一種胃蛋白酶原i酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種快速檢測(cè)胃蛋白酶原I酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括盒體（1），盒蓋（2），盒體內(nèi)設(shè)置有下凹瓶位（3）、試劑瓶（4）、及微孔板（5），所述試劑瓶（4）按分類置于下凹瓶位（3）上，所述微孔板（5）中包被有抗PGI抗體，所述試劑瓶（4）包括PGI酶標(biāo)抗體、濃度為0-180ug/L校準(zhǔn)品試劑、質(zhì)控品、顯色劑、終止液、洗滌液；所述微孔板（5）置于盒體（1）底部。本實(shí)用新型提供的試劑盒采用一步法檢測(cè)，能不稀釋血清樣本直接檢測(cè)，而且使試劑盒的整個(gè)檢測(cè)時(shí)間比同類別的檢測(cè)試劑縮短45-60分鐘，具有高特異性、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單和快速檢測(cè)，便于臨床使用。
【專利說(shuō)明】一種胃蛋白酶原I酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本實(shí)用新型涉及一種胃蛋白酶原I檢測(cè)試劑盒，特別是一種一步法快速檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】:
[0002]胃癌是全球高危死亡率的第二大疾病，嚴(yán)重威脅著人類健康。胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,死亡率局各種惡性腫瘤前列,全球每年934，000新發(fā)胃癌病例，42% (近40萬(wàn))的新發(fā)病例數(shù)在我國(guó)，胃癌在我國(guó)的患病率和死亡率均是世界水平的2倍多。其早期診斷、早期治療是提高患者生存質(zhì)量、降低死亡率的唯一途徑，改善胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵是作好二級(jí)預(yù)防，血清PG檢測(cè)可以作為胃癌篩查“二步法”中的初篩方法。聯(lián)合測(cè)定PGI和PG II的水平及其比值可起到胃黏膜“血清學(xué)活檢”的作用，有利于胃癌的預(yù)防干預(yù)、早期診斷以及術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)。近年來(lái)，血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關(guān)系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應(yīng)用已引起越來(lái)越多研究者的關(guān)注。
[0003]PG (PG)是一種門冬氨酸蛋白酶前體，是分子質(zhì)量為42KDa的單鏈多肽。人類PG依其電泳遷移率可以分為7個(gè)組分，1-5組分的免疫原性相同，成為PGI (PGI)，主要由胃腺的主細(xì)胞和黏液頸細(xì)胞分泌；組分6-7被稱為PGII (PGII)，除由胃體和胃底黏膜的泌酸腺的主細(xì)胞分泌外，泌酸腺的黏液頸細(xì)胞、賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液細(xì)胞以及十二指腸上段的Brunner腺也能產(chǎn)生PGII。由于胃幾乎是PG的唯一來(lái)源，并且在分泌階段的分泌量會(huì)發(fā)生變化，因此，血清PGI和PGII不僅反映了胃黏膜腺體和細(xì)胞的數(shù)量，也間接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。
[0004]通常情況下約有1%的PG通過胃黏膜進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)入血液循環(huán)的PG在血液中非常穩(wěn)定。血清PG水平是反映胃黏膜形態(tài)和功能的良好指標(biāo)。大部分酶原進(jìn)入胃腔，經(jīng)酸解成具有活性的胃蛋白酶發(fā)揮其消化蛋白質(zhì)的作用。但也有少量透過胃黏膜毛細(xì)血管進(jìn)入血液，可從血清中檢測(cè)。當(dāng)胃粘膜發(fā)生病變時(shí)，血清中PG的含量也隨之發(fā)生改變。血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關(guān)系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應(yīng)用已引起越來(lái)越多研究者的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，在常規(guī)體檢中大約有15%左右的人的血清PG水平異常，而進(jìn)一步進(jìn)行胃鏡檢查，其中90%以上的患者有不同程度的淺表性胃炎、糜爛性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌等胃部疾病。近年來(lái)，血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關(guān)系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應(yīng)用已引起越來(lái)越多研究者的關(guān)注。
