專利名稱：賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試紙卡，尤其涉及一種賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡，應(yīng)用免疫學(xué)原理，通過(guò)膠體金的免疫反應(yīng)再借助免疫層析技術(shù)達(dá)到檢測(cè)賽庚啶目的，應(yīng)用于快速檢測(cè)飼料中的賽庚啶。
背景技術(shù)：
賽庚啶在臨床上常用作人用抗過(guò)敏藥，對(duì)抗體內(nèi)組胺對(duì)血管、支氣管平滑肌的作用，從而消除過(guò)敏癥狀。賽庚啶還能對(duì)抗緩激膚和多巴胺的效應(yīng)，也有一定的中樞鎮(zhèn)靜作用。由于賽庚啶具有增進(jìn)食欲、中樞神經(jīng)鎮(zhèn)靜的作用，近年發(fā)現(xiàn)在飼料產(chǎn)品中添加賽庚啶。但賽庚啶對(duì)人體健康具有一定的危害性，對(duì)兒童的作用更為明顯，高濃度可直接引發(fā)昏迷、呼吸急促、全身無(wú)力等中毒癥狀，嚴(yán)重者則直接導(dǎo)致兒童死亡。因此農(nóng)業(yè)部于2002年就明令禁止在飼料中添加賽庚啶。檢測(cè)飼料中殘留的賽庚啶的常用方法有高效毛細(xì)管電泳法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法及高效液相色譜法。這幾種方法靈敏度較高，檢測(cè)周期長(zhǎng)，需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)的技術(shù)人員，且由于其儀器昂貴，操作程序較繁瑣，一般基層生產(chǎn)單位無(wú)法普及使用，因此適用性不強(qiáng)。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡，用來(lái)檢測(cè)飼料和豬尿中賽庚啶的添加情況，是現(xiàn)今敏感度、特異性最好的賽庚啶殘留篩查方法，而且不需要專門設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快速，10分鐘可完成檢測(cè)，適合基層生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)的普及使用，該試紙卡具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快速、反應(yīng)靈敏、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供一種賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡，所述試紙卡包括樣品處理墊、聚酯纖維膜、吸水紙、層析膜和底板；在層析膜的起始端至末端依次疊合有樣品處理墊，金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜，包被賽庚啶抗原的檢測(cè)線，質(zhì)控線，以及吸水紙；所述層析膜粘貼在底板上。進(jìn)一步地，所述試紙卡還包括上外殼和下外殼，所述層析膜放置在上外殼和下外殼之間。進(jìn)一步地，所述層析膜粘貼在底板中間。進(jìn)一步地，所述上外殼上設(shè)有標(biāo)簽、層析窗口、加樣孔；所述加樣孔位于樣品處理墊的位置上方；所述層析窗口位于檢測(cè)線和質(zhì)控線的位置上方。進(jìn)一步地，所述聚酯纖維膜與樣品處理墊的一端疊合。進(jìn)一步地，所述層析膜與樣品處理墊、聚酯纖維膜和吸水紙疊合處覆有具有粘性的材料，將層析膜與樣品處理墊、聚酯纖維膜和吸水紙粘合在一起。本實(shí)用新型是通過(guò)以下技術(shù)方案和工作原理實(shí)現(xiàn)的?？官惛た贵w標(biāo)記在指示劑顆粒上，標(biāo)記物附著在聚酯纖維膜上；將賽庚啶完全抗原包被并固定層析膜的檢測(cè)線(T)上，層析膜粘貼在底板上，始端粘貼樣品處理墊以處理樣品，末端粘貼吸水紙助層析完成。將試紙條鑲嵌入塑卡中，組成試劑盒。檢測(cè)時(shí)，由于被測(cè)樣本中賽庚啶抗原和復(fù)溶的金標(biāo)記抗體發(fā)生了免疫反應(yīng)，此時(shí)混合液層析到檢測(cè)區(qū)上時(shí)包被抗原無(wú)法競(jìng)爭(zhēng)到標(biāo)記抗體，檢測(cè)區(qū)內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)檢測(cè)線，即陽(yáng)性，相反如被測(cè)樣本沒(méi)有賽庚啶抗原，則標(biāo)記的抗體層析到檢測(cè)區(qū)時(shí)和包被膜上的抗原結(jié)合形成紫紅線，即陰性。