通過(guò)用于fsh、lh、hcg和bnp的照護(hù)點(diǎn)裝置的用于個(gè)體化藥物的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于檢測(cè)和診斷卵巢癌以及用于監(jiān)測(cè)卵巢癌進(jìn)展和用于監(jiān)測(cè)包括卵巢癌的各種癌癥治療的進(jìn)展的生物標(biāo)記物、方法、裝置、試劑、系統(tǒng)和試劑盒。本發(fā)明還涉及用于確定受試者中生物標(biāo)記物的濃度的照護(hù)點(diǎn)檢驗(yàn)(POCT)和方法。
【專利說(shuō)明】通過(guò)用于FSH、LH、HCG和BNP的照護(hù)點(diǎn)裝置的用于個(gè)體化 藥物的方法和組合物
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用 本？(^申請(qǐng)要求申請(qǐng)?zhí)枮?1/659,981(2012年6月15日提交）、61/667,081(2012年 7月2曰提交）和61/671717 (2012年7月14曰提交）的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)的權(quán) 益，其全部通過(guò)引用并入本文。
[0002] 關(guān)于聯(lián)邦資助的研究或開(kāi)發(fā)的聲明
[0003] 不適用。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004] 本發(fā)明涉及用于檢測(cè)和診斷卵巢癌以及用于監(jiān)測(cè)卵巢癌進(jìn)展和用于監(jiān)測(cè)包括卵 巢癌的各種癌癥治療的進(jìn)展的生物標(biāo)記物、方法、裝置、試劑、系統(tǒng)和試劑盒。本發(fā)明還涉及 用于確定受試者中生物標(biāo)記物的濃度的照護(hù)點(diǎn)檢驗(yàn)（P0CT)和方法。

【背景技術(shù)】
[0005] 癌癥是全世界內(nèi)死亡的主要原因，在2008年760萬(wàn)死于癌癥（在所有死亡中的 13%左右）。前列腺癌為男性癌癥的主要原因。在美國(guó)，卵巢癌是第九個(gè)最常見(jiàn)的女性癌 癥并且是第五個(gè)女性癌癥相關(guān)死亡的主要原因。每72名女性中的一名將發(fā)展成卵巢癌并 且每100名中的一名因這種形式的癌癥死去。美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，在2013年，22, 240名女 性將被診斷為卵巢癌并且約14, 230將因卵巢癌死去。卵巢癌的約85%至90%為上皮卵巢 癌。
[0006] 治療的選擇包括外科手術(shù)、化學(xué)療法和不定期的放射療法。外科手術(shù)通常涉及一 個(gè)或兩個(gè)卵巢、輸卵管和子宮的切除。在晚期疾病中，外科手術(shù)切除所有腹部轉(zhuǎn)移，將加強(qiáng) 化學(xué)療法的效果并且?guī)椭纳粕?。?duì)于進(jìn)行了切除癌癥組織的患III期卵巢癌的女性， 研究顯示由靜脈內(nèi)和直接向腹腔給藥的化學(xué)療法改善了生存。
[0007] 適于癌癥（并且，特別地，卵巢癌）的早期檢測(cè)和診斷的腫瘤標(biāo)記物的識(shí)別將改善 患者（尤其是那些呈現(xiàn)不明確的或沒(méi)有癥狀的）的臨床結(jié)果。目前，沒(méi)有開(kāi)發(fā)出成本效益 的篩選試驗(yàn)。
[0008] 在具有提高的促性腺素釋放激素（GnRH)(包括促卵泡激素（FSH)和黃體化激素 (LH))的個(gè)體，諸如絕經(jīng)后的女性或接受促排卵治療的女性中更常見(jiàn)卵巢的上皮癌癥。相 反地，減少的卵巢癌危險(xiǎn)與所有的那些涉及低水平的FSH和LH和減少暴露于FSH和LH的 多胎妊娠、人乳喂養(yǎng)、使用口服避孕藥、和雌激素替代療法的歷史相關(guān)。FSH(促卵泡激素） 調(diào)節(jié)卵巢腫瘤中的基因表達(dá)（Chu S，Rushdi S，Zumpe ET，Mamers P，Healy DL，Jobling T, Burger HG, Fuller PJ. (2002)FSH-regulated gene expression profiles in ovarian tumours and normal ovaries. Mol Hum Reprod. 8:426-33)并且由通過(guò)存活素的向上調(diào)節(jié) 增加血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)表達(dá)來(lái)引起卵巢癌的腫瘤血管形成（Huang Y，Hua K，Zhou X, Jin H, Chen X, Lu X, Yu Y, Zha X, Feng Y. (2008)Activation of the PI3K/AKT pathway mediates FSH-stimulated VEGF expression in ovarian serous cystadenocarcinoma. Cell Res. 18:780-91)。