實(shí)用新型內(nèi)容:
[0005]本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種新型的PGI酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒，運(yùn)用一步法快速檢測(cè)技術(shù)，運(yùn)用特殊包被液制備的微孔板和加速抗原抗體反應(yīng)的酶標(biāo)抗體稀釋液，使一步法反應(yīng)快速、充分，達(dá)到快速、高靈敏度、特異性好級(jí)量程寬的目的。
[0006]所述試劑盒包括盒體(1)，盒蓋(2)，盒體內(nèi)設(shè)置有下凹瓶位(3)、試劑瓶(4)、及微孔板(5)，所述試劑瓶(4)按分類置于下凹瓶位(3)上，所述微孔板(5)中包被有抗PGI抗體，所述試劑瓶(4)包括PGI酶標(biāo)抗體、濃度為0-180ug/L校準(zhǔn)品試劑、質(zhì)控品、顯色劑、終止液、洗滌液；所述微孔板(5)置于盒體(I)底部。
[0007]所述下凹瓶位與試劑瓶形狀相同，能穩(wěn)定固定試劑瓶。
[0008]根據(jù)試劑盒的空間及試驗(yàn)用量，本試劑盒設(shè)置微孔板設(shè)置I塊、PGI酶標(biāo)抗體設(shè)置I瓶、校準(zhǔn)品設(shè)置5瓶、質(zhì)控品設(shè)置I瓶、顯色劑設(shè)置I瓶、終止液設(shè)置I瓶、洗滌液采用濃縮形式，設(shè)置I瓶。
[0009]為了更好的便于試劑盒在多種環(huán)境中使用，試劑盒的盒體(I)與盒蓋(2)采用防水材料制成，其中優(yōu)選塑化材料。
[0010]為便于本試劑盒的使用，盒子中還包括用于密封的封口膜；微孔板采用可拆卸方式并優(yōu)選48或96孔。
[0011]所述PGI酶標(biāo)抗體為PGI單克隆抗體標(biāo)記的辣根過氧化物酶；校準(zhǔn)品為已配置好的不同濃度PGI抗原溶液。
[0012]本實(shí)用新型提供的試劑盒靈敏度高，檢測(cè)靈敏度達(dá)0.lug/L ;量程寬，檢測(cè)樣本不需要稀釋；檢測(cè)時(shí)間短，整個(gè)檢測(cè)時(shí)間為I小時(shí)，比現(xiàn)有市場(chǎng)上同類產(chǎn)品檢測(cè)時(shí)間縮短45-60分鐘；樣本需求量少，一次上樣只需要50ul，比目前市場(chǎng)上同類產(chǎn)品上樣量減少一倍。此外，本試劑盒方便攜帶，便于使用，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0013]圖1為本試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖2為本試劑盒微孔板示意圖。
[0015]附圖標(biāo)記說(shuō)明1:盒體2:盒蓋3:下凹瓶位4:試劑瓶5:微孔板
[0016]圖3為PGI酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]如圖1所示，本實(shí)用新型提供的試劑盒包括盒體(I)，盒蓋(2)，盒體內(nèi)設(shè)置有下凹瓶位(3)、試劑瓶(4)、及微孔板(5)，所述試劑瓶(4)按分類置于下凹瓶位(3)上，所述微孔板(5)中包被有抗PGI抗體，所述試劑瓶(4)包括PGI酶標(biāo)抗體、濃度為0-180ug/L校準(zhǔn)品試劑、質(zhì)控品、顯色劑、終止液、洗滌液；所述微孔板(5)置于盒體(I)底部。所述PGI酶標(biāo)抗體為PGI單克隆抗體標(biāo)記的辣根過氧化物酶；校準(zhǔn)品為已配置好的不同濃度PGI抗原溶液。
[0018]所述下凹瓶位與試劑瓶形狀相同，能穩(wěn)定固定試劑瓶。
[0019]根據(jù)試劑盒的空間及試驗(yàn)用量，本試劑盒設(shè)置微孔板設(shè)置I塊、PGI酶標(biāo)抗體設(shè)置I瓶、校準(zhǔn)品設(shè)置5瓶、質(zhì)控品設(shè)置I瓶、顯色劑設(shè)置I瓶、終止液設(shè)置I瓶、洗滌液采用濃縮形式，設(shè)置I瓶。
[0020]為了更好的便于試劑盒在多種環(huán)境中使用，試劑盒的盒體(I)與盒蓋(2)采用防水材料制成，其中優(yōu)選塑化材料。
[0021]為便于本試劑盒的使用，盒子中還包括用于密封的封口膜；微孔板采用可拆卸方式并優(yōu)選48或96孔。
[0022]本試劑盒的具體組成及使用方法如下:[0023]1.溶液配制
[0024]a)包被緩沖液配制:0.1M碳酸鹽緩沖液(pH9.6)；
[0025]b)封閉液配制:磷酸鹽緩沖液，1%BSA,酪蛋白(pH7.4)；
[0026]c)濃縮洗滌液配制:0.5M磷酸鹽緩沖液，十二烷基硫酸鈉，pH7.4 ；
[0027]d)酶標(biāo)抗體稀釋液配制:0.1MTris鹽酸緩沖液，pH8.5 ；
[0028]e)底物液配制:0.2mg/ml過氧化脲,0.1M朽1檬酸緩沖液pH5.5, TMB0.5mg/ml,DMSO ；
[0029]f)終止液配制:2M硫酸；
[0030]g)校準(zhǔn)品稀釋液:0.1MPBS, pH7.4。
[0031]2.微孔板制備
[0032]2.1 包被