為了證明試劑有效性和易判讀，分別在質(zhì)控線(C)包被羊抗兔IgG為質(zhì)控線，所以不管結(jié)果怎樣質(zhì)控線C始終出現(xiàn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果在于:本實(shí)用新型的賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡與儀器檢測(cè)同樣具有高靈敏度和高特異性，但不需要專門設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快速，10分鐘可完成檢測(cè)，檢測(cè)成本低廉，適合飼料廠的普及使用。用免疫層析法生產(chǎn)賽庚啶快速檢測(cè)試紙卡，用來(lái)檢測(cè)飼料中賽庚啶的添加情況，是現(xiàn)今敏感度、特異性最好的賽庚啶添加篩查方法，本方法具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快速、反應(yīng)靈敏度高、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)、假陽(yáng)性、假陰性率低的特點(diǎn)，無(wú)需特殊儀器及專業(yè)技術(shù)人員，檢測(cè)快速，檢測(cè)結(jié)果易于觀察，檢測(cè)費(fèi)用低廉，貯存和運(yùn)輸方便等優(yōu)點(diǎn)。十分適合各類檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)及生產(chǎn)企業(yè)在現(xiàn)場(chǎng)快速篩查賽庚啶的違法添加情況。

圖1是本實(shí)用新型的實(shí)施例的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是本實(shí)用新型的實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果示意圖；其中，圖2A代表檢測(cè)結(jié)果為陰性的示意圖；圖2B代表檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的示意圖；圖2C代表檢測(cè)結(jié)果為無(wú)效的示意圖。圖中附圖標(biāo)記說(shuō)明如下:1.上外殼、2.下外殼、3.底板、4.標(biāo)簽、5.層析窗口、6.加樣孔、7.吸水紙、8.樣品處理墊、9.金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜、10.檢測(cè)線、11.質(zhì)控線、12.NC膜(即硝酸纖維素膜，nitrocellulose filter membrane, SP層析膜)。
具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡在圖1中，將NC膜12 (即層析膜)黏貼在底板3中間，在NC膜12上包被檢測(cè)線10和質(zhì)控線11，NC膜12的起始端粘貼樣品處理墊8，依次再粘貼金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜9，NC膜12的末端粘貼吸水紙7。將粘貼完整的NC膜12放置在上外殼1，下外殼2之間蓋緊。上外殼I上還設(shè)有標(biāo)簽4、層析窗口 5、加樣孔6。加樣孔6位于樣品處理墊8的位置上方，用于加樣；層析窗口 5位于檢測(cè)線10和質(zhì)控線11的位置上方，用于觀察檢測(cè)線10和質(zhì)控線11的情況；標(biāo)簽4位于上外殼I的任意位置(例如，本實(shí)施例中如圖1所示，標(biāo)簽4位于吸水紙7的位置上方)，用于標(biāo)記該試紙條的用途等。本實(shí)用新型賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡的制備及檢測(cè)方法，包括如下步驟:1.將一定濃度的賽庚唳偶聯(lián)結(jié)合物(即賽庚唳抗原)和羊抗兔IgG分別包被于硝酸纖維素膜(即NC膜12)上的檢測(cè)線T (即檢測(cè)線10)和質(zhì)控線C (即質(zhì)控線11)的位置。例如，將賽庚唳單克隆抗體稀釋至濃度lmg/ml,將羊抗鼠IgG稀釋至濃度2mg/ml,將兩種溶液劃線于NC膜上的檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，形成檢測(cè)線T (即檢測(cè)線10)和質(zhì)控線C (即質(zhì)控線11)。2.金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜的制備用檸檬酸三鈉還原四氯化金(即氯金酸)制備粒徑40 60nm膠體金，調(diào)節(jié)pH后每毫升膠體金和14 μ g抗賽庚啶抗體混合進(jìn)行標(biāo)記并在286nm下測(cè)0D。