一種檢測(cè)胃蛋白酶原Ⅰ的試紙條及應(yīng)用其的試劑卡的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型提供一種檢測(cè)胃蛋白酶原Ⅰ的試紙條及應(yīng)用其的試劑卡，所述試紙條包括底板，以及沿所述試紙條長(zhǎng)度方向順次粘覆于所述底板上的吸水紙、硝酸纖維素包被膜、單克隆抗體結(jié)合墊以及樣品墊；所述硝酸纖維素包被膜粘覆于所述底板的中間部位，且其上設(shè)置有相間隔的檢測(cè)帶和質(zhì)控帶，所述檢測(cè)帶靠近所述單克隆抗體結(jié)合墊，所述質(zhì)控帶靠近所述吸水紙；所述單克隆抗體結(jié)合墊為噴涂有表面修飾了胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體Ⅰ的熒光微球的聚酯膜。所述檢測(cè)胃蛋白酶原Ⅰ的試紙條及應(yīng)用其的試劑卡可實(shí)現(xiàn)快速、單人份定量檢測(cè)，且靈敏度高，批內(nèi)、批間誤差小，為臨床使用提供了極大的便利。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條及應(yīng)用其的試劑卡
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及臨床免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種快速、定量檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試紙條及應(yīng)用其的試劑卡。
【背景技術(shù)】
[0002]胃蛋白酶原(英文全稱(chēng)為Pesinogen，簡(jiǎn)稱(chēng)PG)是胃液中胃蛋白酶的無(wú)活性前體，分為胃蛋白酶原I (簡(jiǎn)稱(chēng)PGI)和胃蛋白酶原II (簡(jiǎn)稱(chēng)PGII)。PGI主要由胃底腺的主細(xì)胞和頸黏液細(xì)胞分泌，血清PGI含量與胃潰瘍、十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌等上消化道疾病有密切關(guān)系。通過(guò)測(cè)定PGI含量可檢測(cè)消化道疾病，已廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)和體檢篩查。
[0003]對(duì)于胃蛋白酶原I的檢測(cè)，目前臨床常用的方法包括:乳膠增強(qiáng)免疫比濁法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)以及放射免疫分析法(RIA)，但是這些方法都有各自的特點(diǎn)及不足。放射免疫分析法(RIA)所用的試劑具有放射性且有效期短，一般不推薦使用；乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，操作簡(jiǎn)單，可以全自動(dòng)化，但是，其靈敏度不高，無(wú)法實(shí)現(xiàn)精確定量；ELISA法和時(shí)間分辨免疫法雖然能夠定量準(zhǔn)確，但操作過(guò)程復(fù)雜，且不適合單人份和較小批量檢測(cè)用。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]為此，本實(shí)用新型所要解決的是現(xiàn)有技術(shù)中胃蛋白酶原I的檢測(cè)方法不可兼顧高靈敏度和簡(jiǎn)單操作的技術(shù)問(wèn)題，提供一種操作簡(jiǎn)單、靈敏度高，可快速、定量檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試紙條及應(yīng)用其的試劑卡。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案如下:
[0006]本實(shí)用新型所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，包括:
[0007]底板，以及沿所述底板長(zhǎng)度方向順次粘覆于所述底板上的吸水紙、硝酸纖維素包被膜、單克隆抗體結(jié)合墊以及樣品墊；其中，
[0008]所述硝酸纖維素包被膜粘覆于所述底板的中間部位，且其上設(shè)置有相間隔的噴涂有胃蛋白酶原I單克隆抗體II的檢測(cè)帶和噴涂有兔抗鼠IgG抗體的質(zhì)控帶，所述檢測(cè)帶靠近所述單克隆抗體結(jié)合墊，所述質(zhì)控帶靠近所述吸水紙；
[0009]所述單克隆抗體結(jié)合墊是噴涂有表面修飾了胃蛋白酶原I單克隆抗體I的熒光微球的聚酯膜；
[0010]所述吸水紙、所述硝酸纖維素包被膜、所述單克隆抗體結(jié)合墊以及所述樣品墊之間，依次與且僅與相鄰部位相接觸且部分重疊。
[0011]所述熒光微球的粒徑為10?lOOOnm。
[0012]所述試紙條的寬度為0.3?2cm。
[0013]所述吸水紙、所述硝酸纖維素包被膜、所述單克隆抗體結(jié)合墊以及所述樣品墊之間，依次與且僅與相鄰部位部分重疊區(qū)域的重疊長(zhǎng)度彼此獨(dú)立的為I?5mm。[0014]所述吸水紙與所述硝酸纖維素包被膜的所述部分重疊區(qū)域在所述硝酸纖維素包被膜的上側(cè)。
[0015]所述底板是塑料底板。
