一種蛋白質(zhì)芯片的制作方法
【專利摘要】本實用新型屬于生物醫(yī)學(xué)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體，固相載體的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識別區(qū)。本實用新型通過在固相載體的四個角處均設(shè)陰性質(zhì)控區(qū)和陽性質(zhì)控區(qū)，便于與各炎癥因子識別位點進(jìn)行比較判斷，提高蛋白芯片檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。每種炎癥因子識別區(qū)、每個陰性質(zhì)控區(qū)和每個陽性質(zhì)控區(qū)均設(shè)五個點，且呈點陣式排列，不僅可提高反應(yīng)容量，還可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構(gòu)成的固相載體可使樣品穩(wěn)定固定在其上且保持活性。
【專利說明】一種蛋白質(zhì)芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及生物醫(yī)學(xué)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種蛋白質(zhì)芯片。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)芯片技術(shù)概念起源于20世紀(jì)80年代后期，是生命科學(xué)領(lǐng)域熱門的新技術(shù)之一。蛋白質(zhì)芯片具有平行性、高通量、靈敏度高、樣品用量少、檢測速度快等優(yōu)點。然而，由于蛋白質(zhì)的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)復(fù)雜多變，固定在芯片表面的蛋白質(zhì)容易變性失活。因此，尋找合適的載體和表面修飾方法以保證固定足夠量的蛋白質(zhì)并保持其天然活性成為研制蛋白質(zhì)微陣列的關(guān)鍵步驟之一。
[0003]近年來經(jīng)過科研人員的嘗試和研發(fā)，逐步形成了以濾膜、塑料、玻片和金屬膜等為主的固相載體。在這幾類載體中，玻片具有廉價、表面光滑、熒光背景低、性能穩(wěn)定、抗體用量低等優(yōu)點。但是，用玻片固定蛋白往往具有樣品易蒸發(fā)、不適合多步反應(yīng)、容量較小和容易發(fā)生交叉污染等缺點。
[0004]通過改進(jìn)蛋白質(zhì)芯片的結(jié)構(gòu)特點來克服反應(yīng)容量小、樣品易蒸發(fā)的問題，以及提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性是一種可行的方法，從而更充分發(fā)揮蛋白質(zhì)芯片的優(yōu)勢。
實用新型內(nèi)容
[0005]本實用新型解決的技術(shù)問題是提供一種反應(yīng)容量大、檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高的蛋白質(zhì)
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[0006]為解決上述技術(shù)問題，本實用新型采用以下技術(shù)方案:一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體，所述固相載體的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識別區(qū)。
[0007]所述固相載體的中部設(shè)有若干種炎癥因子識別區(qū)，所述每種炎癥因子識別區(qū)由5個同種炎癥因子識別位點構(gòu)成。
[0008]所述每個陰性質(zhì)控區(qū)由5個陰性對照點組成；所述每個陽性質(zhì)控區(qū)由5個陽性對照點組成。
[0009]所述炎癥因子識別位點、陽性對照點和陰性對照點在固相載體上呈矩陣式排列。
[0010]所述炎癥因子識別位點、陽性對照點和陰性對照點的體積均為1mm3。所述炎癥因子識別區(qū)中相鄰兩個炎癥因子識別位點的距離為1.5mm ;所述陰性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個陰性對照點的距離為1.5mm ;所述陽性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個陽性對照點的距離為1.5mm。
[0011]所述固相載體由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
[0012]所述陰性對照點為BSA陰性對照點，所述陽性對照點為二抗陽性對照點。
[0013]述炎癥因子識別位點包括CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的有益效果是:本實用新型通過在固相載體的四個角處均設(shè)陰性質(zhì)控區(qū)和陽性質(zhì)控區(qū)，便于與各識別位點進(jìn)行比較判斷，提高蛋白芯片檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。每種炎癥因子識別區(qū)、每個陰性質(zhì)控區(qū)和每個陽性質(zhì)控區(qū)均設(shè)五個點，且呈點陣式排列，不僅可提高反應(yīng)容量，還可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構(gòu)成的固相載體可使樣品穩(wěn)定固定在其上，且保持活性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為本實用新型的蛋白質(zhì)芯片的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0016]為了更充分理解本實用新型的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實施例對本實用新型的技術(shù)方案作進(jìn)一步介紹和說明。