[0009] 現(xiàn)在，使用癌癥抗原125(CA_125)作為血清生物標(biāo)記物用于卵巢癌。在具有 75-80%的晚期疾病和該標(biāo)記物的患者中提高CA-125的血清濃度。使用CA125作為血清腫 瘤標(biāo)記物用于監(jiān)測(cè)關(guān)于化學(xué)療法的響應(yīng)、檢測(cè)疾病復(fù)發(fā)、以及區(qū)分惡性骨盆腔腫瘤和良性 骨盆腔腫瘤。然而，目前它不能作為適當(dāng)?shù)脑\斷生物標(biāo)記物，因?yàn)榫哂懈咚降腃A-125的 多數(shù)健康女性沒(méi)有癌癥。
[0010] 除了缺乏用于早期檢測(cè)包括卵巢癌的癌癥的生物標(biāo)記物之外，獲得該生物標(biāo)記物 的方法同樣伴隨著困難。在已公布的生殖研究中，經(jīng)反復(fù)的靜脈穿刺術(shù)獲得的血漿或血清 樣本代表常規(guī)的黃金標(biāo)準(zhǔn)，用于監(jiān)測(cè)促卵泡激素（FSH)、黃體化激素（LH)、雌二醇（E2)和妊 娠素⑵的循環(huán)水平。不幸的是，對(duì)于研究受試者，頻繁的靜脈穿刺術(shù)的負(fù)擔(dān)重；并且，對(duì)研 究者而言，靜脈穿刺術(shù)樣本需要具有冷凍箱的立即處理和存儲(chǔ)設(shè)備。
[0011] 因此，需要包括有能夠定量預(yù)測(cè)生物標(biāo)記物的照護(hù)點(diǎn)裝置（point of care device)或使用點(diǎn)裝置（point of use device)的用于包括卵巢癌的癌癥的檢測(cè)和診斷的 改善的方法以及用于監(jiān)測(cè)疾病的進(jìn)展及監(jiān)測(cè)用于各種卵巢癌治療的進(jìn)展的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明涉及用于檢測(cè)各種生物標(biāo)記物（尤其是測(cè)量包括促性腺激素類的生物標(biāo) 記物的濃度）的方法、裝置、試劑、系統(tǒng)和試劑盒。
[0013] 本發(fā)明涉及用于包括卵巢癌、前列腺癌和睪丸癌的癌癥的檢測(cè)和診斷的生物標(biāo)記 物、方法、裝置、試劑、系統(tǒng)和試劑盒。
[0014] 本發(fā)明涉及用于監(jiān)測(cè)卵巢癌的進(jìn)展和用于監(jiān)測(cè)各種癌癥治療的進(jìn)展的生物標(biāo)記 物、方法、裝置、試劑、系統(tǒng)和試劑盒。
[0015] 本發(fā)明還涉及用于生物標(biāo)記物檢測(cè)的定量照護(hù)點(diǎn)裝置和方法，所述生物標(biāo)記物作 為用于診斷包括卵巢癌、前列腺癌和睪丸癌但不限于此的各種癌癥的診斷劑。
[0016] 在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種用于監(jiān)測(cè)用藥物治療的個(gè)體的生物標(biāo)記物的方 法。該方法涉及在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)從個(gè)體獲得樣本。該樣本是通過(guò)在照護(hù)點(diǎn)裝置或使用點(diǎn)裝置 (各自能夠定量生物標(biāo)記物）中，或由中心實(shí)驗(yàn)室定量藥物之前適合存儲(chǔ)至少兩種樣本的 基質(zhì)中采樣或自采樣，而在照護(hù)點(diǎn)或使用點(diǎn)收集的。獲得的信息可以適于引導(dǎo)用于個(gè)體的 藥物劑量。
[0017] 本發(fā)明還涉及用于定量促性腺激素類（hCG、LH和FSH)以及BNP的照護(hù)點(diǎn)和/或 使用點(diǎn)裝置，所述裝置允許個(gè)體化劑量和監(jiān)測(cè)，用于包括卵巢癌的各種癌癥的更有效的治 療。另外，可以通過(guò)hCG照護(hù)點(diǎn)/使用點(diǎn)（P0C/P0U)監(jiān)測(cè)膀胱癌和睪丸癌。
[0018] 通過(guò)在照護(hù)點(diǎn)或服務(wù)點(diǎn)（point of service)，例如，通過(guò)自采樣來(lái)收集樣本。可 以向側(cè)流型檢測(cè)裝置（lateral flow device)應(yīng)用樣本用于藥物的定量，并將結(jié)果傳送到 醫(yī)師或醫(yī)師代表，用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析。在其它的實(shí)施例中，在將樣本配送至中心實(shí)驗(yàn) 室用于定量和分析之前，在照護(hù)點(diǎn)或服務(wù)點(diǎn)，例如，通過(guò)自采樣收集樣本在適合的存儲(chǔ)基質(zhì) (例如硝酸纖維素）中。