[0016]本實(shí)用新型所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡，包括所述的試紙條以及包覆所述試紙條的外殼；所述外殼進(jìn)一步包括底座和卡蓋，所述卡蓋上設(shè)置有觀察口和加樣口，以露出試紙條的局部區(qū)域；所述加樣口開(kāi)口于所述樣品墊上部，以露出部分或全部所述樣品墊區(qū)域；所述觀察口開(kāi)口于所述包被膜上側(cè)，以露出全部所述檢測(cè)帶和所述質(zhì)控帶。
[0017]所述底座為塑料底座。
[0018]所述卡蓋為塑料卡蓋。
[0019]本實(shí)用新型的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0020]1、本實(shí)用新型所提供的檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑條以熒光微球?yàn)樾盘?hào)源，突光微球的體積遠(yuǎn)大于突光染料分子的體積，不但可以負(fù)載大量的突光染料分子，而且便于熒光染料分子在檢測(cè)帶和質(zhì)控帶處的聚集，起到信號(hào)放大的作用，可實(shí)現(xiàn)快速、單人份定量檢測(cè)，且靈敏度高、誤差小，為臨床使用提供了極大的便利。
[0021]2、本實(shí)用新型所提供的檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡，體積小、便于攜帶，易于保存，有利于基層醫(yī)院的應(yīng)用與推廣。
[0022]3、本實(shí)用新型所提供的檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡，制備方法簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)批量生產(chǎn)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]為了使本實(shí)用新型的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，其中
[0024]圖1是本實(shí)用新型所述一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0025]圖2是本實(shí)用新型所述一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條設(shè)置在底座上的主視圖；
[0026]圖3是本實(shí)用新型所述試紙條的側(cè)視圖。
[0027]圖中附圖標(biāo)記表不為:1_底座、2_卡蓋、3_試紙條、4_底板、5_樣品塾、6_單克隆抗體結(jié)合墊、7-硝酸纖維素包被膜、8-吸水紙、9-檢測(cè)帶、10-觀察口、11-質(zhì)控帶、12-加樣□。
【具體實(shí)施方式】
[0028]為了使本實(shí)用新型的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。
[0029]本實(shí)用新型可以以許多不同的形式實(shí)施，而不應(yīng)該被理解為限于在此闡述的實(shí)施例。相反，提供這些實(shí)施例，使得本實(shí)用新型公開(kāi)將是徹底和完整的，并且將把本實(shí)用新型的構(gòu)思充分傳達(dá)給本領(lǐng)域技術(shù)人員，本實(shí)用新型將僅由權(quán)利要求來(lái)限定。在附圖中，為了清晰起見(jiàn)，會(huì)夸大層和區(qū)域的尺寸和相對(duì)尺寸。
[0030]下述實(shí)施例中，所述胃蛋白酶原I單克隆抗體1、胃蛋白酶原I單克隆抗體I1、兔抗鼠IgG抗體、磷酸緩沖溶液、牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)緩沖溶液、包裹有熒光染料且表面修飾有氨基或羧基的聚苯乙烯球、碳二亞胺(EDC)、N-羥基琥珀亞酰胺(NHS)、蔗糖、聚酯膜、硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜、高強(qiáng)度吸水紙均為市售。
[0031]如圖1-3所示，本實(shí)用新型提供一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試紙條3，所述試紙條3包括底板4，以及沿所述試紙條3長(zhǎng)度方向順次粘覆于所述底板4上的吸水紙
8、硝酸纖維素硝酸纖維素包被膜7、單克隆抗體結(jié)合墊6以及樣品墊5。
[0032]所述硝酸纖維素硝酸纖維素包被膜7粘覆于所述底板4的中間部位，且其上設(shè)置有相間隔的檢測(cè)帶9和質(zhì)控帶11,所述檢測(cè)帶9靠近所述單克隆抗體結(jié)合墊6,所述質(zhì)控帶11靠近所述吸水紙8。
[0033]所述單克隆抗體結(jié)合墊6是噴涂有表面修飾了胃蛋白酶原I單克隆抗體I的熒光微球的聚酯膜。
[0034]所述樣品墊5是玻璃纖維素膜。所述檢測(cè)帶9是涂布在所述硝酸纖維素上的胃蛋白酶原I單克隆抗體II帶，質(zhì)控帶11是涂布在所述硝酸纖維素包被膜7上的兔抗鼠IgG抗體帶。
[0035]所述吸水紙8、所述硝酸纖維素硝酸纖維素包被膜7、所述單克隆抗體結(jié)合墊6以及所述樣品墊5之間，依次與且僅與相鄰部位相接觸且部分重疊。