將OD稀釋到2，并到聚酯纖維膜上烘干，聚酯纖維膜上即附著金標(biāo)記抗賽庚啶抗體顆粒。3.將包被完成的硝酸纖維素膜(NC膜12)、樣品處理墊8、金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜9、吸水紙7 —起依次粘貼在底板3上。并切成3mm的試紙條。4.將試紙條裝配在試劑外殼底內(nèi)(即裝配在下外殼2內(nèi))，合上試劑外殼蓋(即合上上外殼I)組裝成賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡。5.檢測(cè)步驟:a.飼料樣本:稱取一定量的飼料，用稀釋液進(jìn)行溶解，離心取上清液，即得待檢樣品。豬尿樣本:直接取豬尿作為檢測(cè)樣本，若渾濁，則離心取上清液。b.取出試劑盒，平放在桌面上。c.用吸管吸取混合均勻的待檢樣品，滴加2-3滴于加樣孔6中，并開(kāi)始計(jì)時(shí)。d.在5分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。e.結(jié)果判定:圖2中，陽(yáng)性結(jié)果為質(zhì)控線C位置出現(xiàn)紅色線條，而檢測(cè)線T位置不顯示紅色線條時(shí)，說(shuō)明被檢樣品中有賽庚啶，判為陽(yáng)性(見(jiàn)圖2B);陰性結(jié)果為質(zhì)控線C位置出現(xiàn)紅色線條，檢測(cè)線T位置也出現(xiàn)紅色線條，說(shuō)明被檢樣品中沒(méi)有賽庚啶存在，判為陰性(見(jiàn)圖2A);如果檢測(cè)線T位置和質(zhì)控線C位置均不顯示紅色線條，則判為檢測(cè)無(wú)效(見(jiàn)圖2C)。`7.性能指標(biāo)靈敏度:應(yīng)用本實(shí)施例，賽庚啶濃度在0.lng/ml以上為陽(yáng)性。使用目的:本品用于篩查賽庚啶在用于飼料和豬尿的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，保障豬肉安全。
權(quán)利要求1.一種賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述試紙卡包括樣品處理墊、聚酯纖維膜、吸水紙、層析膜和底板；在層析膜的起始端至末端依次疊合有樣品處理墊，金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜，包被賽庚啶抗原的檢測(cè)線，質(zhì)控線，以及吸水紙；所述層析膜粘貼在底板上。
2.如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述試紙卡還包括上外殼和下外殼，所述層析膜放置在上外殼和下外殼之間。
3.如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述層析膜粘貼在底板中間。
4.如權(quán)利要求2所述的試紙卡，其特征在于，所述上外殼上設(shè)有標(biāo)簽、層析窗口、加樣孔；所述加樣孔位于樣品處理墊的位置上方；所述層析窗口位于檢測(cè)線和質(zhì)控線的位置上方。
5.如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述聚酯纖維膜與樣品處理墊的一端疊入口 ο
6.如權(quán)利要求1或5所述的試紙卡，其特征在于，所述層析膜與樣品處理墊、聚酯纖維膜和吸水紙疊合處覆有具有粘性的材料，將層析膜與樣品處理墊、聚酯纖維膜和吸水紙粘合在一 起。
專利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種賽庚啶免疫層析快速檢測(cè)試紙卡，所述試紙卡包括樣品處理墊、聚酯纖維膜、吸水紙、層析膜和底板；在層析膜的起始端至末端依次疊合有樣品處理墊，金標(biāo)記抗賽庚啶抗體聚酯纖維膜，包被賽庚啶抗原的檢測(cè)線，質(zhì)控線，以及吸水紙；所述層析膜粘貼在底板上。本實(shí)用新型不需要專門設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快速，10分鐘可完成檢測(cè)，適合養(yǎng)殖業(yè)和飼料廠的普及使用，該試紙卡具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快速、反應(yīng)靈敏、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/558GK203148947SQ201320090828
公開(kāi)日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月28日
發(fā)明者周中人, 史小月, 顧琳 申請(qǐng)人:上海快靈生物科技有限公司