[0033]( I)用包被機(jī)或移液器將包被液按IOOul/孔加入微孔板；
[0034](2)蓋板膜封閉微孔板，放置于4°C冰箱過夜；
[0035](3)洗板機(jī)、稀釋后的0.05M洗滌液洗板5次。
[0036]2.2 封閉
[0037]( I)用包被機(jī)或移液器將封閉液按300ul/孔加入微孔板；
[0038](2)蓋板膜封閉微孔板,放置于37°C封閉I小時(shí)；
[0039](3)洗板機(jī)、稀釋后的0.05M洗滌液洗板5次。
[0040]2.3真空包裝
[0041](I)將上述處理后的微孔板放置于37°C烘箱干燥0.5小時(shí)；
[0042](2)立即用真空封裝機(jī)進(jìn)行真空包裝。
[0043]3.分裝
[0044](I)酶標(biāo)抗體分裝:用自動(dòng)灌裝機(jī)按照6.0ml/瓶，灌裝于15ml白色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0045](2)底物液分裝:用自動(dòng)灌裝機(jī)按照12.0ml/瓶，灌裝于15ml棕色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0046](3)濃縮洗滌液分裝:用自動(dòng)灌裝機(jī)按照50.0ml/瓶，灌裝于50ml白色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0047](4)終止液分裝:用自動(dòng)灌裝機(jī)按照6.0ml/瓶，灌裝于15ml白色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0048](5)校準(zhǔn)品分裝:取大小適用的5個(gè)容器，配制濃度點(diǎn)依次為0.0、30.0、70.0、120.0、180.0ug/L的校準(zhǔn)品，用自動(dòng)灌裝機(jī)按照0.6ml/瓶，灌裝于1.8ml白色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0049](6)質(zhì)控品分裝:配制60.0ug/L的質(zhì)控品，用自動(dòng)灌裝機(jī)按照0.6ml/瓶,灌裝于1.8ml白色塑料瓶中，并隨灌裝進(jìn)行及時(shí)旋上瓶蓋；
[0050]4.試劑盒組裝
[0051]將各組按照下表的進(jìn)行組合，即為PGI的酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒。
[0052]表IPGI的酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒組成成分
[0053]
【權(quán)利要求】
1.一種胃蛋白酶原I酶聯(lián)免疫一步法檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括盒體(1)，盒蓋(2)，盒體內(nèi)設(shè)置有下凹瓶位(3)、試劑瓶(4)、及微孔板(5)，所述試劑瓶(4)按分類置于下凹瓶位(3)上，所述微孔板(5)中包被有抗PGI抗體，所述試劑瓶(4)包括PGI酶標(biāo)抗體、濃度為0-180ug/L校準(zhǔn)品試劑、質(zhì)控品、顯色劑、終止液、洗滌液；所述微孔板(5)置于盒體(I)底部。
2.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述微孔板設(shè)置I塊、PGI酶標(biāo)抗體設(shè)置I瓶、校準(zhǔn)品設(shè)置5瓶、質(zhì)控品設(shè)置I瓶、顯色劑設(shè)置I瓶、終止液設(shè)置I瓶、洗滌液采用濃縮形式，設(shè)置I瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述盒體(I)與盒蓋(2)采用防水材料制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述防水材料優(yōu)選塑化材料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于還包括用于密封的封口膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述微孔板采用可拆卸方式。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述微孔板優(yōu)選48或96孔。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述下凹瓶位與試劑瓶形狀相同，能穩(wěn)定固定試劑瓶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述PGI酶標(biāo)抗體為PGI單克隆抗體標(biāo)記的辣根過氧化物酶；校準(zhǔn)品為已配置好的不同濃度PGI抗原溶液。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK203688563SQ201320647481
【公開日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】楊雷, 劉琴, 劉揚(yáng), 代麗 申請(qǐng)人:無(wú)錫宜偌維盛生物技術(shù)有限公司