[0019] 在某些實(shí)施例中，中心實(shí)驗(yàn)室可以獲得從個(gè)體收集的樣本，所述樣本是在各種時(shí) 間通過(guò)照護(hù)點(diǎn)或使用點(diǎn)、通過(guò)自采樣收集的。然后，在實(shí)驗(yàn)室測(cè)試樣本以定量感興趣的生物 標(biāo)記物，并基于結(jié)果，可以獲得卵巢癌的檢測(cè)或診斷。還可以使用獲得的結(jié)果確定疾病進(jìn)展 的量度以及監(jiān)測(cè)治療計(jì)劃的效能。
[0020] 在另一個(gè)方面，提供一種用于監(jiān)測(cè)用藥物治療的個(gè)體的生物標(biāo)記物的試劑盒。試 劑盒包括能夠定量一種或多種樣本中的藥物的多個(gè)照護(hù)點(diǎn)裝置或使用點(diǎn)裝置，或在中心實(shí) 驗(yàn)室定量之前適于存儲(chǔ)樣本的基質(zhì)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1A-C分別是BNP濃度對(duì)CA125濃度，F(xiàn)SH濃度對(duì)CA125濃度和BNP濃度對(duì)FSH 濃度的曲線圖。
[0022] 圖2A和B是，在卵巢癌患者中，通過(guò)P0C/P0U裝置分別確定的FSH水平和LH水平 的曲線圖。
[0023] 圖3A是由P0C掃描裝置制作的FSH濃度跡線，圖3B是由掃描裝置測(cè)量的濃度數(shù) 據(jù)制作的FSH濃度的曲線圖。
[0024] 圖4A是由P0C智能電話裝置制作的FSH濃度的跡線，圖4B是由智能電話裝置測(cè) 量的濃度數(shù)據(jù)制作的FSH濃度的曲線圖。
[0025] 圖5是用于FSH的傳統(tǒng)的化驗(yàn)和擴(kuò)大范圍的化驗(yàn)的比較。
[0026] 圖6A)傳統(tǒng)的側(cè)流型檢測(cè)的掃描；圖6B)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的側(cè)流型檢測(cè)掃描； 圖6C)傳統(tǒng)的側(cè)流型檢測(cè)的FSH濃度的曲線圖；圖6D)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的側(cè)流型檢測(cè) 的FSH濃度的曲線圖，與傳統(tǒng)的側(cè)流型檢測(cè)相比，證明用于FSH的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài)范圍。
[0027] 圖7A)用傳統(tǒng)的側(cè)流型檢測(cè)的hCG濃度的曲線圖；圖7B)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的 用側(cè)流型檢測(cè)的hCG濃度的曲線圖，與傳統(tǒng)的側(cè)流型檢測(cè)相比，證明用于FSH的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài) 范圍；圖7C)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的用側(cè)流型檢測(cè)的hCG濃度的曲線圖，與傳統(tǒng)的側(cè)流型檢 測(cè)相比，證明用于FSH的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài)范圍。

【具體實(shí)施方式】
[0028] 本發(fā)明涉及一種用于各種卵巢癌的檢測(cè)、診斷和進(jìn)展的生物標(biāo)記物、方法、裝置、 試劑、系統(tǒng)和試劑盒以及涉及一種用于確定各種癌癥治療的效能的能夠測(cè)量生物標(biāo)記物的 方法。使用例如側(cè)流型照護(hù)點(diǎn)試驗(yàn)從在照護(hù)點(diǎn)或使用點(diǎn)收集的樣本獲得生物標(biāo)記物數(shù)據(jù)。 有利地，樣本可以通過(guò)自采樣來(lái)獲得。在某些實(shí)施例中，樣本可以遞送至照護(hù)點(diǎn)裝置以定量 生物標(biāo)記物，將這樣獲得的結(jié)果報(bào)告至醫(yī)師或他的代表。在一個(gè)實(shí)施例中，使用照護(hù)點(diǎn)和使 用點(diǎn)檢測(cè)（其允許個(gè)體化劑量并監(jiān)測(cè)用于更有效的包括卵巢癌的各種癌癥的治療）來(lái)監(jiān)測(cè) 促性腺激素類（hCG、LH和FSH)以及BNP的定量。促性腺激素類可以從包括血漿、血清或 尿但不限于此的各種體液中被定量檢測(cè)。照護(hù)點(diǎn)需要有濃度檢測(cè)的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài)范圍。