[0017]實施例
[0018]本實施例提供的一種蛋白質(zhì)芯片為用于檢測心血管疾病的蛋白質(zhì)芯片。心血管疾病的炎癥因子包括CRP (C反應(yīng)蛋白)、Myoglobin (肌紅蛋白)、cTnT (心肌肌鈣蛋白T)、NT-proBNP (N末端B型鈉尿肽)、CK-MB (肌酸激酶同工酶)、H-FABP (心型脂肪酸結(jié)合蛋白)、GPBB (糖原磷酸化酶同工酶BB)和D-Dimer (D 一二聚體)共8項生物標(biāo)志物。
[0019]BSA為牛血清白蛋白。
[0020]參照圖1，本實施例提供的一種蛋白質(zhì)芯片包括呈方形的固相載體1，固相載體I上設(shè)有炎癥因子識別區(qū)、陰性質(zhì)控區(qū)和陽性質(zhì)控區(qū)。所述固相載體I由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。在固相載體I上的四個角處分別設(shè)有一個陰性質(zhì)控區(qū)和一個陽性質(zhì)控區(qū)。每個陰性質(zhì)控區(qū)由五個組成一排的陰性對照點3構(gòu)成，陰性對照點3為BSA陰性對照點。每個陽性質(zhì)控區(qū)由五個組成一排的陽性對照點2構(gòu)成，陽性對照點2為二抗陽性對照點。固相載體I的每個角處的陰性質(zhì)控區(qū)和陽性質(zhì)控區(qū)平行排列。在固相載體I的中部設(shè)置八種炎癥因子識別區(qū)，每種炎癥因子識別區(qū)均由五個組成一排的相應(yīng)的炎癥因子識別位點4構(gòu)成。固相載體I上設(shè)置的炎癥因子識別位點4有CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。每個炎癥因子識別位點4及陽性對照點2和陰性對照點3的體積均為1mm3。陰性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個陰性對照點3的距離為1.5mm ;陽性質(zhì)控區(qū)中相鄰兩個陽性對照點2的距離為1.5mm ;炎癥因子識別區(qū)中相鄰兩個炎癥因子識別位點4的距離為1.5mm,并且炎癥因子識別位點4呈矩陣式排列。
[0021]蛋白質(zhì)芯片試劑盒的使用:
[0022]將IOOyL血清樣品鋪于蛋白質(zhì)芯片上，并將蛋白質(zhì)芯片放置于搖床上，室溫反應(yīng)lh。反應(yīng)結(jié)束后用PBST清洗蛋白質(zhì)芯片3次，每次5min。然后將500 μ L，0.5mg/mL的檢測劑鋪于蛋白質(zhì)芯片上進(jìn)行二次免疫反應(yīng)lh。反應(yīng)結(jié)束后用PBST清洗蛋白質(zhì)芯片并吹干，然后將蛋白質(zhì)芯片置于紫外成像儀中進(jìn)行圖像掃描，用圖像分析軟件QuantArraysoftwareversion3000進(jìn)行突光強(qiáng)度分析，并用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算血清樣品中CRP、Myoglobin、cTnT、NT-proBNP、CK-MB, H-FABP, GPBB 和 D-Dimer 的濃度。
[0023]以上所述僅以實施例來進(jìn)一步說明本實用新型的技術(shù)內(nèi)容，以便于讀者更容易理解，但不代表本實用新型的實施方式僅限于此，任何依本實用新型所做的技術(shù)延伸或再創(chuàng)造，均受本實用新型的保護(hù)。
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白質(zhì)芯片，包括呈方形的固相載體(1)，其特征在于，所述固相載體(I)的四角處均設(shè)有一陰性質(zhì)控區(qū)和一陽性質(zhì)控區(qū)，所述固相載體(I)的中部設(shè)有至少一種炎癥因子識別區(qū)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述固相載體(I)的中部設(shè)有若干種炎癥因子識別區(qū)，所述每種炎癥因子識別區(qū)由五個同種炎癥因子識別位點(4)構(gòu)成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述每個陰性質(zhì)控區(qū)由5個陰性對照點(3)組成；所述每個陽性質(zhì)控區(qū)由5個陽性對照點(2)組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)、陽性對照點(2)和陰性對照點(3)在固相載體(I)上呈矩陣式排列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)、陽性對照點(2 )和陰性對照點(3 )的體積均為Imm3。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述固相載體(I)由玻片，以及玻片上由下至上依次設(shè)置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述陰性對照點(3)為BSA陰性對照點，所述陽性對照點(3)為二抗陽性對照點。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種蛋白質(zhì)芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)包括CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。
【文檔編號】G01N33/573GK203519614SQ201320639952
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日
【發(fā)明者】張二盈, 章國建 申請人:深圳市大愛醫(yī)療科技有限公司