人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，屬于蛋白質(zhì)、肽或氨基酸的檢測領(lǐng)域。本實用新型包括設(shè)有加樣孔、加稀釋液孔和檢測窗的塑料殼，塑料殼內(nèi)插裝人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試紙芯，該試紙芯包括一端粘貼有上樣墊的底板、包被有第一檢測條帶、第二檢測條帶和質(zhì)控條帶的硝酸纖維膜、分別搭接在硝酸纖維素膜兩端的標記物墊和吸水紙。本實用新型可同時檢測體血液中的鐵蛋白和骨堿性磷酸酶，保證檢測靈敏度和特異性能夠滿足臨床診斷要求的同時，簡化了操作過程。
【專利說明】 人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及蛋白質(zhì)、肽或氨基酸的檢測，特別是一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵蛋白作為機體內(nèi)一種貯存鐵的蛋白，其血清(血漿)濃度代表機體鐵儲備狀況。在感染或某些腫瘤發(fā)生時，血清(血漿)鐵蛋白濃度也會作為急性時相反應(yīng)蛋白異常增高。一般情況下，血清鐵蛋白濃度在20至200 ug/L，即20-200ng/ml。
[0003]目前，血清(血漿)鐵蛋白含量的主要檢測方法包括放射免疫法、酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法等。上述這些檢測方法均需要依賴相應(yīng)的復(fù)雜的儀器設(shè)備，還需要使用液體試劑，因此，具有檢測程序復(fù)雜、檢測速度慢以及檢測結(jié)果不可靠等缺陷。此外，這些方法所需樣本量較大，都要抽取靜脈血進行檢測，也不易于被」L童接受。
[0004]鈣缺乏是我國人群尤其是兒童常見的營養(yǎng)缺乏疾病。血清(血漿)骨堿性磷酸酶濃度對輔助診斷鈣缺乏具有重要意義。目前，檢測骨堿性磷酸酶濃度一般采用酶聯(lián)免疫法、電泳法、免疫濃縮化學法。前兩種方法需從靜脈取血分離血清(血漿)進行檢測，不易被兒童接受，而且檢測過程操作復(fù)雜、時間長；后一種方法檢測結(jié)果的誤差較大，不能得出定量測定的結(jié)果，并且也存在操作繁瑣的弱點。
實用新型內(nèi)容
[0005]本實用新型的目的是為了解決上述技術(shù)問題，設(shè)計了一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡。
[0006]本實用新型是按照以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0007]—種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，由試紙芯和塑料殼構(gòu)成，試紙芯包括依次相互搭接并粘貼于底板上的上樣墊、標記物墊、硝酸纖維膜和吸樣墊，塑料殼包括底座和面板，其中底座中部形成有放置試紙芯的承托結(jié)構(gòu)和周邊的多個圓柱型卡槽，面板上形成設(shè)有與試紙芯中硝酸纖維膜位置大小相對應(yīng)的檢測窗、與上樣墊位置相對應(yīng)的加樣孔和多個圓柱型卡塊，所述承托結(jié)構(gòu)包括位于底座正中央且與試紙芯長度相等的支撐梁、多個與支撐梁垂直相交的加強筋和位于支撐梁兩端的凹槽型限位結(jié)構(gòu)和擋板型限位結(jié)構(gòu)；所述面板上還設(shè)有與試紙芯中上樣墊位置相對應(yīng)的加稀釋液孔，所述硝酸纖維膜上按順序依次平行設(shè)置有鐵蛋白單克隆抗體包被構(gòu)成的第一檢測條帶，骨堿性磷酸酶多克隆抗體包被構(gòu)成的第二檢測條帶和羊抗鼠IgG包被構(gòu)成的質(zhì)控條帶。
[0008]利用本實用新型的技術(shù)方案制作的人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，同時檢測兩種指標，簡化了操作程序，省時，并且靈敏度和特異性完全能夠滿足臨床診斷要求，適用于鐵蛋白和骨堿性磷酸酶的快速檢測。而且本實用新型采用膠體金標記免疫層析定量檢測技術(shù)，用20微升血即可同時檢測血清(血漿)鐵蛋白和骨堿性磷酸酶濃度，有利于采取手指血進行測定，易被兒童患者接受，也簡化了測試操作過程，縮短了測試時間。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1是本實用新型中底座的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0010]圖2是本實用新型中卡面板的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0011]圖3是本實用新型中試紙芯的立體結(jié)構(gòu)示意圖。