優(yōu)選 地，在照護(hù)點(diǎn)化驗(yàn)或測(cè)試需要沒(méi)有重復(fù)和沒(méi)有稀釋的單一的確定。大部分免疫化驗(yàn)具有2 log的工作范圍。例如，F(xiàn)SH的傳統(tǒng)的側(cè)流型定量方法限于只有1-100IU/L的范圍。本發(fā)明 的方法提供擴(kuò)大用于生物標(biāo)記物的檢測(cè)范圍至少1 log，或至少2 log，或至少3 log，或至 少4 log,或至少5 log,或至少6 log,或至少7 log或至少8 log。例如本發(fā)明的化驗(yàn)和 測(cè)試和方法允許可檢測(cè)的FSH的濃度的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài)范圍在約1-10, 000IU/L之間。該擴(kuò)大 的動(dòng)態(tài)范圍包含在臨床劑量FSH給藥后或在生物標(biāo)記物測(cè)試期間的血液中遇到的FSH的所 有可能的濃度。使用本發(fā)明的化驗(yàn)、裝置、試劑盒和生物標(biāo)記物的其它示例包括hCG的定量 應(yīng)用，所述hCG的定量應(yīng)用包括，但不限于：1)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)妊娠，2)檢測(cè)和管理異位妊娠， 3)確定用于唐氏綜合征胎兒的風(fēng)險(xiǎn)，4)預(yù)測(cè)先兆子癇，5)檢測(cè)和管理妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病， 6)管理睪丸生殖細(xì)胞惡性腫瘤和7)監(jiān)測(cè)其它人類的惡性腫瘤。對(duì)hCG照護(hù)點(diǎn)檢驗(yàn)的挑戰(zhàn) 包括家庭使用，在初級(jí)護(hù)理醫(yī)師辦公室使用或急診室使用，因此不稀釋或處理樣本是重要 的。樣本還應(yīng)該是血液或尿，并且化驗(yàn)必須具有足夠的動(dòng)態(tài)范圍以適應(yīng)hCG的61og范圍（0 至>500, 000IU/L)。本發(fā)明提供一種用于hCG的定量照護(hù)點(diǎn)化驗(yàn)，所述定量照護(hù)點(diǎn)化驗(yàn)使 用尿、血漿和血液作為樣本，并且代替?zhèn)鹘y(tǒng)的2-300IU/L的方法具有從至少2至21，000IU/ L的擴(kuò)大的動(dòng)態(tài)范圍。
[0029] 需要擴(kuò)大范圍的應(yīng)用包括，但不限于：1)異位妊娠：如果hCG高于某些水平1500 至2000mlU/mL，但用超聲看不到妊娠，則可疑為異位妊娠；如果hCG低于1500至2000mlU/ mL且超聲為陰性的，這可能預(yù)示異位妊娠或早期子宮內(nèi)妊娠；2)妊娠監(jiān)測(cè)：用于hCG的倍 增時(shí)間提供用于確定直到末次月經(jīng)日期后的約六周或七周是否正常地進(jìn)行妊娠的方法，在 這個(gè)點(diǎn)之后，hCG倍增時(shí)間開(kāi)始放慢，超聲技術(shù)成為用于獲取妊娠是怎樣發(fā)展的信息的最好 的工具；3)急診科，其中妊娠測(cè)試是最經(jīng)常安排的測(cè)試之一；4)睪丸癌和其它生殖系癌癥 的檢測(cè)和診斷。
[0030] 本發(fā)明的化驗(yàn)、測(cè)試和方法還提供一種卡帶（cassette)，所述卡帶可以使用具有 二維條形碼容量的光閱讀器來(lái)讀取，條件為數(shù)據(jù)能夠被打印輸出或存儲(chǔ)在閱讀器用于上傳 至數(shù)據(jù)庫(kù)，包括診所、醫(yī)生的辦公室或醫(yī)院的數(shù)據(jù)庫(kù)，但不限于此。閱讀器利用具有短距離 目標(biāo)比例的共焦光學(xué)器件。使用嵌入在二維條形碼的制定的校準(zhǔn)曲線將反射測(cè)量轉(zhuǎn)化為活 性單元。制作卡帶，使得在卡帶內(nèi)的樣本穩(wěn)定至少12小時(shí)、或至少24小時(shí)、或至少48小時(shí)、 或至少72小時(shí)，因此如果患者無(wú)有權(quán)使用閱讀器時(shí)，可以運(yùn)至用于定量的中心實(shí)驗(yàn)室或醫(yī) 生的辦公室。
[0031] 本發(fā)明中利用的閱讀器包括：共焦光閱讀器或手機(jī)/智能電話閱讀器，但不限于 此?？梢允褂帽景l(fā)明的方法、試劑盒、化驗(yàn)，請(qǐng)求利用具有短距離目標(biāo)比例的共焦光學(xué)器件 的反射光閱讀器。在后臺(tái)可以使用對(duì)每組卡帶特定的二維條形碼上嵌入的信息進(jìn)行計(jì)算。 可選地，能夠使用在照護(hù)點(diǎn)提供定量的而沒(méi)有足夠的資源的手機(jī)閱讀器來(lái)捕獲卡帶的圖像 且通過(guò)網(wǎng)絡(luò)將圖像傳輸至設(shè)備，諸如能夠?qū)崟r(shí)收取FSH或其它生物標(biāo)記物值的集中處理設(shè) 備。
