用于檢測(cè)骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種用于檢測(cè)骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒，包括盒體、盒蓋和設(shè)置在盒體內(nèi)的襯墊，所述襯墊上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體IgG1、IgG2a和CD45的試劑管、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD71、CD34和CD45的試劑管、裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管和裝有PBS緩沖液的試劑管被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。該試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，可對(duì)簡(jiǎn)單、快捷地診斷低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，便于在廣大試驗(yàn)儀器、條件相對(duì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】用于檢測(cè)骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種用于檢測(cè)低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes, MDS)是起源于造血干細(xì)胞的一組異質(zhì)性髓系克隆性疾病，特點(diǎn)是髓系細(xì)胞分化及發(fā)育異常，表現(xiàn)為無(wú)效造血、難治性血細(xì)胞減少、造血功能衰竭，高風(fēng)險(xiǎn)向急性髓系白血病(AML)轉(zhuǎn)化。在診斷和分型中主要難點(diǎn)在那些外周血和骨髓原始細(xì)胞不增多病例上，尤其當(dāng)病態(tài)造血不顯著時(shí)；或與營(yíng)養(yǎng)缺乏、化學(xué)藥物、中毒、造血生長(zhǎng)因子、炎癥及感染繼發(fā)的病態(tài)造血鑒別；以及骨髓低增生或伴隨纖維化等情況，不能獲得足夠細(xì)胞分析可能的疾病過(guò)程。低增性生骨髓增生異常綜合征及MDS伴骨髓纖維化診斷常常很困難。
[0003]再生障礙性貧血(aplastic anemia, AA，再障)是由多種原因引起的骨髓造血干細(xì)胞缺陷、造血微環(huán)境損傷以及免疫機(jī)制改變，導(dǎo)致骨髓造血功能衰竭，出現(xiàn)以全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的疾病。目前比較公認(rèn)的與后天獲得性再障性貧血有關(guān)的危險(xiǎn)因素包括藥物及化學(xué)物質(zhì)、電離輻射、病毒感染等。
[0004]骨髓增生異常綜合征(MDS)和再生障礙性貧血(AA)均屬于造血干細(xì)胞疾病，前者主要損傷造血干細(xì)胞分化，骨髓造血異常，而后者主要損傷造血干細(xì)胞增生，造血功能抑制。但兩者有相同的病理機(jī)制，例如低增生骨髓增生異常綜合征(L-MDS)與AA的發(fā)病機(jī)制均與造血衰竭有關(guān)，甚至病程上L-MDS與AA兩者可相互轉(zhuǎn)化，因此臨床上易將L-MDS與AA相混淆。
[0005]目前，對(duì)于低增性生骨髓增生異常綜合征(L-MDS)和再生障礙性貧血(AA)的診斷方法主要有骨髓形態(tài)學(xué)及骨髓活檢和骨髓細(xì)胞遺傳學(xué)檢查。
[0006]在形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中，L-MDS亦有全血細(xì)胞減少，網(wǎng)織紅細(xì)胞不高升值降低，骨髓增生減低等特點(diǎn)，易與AA混淆。有些L-MDS臨床上表現(xiàn)不典型，血液學(xué)改變復(fù)雜，缺乏特異性，部分RA病態(tài)造血不典型，僅依靠形態(tài)學(xué)難以與AA相鑒別，尤其是骨髓增生低下時(shí)。且骨髓鏡檢通量低，易受鏡檢人員主觀因素影響。
[0007]骨髓細(xì)胞遺傳學(xué)檢查對(duì)于再障與L-MDS鑒別很重要，但若因骨髓增生低下，細(xì)胞數(shù)少，則難以獲得足夠的中期分裂象細(xì)胞。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0008]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型的目的在于提供一種用于檢測(cè)低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒，可以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地檢測(cè)低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取的技術(shù)方案是:一種用于檢測(cè)骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體IgGl (20μ l/test)、IgG2a (20 μ I/test)和CD45(20 μ 1/test)的試劑管(4)、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD71(20 μ 1/test)、CD34 (20μ 1/test)和CD45 (20 μ 1/test)的試劑管(5)、裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管(6)和裝有PBS緩沖液的試劑管(7)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。其中，同一試劑管內(nèi)的單克隆抗體使用不同的熒光標(biāo)記；優(yōu)選地，IgGl和⑶71使用FITC標(biāo)記，IgG2a和⑶34使用PE標(biāo)記，CD45使用PerCP標(biāo)記。
[0010]其中，所述紅細(xì)胞裂解液和所述PBS緩沖液均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑。
[0011]其中，所述襯墊(3)上設(shè)有4個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊(3)上分成兩排平行排列。
[0012]通過(guò)以上技術(shù)方案，本實(shí)用新型的有益效果如下:
[0013](I)本實(shí)用新型的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，方便攜帶、保存，不易受污染。
[0014](2)本實(shí)用新型的試劑盒在使用時(shí)，通過(guò)將⑶34+的造血干/組細(xì)胞的比例檢測(cè)和⑶45-⑶71+的有核紅細(xì)胞比例檢測(cè)相結(jié)合，可對(duì)簡(jiǎn)單、快捷地診斷低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，便于在廣大試驗(yàn)儀器、條件相對(duì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0016]該圖中，1-盒體，2-盒蓋，3-襯墊，4-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體IgGl、IgG2a和⑶45的試劑管，5-裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體⑶71、⑶34和⑶45的試劑管，6-裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管，7-裝有PBS緩沖液的試劑管。