[0012]其中:la、底座lb、面板
[0013]2、承托結(jié)構(gòu)2a、支撐梁
[0014]2b、加強筋2c、擋板型限位結(jié)構(gòu)
[0015]2d、凹槽型限位結(jié)構(gòu)3、圓柱型卡槽
[0016]4、檢測窗5、加樣孔
[0017]6、加稀釋液孔7、圓柱型卡塊
[0018]8、底板9、上樣墊
[0019]10、標記物墊11、硝酸纖維膜
[0020]12、吸樣墊13、第一檢測條帶
[0021]14、第二檢 測條帶15、質(zhì)控條帶。
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合附圖及實施例對本實用新型進行具體描述。
[0023]一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，由試紙芯和塑料殼構(gòu)成，試紙芯包括依次相互搭接并粘貼于底板8上的上樣墊9、標記物墊10、硝酸纖維膜11和吸樣墊12，塑料殼包括底座Ia和面板lb，其中底座Ia中部形成有放置試紙芯的承托結(jié)構(gòu)2和周邊的多個圓柱型卡槽3，面板Ib上形成設(shè)有與試紙芯中硝酸纖維膜11位置大小相對應(yīng)的檢測窗4、與上樣墊9位置相對應(yīng)的加樣孔5和多個圓柱型卡塊7，所述承托結(jié)構(gòu)2包括位于底座Ia正中央且與試紙芯長度相等的支撐梁2a、多個與支撐梁2a垂直相交的加強筋2b和位于支撐梁2a兩端的凹槽型限位結(jié)構(gòu)2d和擋板型限位結(jié)構(gòu)2c ;所述面板Ib上還設(shè)有與試紙芯中上樣墊9位置相對應(yīng)的加稀釋液孔6，所述硝酸纖維膜11上按順序依次平行設(shè)置有鐵蛋白單克隆抗體包被構(gòu)成的第一檢測條帶13，骨堿性磷酸酶多克隆抗體包被構(gòu)成的第二檢測條帶14和羊抗鼠IgG包被構(gòu)成構(gòu)成的質(zhì)控條帶15。
[0024]所述標記物墊10的一端與硝酸纖維膜11靠近第一檢測條帶13的一側(cè)搭接，另一端與上樣墊9搭接。
[0025]所述吸樣墊12與硝酸纖維膜11靠近質(zhì)控條帶15的一側(cè)搭接。
[0026]所述底座Ia上的承托結(jié)構(gòu)2與試紙芯大小相契合。承托結(jié)構(gòu)2中的支撐梁2a和加強筋2b使加入到試紙芯上的標本的分子擴散減緩，使標本與試紙芯上的膠體金的化學反應(yīng)更充分徹底，所述支撐梁2a兩端分別設(shè)置的擋板型限位結(jié)構(gòu)2c和凹槽型限位結(jié)構(gòu)2d，通過所述限位結(jié)構(gòu)使試紙條固定在試紙卡底座Ia內(nèi)。
[0027]所述底座Ia上的圓柱型卡槽3與面板Ib上的圓柱型卡塊7大小相配合,位置相對稱，底座Ia與面板Ib通過圓柱型卡槽3與圓柱型卡塊7的卡合固定。
[0028]標記物墊10的制備:用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30_50nm的膠體金溶液，制備完成后取IOOml膠體金溶液，用0.2MK2C03將溶液pH調(diào)到pH9.0,然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每IOOml溶液加入0.5mg?l.5mg鐵蛋白單克隆抗體和骨堿性磷酸酶抗體，緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌I小時，再加入終濃度為0.2% BSA,
0.1 %聚乙二醇20000進行封閉30分鐘，12000轉(zhuǎn)離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復(fù)溶至76.5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置于溫度20?25°C、濕度小于30%的干燥間干燥2?4小時，制成標記物墊10。
[0029]鐵蛋白單克隆抗體和骨堿性磷酸酶多克隆抗體的包被:將適當稀釋后的鐵蛋白單克隆抗體溶液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按l.0ul/cm劃線包被，構(gòu)成第一檢測條帶13 ;將適當稀釋后的骨堿性磷酸酶多克隆抗體溶液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按l.0ul/cm劃線包被，構(gòu)成第二檢測條帶14 ;最后包被羊抗鼠IgG抗體在硝酸纖維膜上作為質(zhì)控條帶15，包被完成后將硝酸纖維膜11置于干燥間干燥3?4小時。