[0032] 本發(fā)明提供一種用于包括FSH的促性腺激素類的快速和定量照護(hù)點(diǎn)測(cè)試，用于在 家里直接現(xiàn)場(chǎng)展開(kāi)，以及提供卡帶，所述卡帶由患者可以直接讀取或能夠運(yùn)至中心實(shí)驗(yàn)室/ 醫(yī)生的辦公室用于讀取。作為T(mén)DM，測(cè)試應(yīng)考慮到患者的更多的有效劑量，并且由此改善激 素手法治療或癌癥治療的功效。測(cè)試也是患者-中心的，引起更好的適應(yīng)性且患者參與個(gè) 體化的他/她的治療?；?yàn)的簡(jiǎn)單性應(yīng)考慮到它們?cè)诓话l(fā)達(dá)的、缺乏有權(quán)使用具有專門(mén)和 昂貴的裝備的中心實(shí)驗(yàn)室的區(qū)域展開(kāi)。擴(kuò)大的范圍排除了需要稀釋樣本，將它們帶進(jìn)傳統(tǒng) 的化驗(yàn)工作范圍之內(nèi)。
[0033] 可選地，使用適于樣本的收集和存儲(chǔ)的基質(zhì)或容器收集樣本，直到被中心實(shí)驗(yàn)室 收取并分析。適于收集和存儲(chǔ)樣本的基質(zhì)或容器的例子包括商業(yè)上可獲得的生物學(xué)采樣 濾紙系統(tǒng)，諸如 Whatman 3MM、GF/CM30、GF/QA30、S&S 903、GB002、GB003、或 GB004,但不限 于此?？刹捎糜糜谘簶?biāo)本收集的若干類型的印跡材料，例如，S&S 903纖維素（衍生自木 材或棉花）濾紙和Whatman玻璃纖維濾紙。血斑位于濾紙的一個(gè)或多個(gè)指定區(qū)域，允許干 燥，然后與測(cè)試請(qǐng)求表格一起郵寄到中心實(shí)驗(yàn)室。該收集的方法具有排除了需要在醫(yī)生的 辦公室或診所收集樣本的優(yōu)點(diǎn)。因此，在相當(dāng)?shù)毓?jié)約成本和時(shí)間的情況下，在0到72小時(shí) 的期間由患者方便地收集許多的樣本。這具有以下優(yōu)點(diǎn)：提高效率和將分析結(jié)果傳送至治 療醫(yī)師（他可以根據(jù)需要使用信息調(diào)整治療）過(guò)程中減少延期，并聯(lián)系患者傳達(dá)新的治療 計(jì)劃。在一個(gè)方面，提供用于單獨(dú)使用或以各種組合使用的一種或多種生物標(biāo)記物以診斷 卵巢癌，允許良性或惡性的骨盆腔腫瘤的不同的診斷，監(jiān)測(cè)卵巢癌進(jìn)展或監(jiān)測(cè)卵巢癌復(fù)發(fā)。 [0034] 本文中描述的任何一種生物標(biāo)記物可以使用在用于包括以下的任何一個(gè)的卵巢 癌的許多種臨床適應(yīng)癥：卵巢癌的檢測(cè)、卵巢癌的表征（例如確定卵巢癌類型，亞類或階 段），諸如通過(guò)確定骨盆腔腫瘤是否為良性或惡性的；確定卵巢癌預(yù)后；監(jiān)測(cè)卵巢癌進(jìn)展 或緩和；用于卵巢癌復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)；監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移；治療選擇（例如術(shù)前或術(shù)后的化學(xué)療法的選 擇）；將生物標(biāo)記物測(cè)試與另外的生物醫(yī)學(xué)信息結(jié)合，監(jiān)測(cè)對(duì)治療劑或其它治療的響應(yīng)。
[0035] 作為其中使用本文中描述的生物標(biāo)記物診斷卵巢癌的方式的示例，本文中描述的 不知道有卵巢癌的個(gè)體中的一種或多種的生物標(biāo)記物的差異表達(dá)可以預(yù)示個(gè)體具有卵巢 癌，因此可以在當(dāng)治療最有效的疾病的早期階段檢測(cè)卵巢癌。在卵巢癌的病程期間從"正 常"的生物標(biāo)記物的增加的表達(dá)可能預(yù)示卵巢癌進(jìn)展，然而與正常表達(dá)相比在表達(dá)上的減 少可能預(yù)示個(gè)體正在緩和或被成功地治療。與"正常"相比生物標(biāo)記物表達(dá)程度的增加可 能預(yù)示癌癥的進(jìn)展或卵巢癌治療沒(méi)有功效。
[0036] 另外，在個(gè)體顯然治愈卵巢癌后，一種或多種生物標(biāo)記物的差異表達(dá)的增加或減 少可能預(yù)示卵巢癌或卵巢癌復(fù)發(fā)。在這種情況下，可以重新開(kāi)始癌癥治療或需要時(shí)強(qiáng)化或 增補(bǔ)當(dāng)前的治療。而且，生物標(biāo)記物的水平的差異變化還可以預(yù)示對(duì)特殊治療劑的個(gè)體的 響應(yīng)。差異表達(dá)是指，相對(duì)于正?；?qū)φ帐茉囌呋驔](méi)有特定的疾病的受試者中它的表達(dá)，在 遭受特定的疾病的受試者中生物標(biāo)記物被活化至更高或更低水平的表達(dá)。差異表達(dá)包括， 在正常和患病的細(xì)胞之間或在遭遇不同疾病事件或不同治療的細(xì)胞之間的表達(dá)的定量和 定性的差異。