[0036]本實(shí)施例還提供一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡，包括所述的試紙條3以及包覆所述試紙條3的外殼；所述外殼進(jìn)一步包括底座I和卡蓋2，所述卡蓋2上設(shè)置有觀察口 10和加樣口 12，以露出試紙條3的局部區(qū)域；所述加樣口 12開(kāi)口于所述樣品墊5上部，以露出部分或全部所述樣品墊5區(qū)域；所述觀察口 10開(kāi)口于所述硝酸纖維素包被膜7上側(cè)，以露出全部所述檢測(cè)帶9和所述質(zhì)控帶11。
[0037]所述底板4是塑料底板。所述熒光微球的粒徑為10?lOOOnm，本實(shí)施例優(yōu)選200nm。所述熒光微球是包裹有熒光染料的聚苯乙烯球，且修飾有鼠源性單克隆抗體；所述吸水紙8優(yōu)選高強(qiáng)度吸水紙；所述底座4是塑料底座，優(yōu)選聚氯乙烯(PVC)板。
[0038]所述檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡的制備方法為:
[0039]S1、制備底座I和具有觀察口 10、加樣口 12的卡蓋2，所述底座I和卡蓋2相扣合后形成僅具有觀察口 10、加樣口 12兩個(gè)開(kāi)口的中空腔體，所述底座I為塑料底座，所述卡蓋2為塑料卡蓋。
[0040]S2、提純胃蛋白酶原I單克隆抗體I。選用商品化胃蛋白酶原I單克隆抗體I，4°C條件下，用濃度為0.05mol/L, pH值為7.2-7.6的磷酸緩沖溶液對(duì)的商品化胃蛋白酶原I單克隆抗體I進(jìn)行透析提純處理。
[0041]S3、制備單克隆抗體結(jié)合墊6。所述突光微球選用商品化包裹有突光染料且表面修飾有氨基或羧基的聚苯乙烯球，粒徑為200nm ;首先用濃度為0.05mol/L, pH值為7.2-7.6的MES沖溶液對(duì)的熒光微球進(jìn)行洗滌處理，并將質(zhì)量濃度調(diào)整為1%，然后用碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀亞酰胺(NHS)共價(jià)偶聯(lián)的方式將步驟S2中處理得到的胃蛋白酶原I單克隆抗體I標(biāo)記在所述熒光微球上；再使用定量噴膜儀以3?5μ Ι/cm的量將標(biāo)記有胃蛋白酶原I單克隆抗體I噴涂于聚酯膜上，避光條件下35?38°C烘干I小時(shí)，制得單克隆抗體結(jié)合墊6，加入干燥劑封存?zhèn)溆?。熒光微球的體積遠(yuǎn)大于熒光染料分子的體積，不但可以負(fù)載大量的熒光染料分子，而且便于熒光染料分子在檢測(cè)帶8和質(zhì)控帶11處的聚集，起到信號(hào)放大的作用。[0042]S4、制備硝酸纖維素包被膜7。使用含有l(wèi)wt%蔗糖的濃度為0.05mol/L, pH值為
7.4的磷酸緩沖溶液分別將胃蛋白酶原I單克隆抗體I1、兔抗鼠IgG抗體、稀釋至lmg/ml的濃度，再使用定量噴膜儀以I μ 1/cm的量將二者間隔噴涂在硝酸纖維素膜上，35?38°C烘干I小時(shí)，制成包括檢測(cè)帶9和質(zhì)控帶11的硝酸纖維素包被膜7，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?br> [0043]S5、制備樣品墊 5。用含有 lwt%BSA、0.lwt%tritonx_100 的濃度為 0.02mol/L, pH值為7.4的磷酸緩沖溶液浸泡玻璃纖維素膜0.5?3小時(shí)，35?38°C烘干3小時(shí)，制得樣品墊5。
[0044]S6、組裝試紙條3。在濕度小于35%，溫度為20?25°C條件下進(jìn)行試紙條3的組裝，所述底板4選用聚氯乙烯(PVC)板，在所述底板4的同一面的長(zhǎng)度方向上順次連接且相鄰部位部分重疊的樣品墊5、單克隆抗體結(jié)合墊6、硝酸纖維素包被膜7、吸水紙8，所述部分重疊區(qū)域的重疊長(zhǎng)度為I?5mm,本實(shí)施例優(yōu)選2_ ;所述硝酸纖維素包被膜7設(shè)置時(shí),在遠(yuǎn)離所述樣品墊5的方向上依次為檢測(cè)帶9和質(zhì)控帶11，所述吸水紙8為高強(qiáng)度吸水紙；組裝好后進(jìn)行裁切，形成寬度為0.3?2cm的試紙條3,本實(shí)施例優(yōu)選0.5cm。
[0045]S7、組裝檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡。將步驟S6中制備得到的試紙條3在所述底座I上居中設(shè)置，所述底板4與所述底座I相連，扣合卡蓋2，所述觀察口 10正對(duì)硝酸纖維素包被膜7，加樣口 12正對(duì)樣品墊5 ;也可以在所述底座I和卡蓋2相扣合后形成的中空腔體中加入干燥劑。
[0046]使用時(shí)，將樣品液通過(guò)加樣口 12滴加到樣品墊5上，在毛細(xì)作用下，樣品液向吸水紙8—側(cè)泳動(dòng)，當(dāng)樣品液中含有胃蛋白酶原I時(shí)，胃蛋白酶原I與熒光微球上的胃蛋白酶原I單克隆抗體I形成抗原-抗體復(fù)合物，隨著層析作用，所述抗原-抗體復(fù)合物繼續(xù)向吸水紙8 —側(cè)泳動(dòng)，到達(dá)識(shí)別不同抗原表位的胃蛋白酶原I單克隆抗體II處，即檢測(cè)帶9處，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，在檢測(cè)帶9處形成帶有抗體-抗原-抗體復(fù)合物的熒光微球的聚集。而未結(jié)合單克隆抗體I的熒光微球繼續(xù)向吸水紙8 —側(cè)泳動(dòng)，到達(dá)質(zhì)控帶11時(shí)，兔抗鼠IgG抗體與熒光微球上的鼠源性單克隆抗體結(jié)合，在質(zhì)控帶11處產(chǎn)線熒光微球的聚集。