[0030]人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試紙芯的裝配:在溫度20?25°C、濕度小于30%的干燥室內(nèi)，取底板8，將已包被的硝酸纖維膜11放置在底板8的中部粘貼，在硝酸纖維膜11靠近第一檢測條帶13—側(cè)搭接標記物墊10，在標記物墊10另一側(cè)搭接粘貼上樣墊9，在硝酸纖維膜11質(zhì)控條帶15 —側(cè)距邊緣搭接吸樣墊12 ;然后用裁剪機將貼好的底板切成適當寬度的試紙芯。
[0031]本實用新型在實際檢測時，首先撕開包裝鋁箔袋取出試劑卡平放，取20微升滴樣本滴加至加樣孔5中，立即在加稀釋液孔6中滴加兩滴稀釋液，靜止15分鐘，用免疫層析試驗判讀儀器分析第一檢測條帶13和第二檢測條帶14輪廓和顏色深淺，依據(jù)相應(yīng)的標準曲線，計算這兩條線所代表的鐵蛋白和骨堿性磷酸酶的量。若無紅色質(zhì)控線出現(xiàn)，說明本次實驗無效。
[0032]利用本實用新型的技術(shù)方案制作的人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，同時檢測兩種指標，簡化了操作程序，省時，并且靈敏度和特異性完全能夠滿足臨床診斷要求，適用于鐵蛋白和骨堿性磷酸酶的快速檢測。而且本實用新型采用膠體金標記免疫層析定量檢測技術(shù)，用20微升血即可同時檢測血清(血漿)鐵蛋白和骨堿性磷酸酶濃度，有利于采取手指血進行測定，易被兒童患者接受，也簡化了測試操作過程，縮短了測試時間。
【權(quán)利要求】
1.一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，由試紙芯和塑料殼構(gòu)成，試紙芯包括依次相互搭接并粘貼于底板(8)上的上樣墊(9)、標記物墊(10)、硝酸纖維膜(11)和吸樣墊(12)，塑料殼包括底座(Ia)和面板(lb)，其中底座(Ia)中部形成有放置試紙芯的承托結(jié)構(gòu)(2)和周邊的多個圓柱型卡槽(3)，面板(Ib)上形成設(shè)有與試紙芯中硝酸纖維膜(11)位置大小相對應(yīng)的檢測窗(4)、與上樣墊(9)位置相對應(yīng)的加樣孔(5)和多個圓柱型卡塊(7)，其特征在于:所述承托結(jié)構(gòu)(2)包括位于底座(Ia)正中央且與試紙芯長度相等的支撐梁(2a)、多個與支撐梁(2a)垂直相交的加強筋(2b)和位于支撐梁(2a)兩端的凹槽型限位結(jié)構(gòu)(2d)和擋板型限位結(jié)構(gòu)(2c);所述面板(Ib)上還設(shè)有與試紙芯中上樣墊(9)位置相對應(yīng)的加稀釋液孔(6 )，所述硝酸纖維膜(11)上按順序依次平行設(shè)置有鐵蛋白單克隆抗體包被構(gòu)成的第一檢測條帶(13)，骨堿性磷酸酶多克隆抗體包被構(gòu)成的第二檢測條帶(14)和羊抗鼠IgG包被構(gòu)成構(gòu)成的質(zhì)控條帶(15)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，其特征在于:所述標記物墊(10)的一端與硝酸纖維膜(11)靠近第一檢測條帶(13)的一側(cè)搭接，另一端與上樣墊(9)搭接。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，其特征在于:所述吸樣墊(12)與硝酸纖維膜(11)靠近質(zhì)控條帶(15)的一側(cè)搭接。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，其特征在于:所述底座(Ia)上的承托結(jié)構(gòu)(2)與試紙芯大小相契合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人體血液中鐵蛋白和骨堿性磷酸酶聯(lián)合檢測試劑卡，其特征在于:所述底座(Ia)上的圓柱型卡槽(3)與面板(Ib)上的圓柱型卡塊(7)大小相配合，位置相對稱，底座(Ia)與面板(Ib)通過圓柱型卡槽(3)與圓柱型卡塊(7)的卡合固定。
【文檔編號】G01N33/577GK203490223SQ201320544153
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】葉濤 申請人:天津朗賽生物科技有限公司