[0037] 本發(fā)明的生物標(biāo)記物包括CA-125、促卵泡激素（FSH)和腦利鈉肽（BNP)，其可以個(gè) 別使用或組合使用。FSH是通過(guò)前葉垂體來(lái)釋放的，并且在女性中在月經(jīng)周期的前半期間促 進(jìn)卵子和雌二醇的產(chǎn)生。腦利鈉肽是由人NPPB基因編碼的32aa，?3kDa肽，且在調(diào)節(jié)利 尿、血管舒張和分泌腎素及醛固酮方面起作用。
[0038] 樣本中的多種生物標(biāo)記物可能增加特定測(cè)試的敏感性和/或特異性。
[0039] 在任何水平下，生物標(biāo)記物可以被不同地表達(dá)，然而，生物標(biāo)記物通常以增加了至 少5%，至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少40%，至少 45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少 85%，至少90%，至少95%，至少100%，至少110%，至少120%，至少150%，至少200%，至 少500%或至少1000%的水平存在。本發(fā)明的生物標(biāo)記物的表達(dá)的水平可以比正?；?qū)φ?約高10 %至約高250%，約高10 %至約高150%，約高10 %至約高125%，約高10 %至約高 100%,約高10%至約高90%，約高10%至約高80%，約高10%至約高70%，約高10%至 約高60%，約高10 %至約高50%，約高10 %至約高40%，約高10 %至約高30%，約高10% 至約高20%，約高20 %至約高125%，約高20 %至約高100%，約高20 %至約高90%，約高 20 %至約高80%，約高20 %至約高70%，約高20 %至約高60%，約高20 %至約高50%， 約高20 %至約高40%，約高50 %至約250 %，約高50 %至約高125 %，或約高50 %至約高 100%。
[0040] 優(yōu)選地，生物標(biāo)記物區(qū)別地以統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的水平（例如，由Welch's T-test或 Wilcoxon' s rank-sum測(cè)試確定的小于0? 05的p-值和/或小于0? 10的q-值）存在?？蛇x 地，生物標(biāo)記物證明與卵巢癌存在或卵巢癌的特殊階段的相互關(guān)系。相互關(guān)系的范圍在陰 性1 (-1)(完全陰性的相互關(guān)系）和陽(yáng)性1 (+1)(完全陽(yáng)性的相互關(guān)系）之間。零（〇)意味 著沒(méi)有相互關(guān)系。實(shí)質(zhì)上陽(yáng)性的相互關(guān)系是指生物標(biāo)記物具有疾病或臨床測(cè)量的在+〇. 25 和+1.0之間的相互關(guān)系，而實(shí)質(zhì)上陰性的相互關(guān)系是指生物標(biāo)記物具有疾病或臨床測(cè)量 的在-0. 25和-1. 0之間的相互關(guān)系。明顯的陽(yáng)性的相互關(guān)系是指生物標(biāo)記物具有疾病或 臨床測(cè)量的在+〇. 25和+1. 0之間的相互關(guān)系，而明顯的陰性的相互關(guān)系是指生物標(biāo)記物具 有疾病或臨床測(cè)量的在_〇. 25和-1. 0之間的相互關(guān)系。
[0041] 在某種情況下，希望建立正?；蚧€值（或范圍）用于生物標(biāo)記物表達(dá)水平。根 據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法能夠?qū)θ魏翁厥馊后w、亞群體或組確定正常水平。一般 地，通過(guò)量化生物標(biāo)記物在從正常（健康）個(gè)體獲得的生物樣本（例如液體、細(xì)胞或組織） 中的數(shù)量確定生物標(biāo)記物的基線（正常）水平。標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的應(yīng)用允許確定表達(dá)的基 線水平以及與這樣的基線水平的偏差。
[0042] 能夠通過(guò)使用許多已知的分析方法檢測(cè)本發(fā)明的用于生物標(biāo)記物的生物標(biāo)記物 值?？梢酝ㄟ^(guò)使用能夠特異性地結(jié)合生物標(biāo)記物的一種或多種分子的捕獲劑促進(jìn)生物標(biāo)記 物檢測(cè)。在溶液或固定在固體載體的捕獲劑可以暴露于生物標(biāo)記物并且可以以包括以下許 多方式檢測(cè)結(jié)合，所述方式包括熒光、化學(xué)發(fā)光、染料、及其它光學(xué)上檢測(cè)的方法，但不限 于此。免疫測(cè)定方法基于抗體與其對(duì)應(yīng)的分析物的結(jié)合且能夠根據(jù)特定的化驗(yàn)形式檢測(cè)樣 本中的分析物。
