圖像采集裝置轉變?yōu)閿?shù)字圖像，在計算機上由圖像處理軟件處理后得到；每個梯度顏色應采集不少于20根同一顏色范圍的試條圖像來確定；測試線和質控線由彩色打印機按照真實免疫層析試條的尺寸打印在硝酸纖維素膜上；用于打印的硝酸纖維素膜固定在塑料基板(4)之上；校準試條的外殼和與之對應的免疫層析試條外殼一致。一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條的制作方法，該制作方法按以下步驟進行:步驟1:配置具有一定濃度梯度的免疫標準品溶液共5組，或者選用已知抗原濃度的血清5份，按免疫層析試條說明書中的規(guī)定劑量向加樣孔I中加樣；步驟2:待免疫層析試條反應時間到后，分別挑選OD值檢測結果為低(1.5±10%)，中低(3.5±8%)，中(5.5±5%)，中高(8.5±3%)，高(12.5±2%)的免疫層析試條5批，每批至少20條；步驟3:分別剪去或揭去免疫層析試條右側吸水紙9，終止免疫層析試條上的層析反應，放置于陰涼處晾干。步驟4:用彩色掃描儀或數(shù)碼相機(光學分辨率不低于2400X4800dpi)分別獲取免疫層析試條的測試窗口 7圖像，包含:測試線5、硝酸纖維膜6和質控線8。步驟5:在電腦中采用PhotoShop、繪圖板等圖像編輯軟件對測試窗口 7中的測試線5、硝酸纖維膜6和質控線8分別取色，獲取各顯色區(qū)域的顏色數(shù)據(jù)(RGB或HSV)。步驟6:對每批試條測試窗口中的測試線5、硝酸纖維膜6和質控線8圖像采用漸變、銳化等圖像處理方法處理，依據(jù)各自尺寸大小，在繪圖軟件中繪制出每批試條測試窗口中相應的圖像。步驟7:用彩色打印機(打印分辨率不小于:9600X2400dpi)在附有硝酸纖維膜6上分別打印出I至5號試條對應的試條圖像，并按對應位置將打印出的試條圖像放置于試條外殼7中。步驟8:用免疫層析試條測試儀測試與I至5號試條對應的校準試條，其OD值檢測結果與原始試條OD值的偏差不大于表I中的對應數(shù)值。步驟9:每個顏色梯度的校準試條按同樣方法制作10條，其變異系數(shù)不大于表I
對應數(shù)值。
權利要求1.一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，包括試條外殼，所述試條外殼具有測試窗口，其特征在于:所述試條外殼內腔設置有校準試條樣板，所述校準試條樣板包括設置有硝酸纖維素膜的塑料基板，所述塑料基板的顯色窗口中設置有測試線和質控線，所述測試線和質控線由彩色打印機按照真實免疫層析試條采集到的尺寸和顏色打印在硝酸纖維素膜上。
2.根據(jù)權利要求1所述的免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，其特征在于:測試線顏色由淺至深應至少具有5個梯度。
專利摘要本實用新型涉及一種免疫層析試條定量檢測儀的校準試條，該校準試條可以用來校準由納米金顆粒、高分子納米熒光微粒等長壽命物質作為顯色標記物的免疫層析試條定量檢測儀。校準試條的顯色窗口包含有顯色的測試線、質控線及除此之外的硝酸纖維素膜空白區(qū)域。測試線顏色由淺至深應至少具有5個梯度；測試線和質控線的顏色由對應顏色的真實試條經(jīng)過掃描儀、數(shù)碼相機等圖像采集裝置轉變?yōu)閿?shù)字圖像，在計算機上由圖像處理軟件處理后得到；每個梯度顏色應采集不少于20根同一顏色范圍的真實試條圖像來確定；測試線和質控線由彩色打印機按照真實免疫層析試條的尺寸和對應圖像的顏色打印在硝酸纖維素膜上；用于打印的硝酸纖維素膜固定在塑料基板之上。
文檔編號G01N33/558GK203037656SQ201320002450
公開日2013年7月3日 申請日期2013年1月5日 優(yōu)先權日2013年1月5日
發(fā)明者高躍明, 杜民, 柯棟忠, 陳建國, 吳元樹 申請人:福州大學