[0047]反應(yīng)完全后，將上述檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡置于熒光檢測(cè)儀內(nèi)，讀取檢測(cè)帶9和質(zhì)控帶11兩處的熒光信號(hào)，將讀取值與預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比對(duì)就可以計(jì)算出定量的結(jié)果。
[0048]本實(shí)用新型所提供的檢測(cè)胃蛋白酶原I的熒光免疫層析試劑卡可實(shí)現(xiàn)快速、單人份定量檢測(cè)，且靈敏度高，批內(nèi)、批間誤差小，為臨床使用提供了極大的便利；而且，體積小、便于攜帶，易于保存，有利于基層醫(yī)院的應(yīng)用與推廣；另外，制備方法簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)批量生產(chǎn)。
[0049]顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或變動(dòng)仍處于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之中。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，包括: 底板(4)，以及沿所述底板(4)長(zhǎng)度方向順次粘覆于所述底板(4)上的吸水紙(8)、硝酸纖維素包被膜(7)、單克隆抗體結(jié)合墊(6)以及樣品墊(5);其中， 所述硝酸纖維素包被膜(7)粘覆于所述底板(4)的中間部位，且其上設(shè)置有相間隔的噴涂有胃蛋白酶原I單克隆抗體II的檢測(cè)帶(9)和噴涂有兔抗鼠IgG抗體的質(zhì)控帶(11)，所述檢測(cè)帶(9 )靠近所述單克隆抗體結(jié)合墊(6 )，所述質(zhì)控帶(11)靠近所述吸水紙(8 ); 所述單克隆抗體結(jié)合墊(6)是噴涂有表面修飾了胃蛋白酶原I單克隆抗體I的熒光微球的聚酯膜； 所述吸水紙(8)、所述硝酸纖維素包被膜(7)、所述單克隆抗體結(jié)合墊(6)以及所述樣品墊(5)之間，依次與且僅與相鄰部位相接觸且部分重疊。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，所述熒光微球的粒徑為10?lOOOnm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，所述試紙條的寬度為0.3?2cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，所述吸水紙(8)、所述硝酸纖維素包被膜(7)、所述單克隆抗體結(jié)合墊(6)以及所述樣品墊(5)之間，依次與且僅與相鄰部位部分重疊區(qū)域的重疊長(zhǎng)度彼此獨(dú)立的為I?5mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，所述吸水紙(8)與所述硝酸纖維素包被膜(7)的所述部分重疊區(qū)域在所述硝酸纖維素包被膜(7)的上側(cè)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試紙條，其特征在于，所述底板(4)是塑料底板。
7.—種檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡，其特征在于，包括權(quán)利要求1-6之一所述的試紙條以及包覆所述試紙條的外殼；所述外殼進(jìn)一步包括底座(I)和卡蓋(2)，所述卡蓋(2)上設(shè)置有觀察口(10)和加樣口(12)，以露出試紙條的局部區(qū)域；所述加樣口(12)開(kāi)口于所述樣品墊(5)上部，以露出部分或全部所述樣品墊(5)區(qū)域；所述觀察口(10)開(kāi)口于所述包被膜(7)上側(cè)，以露出全部所述檢測(cè)帶(9)和所述質(zhì)控帶(11)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡，其特征在于，所述底座(I)為塑料底座。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)胃蛋白酶原I的試劑卡，其特征在于，所述卡蓋(2)為塑料卡蓋。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK203385732SQ201320495844
【公開(kāi)日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月14日
【發(fā)明者】黃飚, 周衍, 鄒霈, 蔣葉華, 王翌, 張玨, 張藝, 周彬 申請(qǐng)人:江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所