[0043] 根據(jù)美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)，根據(jù)AJCC/TN系統(tǒng)可以將卵巢癌分階段。這可以描述為原發(fā) 性腫瘤的程度（T)、不存在或存在向附近淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N)、和不存在或存在遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移（M)。用 于卵巢癌的T類型包括：T1 :癌癥被限制在一個(gè)或兩個(gè)卵巢；T2 :癌癥在一個(gè)或兩個(gè)卵巢中 并擴(kuò)展至骨盆組織，以及T3 :癌癥在一個(gè)或兩個(gè)卵巢中并擴(kuò)散至腹膜。N類型預(yù)示癌癥是否 擴(kuò)散至區(qū)域性的（附近）淋巴結(jié)。Nx:由于信息不完全，可能沒(méi)有淋巴結(jié)損害的描述。N0: 沒(méi)有淋巴結(jié)損害。N1 :在腫瘤附近的淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。一旦確定患者的T、N、和M類型， 這個(gè)信息將被組合在稱為階段分組的過(guò)程以確定階段，所述階段以羅馬數(shù)字表達(dá)從為階段 I (最初階段）至階段IV (最晚期階段）。階段1 :癌癥還包含在一個(gè)卵巢（或兩個(gè)卵巢） 內(nèi)。它沒(méi)有擴(kuò)散到卵巢外部。階段2:癌癥在一個(gè)或兩個(gè)卵巢內(nèi)并擴(kuò)散至骨盆內(nèi)的其它器 官（諸如子宮、輸卵管、膀胱、乙狀結(jié)腸或直腸）。它沒(méi)有擴(kuò)散至淋巴結(jié)、腹膜、或遠(yuǎn)端部位。 階段3 :癌癥在一個(gè)或兩個(gè)卵巢內(nèi)，并且存在下述的一個(gè)或兩個(gè)：（1)癌癥擴(kuò)散至骨盆以外 的腹部?jī)?nèi)層；（2)癌癥擴(kuò)散至淋巴結(jié)。階段4:這是卵巢癌的最晚期階段。在這個(gè)階段，癌 癥擴(kuò)散至腹腔以外的肝臟、肺、或其它器官中。在肺附近的流體中發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞也是階段 IV疾病的證據(jù)。
[0044] 測(cè)試藥物的適當(dāng)裝置或方法的非限制的示例包括用于確定樣本中的分析物的濃 度的側(cè)流型檢測(cè)裝置，包括提供用于測(cè)量分析物中使用的側(cè)流型檢測(cè)帶?？梢詼y(cè)試的分析 物的示例包括治療藥物、藥物代謝產(chǎn)物和激素。樣本應(yīng)用于側(cè)流型檢測(cè)帶引起樣本中的分 析物的部分結(jié)合至側(cè)流型檢測(cè)帶的成分，使得產(chǎn)生與樣本中分析物的濃度成比例的可檢測(cè) 的信號(hào)。
[0045] 可選地，能夠通過(guò)任何適合的化驗(yàn)對(duì)由個(gè)人遞交至實(shí)驗(yàn)室的樣本實(shí)施定量，任何 適合的化驗(yàn)包括，那些本領(lǐng)域中已知的，諸如ELISA、液相色譜質(zhì)譜法（LC-MS)、薄層色譜法 (TLC)、高效液相色譜法（HPLC)、質(zhì)譜法（MS)或已經(jīng)充分說(shuō)明的在中心實(shí)驗(yàn)室用于藥物監(jiān) 測(cè)的其它的傳統(tǒng)的化驗(yàn)，但不限于此。樣本可以是適當(dāng)?shù)幕|(zhì)中在手指刺破之后收集的且 運(yùn)送或以其他方式遞送至實(shí)驗(yàn)室用于測(cè)試的干血斑的形式存儲(chǔ)的全血。能夠用毛細(xì)管和/ 或設(shè)計(jì)為將精確和少量血液遞送至干燥血斑卡片（卡片穿孔機(jī)可變性取代移液管可變性） 的裝置進(jìn)行取樣。
[0046] 示例
[0047] 實(shí)施例1
[0048] 用于個(gè)體化劑量的CA125監(jiān)測(cè)
[0049] 診斷卵巢癌時(shí)收集的血清樣本（N = 136)用于CA-125測(cè)試并使用JMP9統(tǒng)計(jì)分析 軟件評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)?；颊咴\斷具有卵巢癌時(shí)收集血清樣本（N= 136)。進(jìn)行ELSA方法以檢測(cè)患 者血清中的CA125水平。
[0050] 表 1