[0017]圖2為使用本實(shí)用新型檢測(cè)某患者骨髓樣本所得的散點(diǎn)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本實(shí)用新型的范圍構(gòu)成任何限制。
[0019]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0020]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0021]如圖1所示，本實(shí)用新型提供了一種用于檢測(cè)低增生性骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒，包括盒體1、盒蓋2和設(shè)置在盒體I內(nèi)的襯墊3，所述襯墊3上設(shè)有4個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊3上分成兩排平行排列，裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體IgGl、IgG2a和⑶45的試劑管4、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體⑶71、⑶34和⑶45的試劑管5、裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管6和裝有PBS緩沖液的試劑管7被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
[0022]其中，IgGl和CD71使用FITC標(biāo)記，IgG2a和CD34使用PE標(biāo)記，CD45使用PerCPT 己 O
[0023]其中，所述紅細(xì)胞裂解液來(lái)源于美國(guó)BD公司，所述PBS緩沖液來(lái)源于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
[0024]檢測(cè)步驟如下:[0025](I)取患者的骨髓樣本，使用計(jì)數(shù)板對(duì)待檢標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后調(diào)節(jié)白細(xì)胞濃度至5X IO6個(gè)/ml ；
[0026](2)取兩支流式專用管，分別標(biāo)為I號(hào)管和2號(hào)管，向I號(hào)管加入試劑管4內(nèi)的抗體60 μ 1，向2號(hào)管內(nèi)加入試劑管5內(nèi)的抗體60 μ I ；
[0027](3)向每個(gè)管內(nèi)分別加入待檢測(cè)的骨髓標(biāo)本70μ 1，低速渦旋混勻，2°C至8°C避光孵育20分鐘；
[0028](4)向每個(gè)管內(nèi)分別加入紅細(xì)胞裂解液1ml，低速渦旋混勻，在2°C至8°C避光裂解紅細(xì)胞10分鐘；
[0029](5)裂解結(jié)束后立即以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，離心結(jié)束后棄上清，然后向各管內(nèi)加入Iml PBS，低速渦旋混勻，以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘；離心結(jié)束后棄上清，向各管內(nèi)加入0.5ml PBS重懸，低速渦旋混勻，24h內(nèi)使用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)；
[0030](6)檢測(cè)I號(hào)管時(shí)，用CD45-PerCP區(qū)分各群細(xì)胞，用同型對(duì)照IgGl-FITC和IgG2a-PE定FITC和PE的陰性門；檢測(cè)2號(hào)管時(shí)，取P2門與P3門的交集，即得CD34+細(xì)胞比例；取Q4-1門內(nèi)細(xì)胞，即得⑶71+⑶45-的有核紅細(xì)胞比例。
[0031]檢測(cè)結(jié)果如下:
[0032]數(shù)據(jù)以散點(diǎn)圖形式顯示，如圖2所示，P2ANDP3門內(nèi)細(xì)胞約占有核細(xì)胞的0.282%，即⑶34+細(xì)胞比例；Q4-1門內(nèi)細(xì)胞約占有核細(xì)胞的18.486%，即⑶71+⑶45-的有核紅細(xì)胞比例；提供該骨髓檢測(cè)樣本的患者最終檢測(cè)結(jié)果如下:
[0033]CD34+細(xì)胞占有核細(xì)胞比例:0.282%
[0034]CD71+CD45-細(xì)胞占有核細(xì)胞比例:18.486%。
[0035]判斷標(biāo)準(zhǔn):
[0036]CD34+細(xì)胞占有核細(xì)胞比例的參考值為，低增生性骨髓增生異常綜合癥:
3.5±0.5%，范圍I?7% ;再生障礙性貧血:0.13±0.02%，范圍:0.02?0.36%。(此參考值僅用于骨髓未被外周血稀釋的情況下)
[0037]上面已經(jīng)舉例說(shuō)明了本實(shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本實(shí)用新型的精神和范圍下可以對(duì)本實(shí)用新型技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)骨髓增生異常綜合癥和再生障礙性貧血的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括盒體(I)、盒蓋(2)和設(shè)置在盒體(I)內(nèi)的襯墊(3)，所述襯墊(3)上設(shè)有小孔，裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體IgGl、IgG2a和⑶45的試劑管(4)、裝有熒光標(biāo)記的單克隆抗體⑶71、⑶34和⑶45的試劑管(5)、裝有紅細(xì)胞裂解液的試劑管(6)和裝有PBS緩沖液的試劑管(7)被設(shè)置在所述小孔內(nèi)。
2.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:同一試劑管內(nèi)的單克隆抗體使用不同的熒光標(biāo)記，其中，IgGl和CD71使用FITC標(biāo)記，IgG2a和CD34使用PE標(biāo)記，CD45使用PerCP標(biāo)記。
3.按照權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述襯墊(3)上設(shè)有4個(gè)小孔，所述小孔在所述襯墊(3 )上分成兩排平行排列。
【文檔編號(hào)】G01N33/96GK203535057SQ201320688642
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】吳純斌, 秦曉明, 王顯鳳, 劉麗媛, 王緒華, 梁超, 方國(guó)偉, 黃士昂, 陳忠 申請(qǐng)人:北京海思特臨床檢驗(yàn)所有限公司