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于診斷受試者中癌癥存在的方法，所述方法包括： 確定所述受試者中的一種或多種生物標(biāo)記物的水平；以及 將所述受試者中所述生物標(biāo)記物的水平與生物標(biāo)記物的正常水平進(jìn)行比較。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥為卵巢癌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物選自由hCG、LH、FSH、BNP和 CA-125及其組合所組成的組。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比所述正常水平 高至少10%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比所述正常水平 高至少50%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為促性腺激素。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為FSH。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為hCG。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為L(zhǎng)H。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為BNP。
11. 一種用于在被診斷為卵巢癌的患者中監(jiān)測(cè)卵巢癌的進(jìn)展的方法，所述方法包括： 在第一時(shí)間點(diǎn)，確定所述患者中一種或者多種生物標(biāo)記物的水平；以及 在第二時(shí)間點(diǎn)，將所述患者中所述生物標(biāo)記物的水平進(jìn)行比較，以便確定所述卵巢癌 的進(jìn)展。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物選自由hCG、LH、FSH、BNP和 CA-125及其組合所組成的組。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比正常水平高 至少10%。
14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比正常水平高 至少50%。
15. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為FSH。
16. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為BNP。
17. -種用于在被診斷為卵巢癌的患者中監(jiān)測(cè)卵巢癌療法效能的方法，所述方法包 括： 在第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)確定所述患者中的一種或多種生物標(biāo)記物水平； 用卵巢癌療法治療所述患者；在第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)確定患者中的一種或多種所述生物標(biāo)記 物水平；以及 將在第一時(shí)間點(diǎn)的受試者中的所述生物標(biāo)記物水平與在第二時(shí)間點(diǎn)的所述生物標(biāo)記 物水平比較，以確定所述卵巢癌療法的效能。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物選自由hCG、LH、FSH、BNP和 CA-125及其組合所組成的組。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比正常水平高 至少10%。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述受試者中的生物標(biāo)記物水平比正常水平高 至少50%。
10.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為促性腺激素。
22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述促性腺激素為FSH。
23. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述促性腺激素為L(zhǎng)H。
24. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述促性腺激素為hCG。
25. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述生物標(biāo)記物為BNP。
26. 根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)所述的方法，其中通過(guò)定量照護(hù)點(diǎn)裝置進(jìn)行所述患者 中的生物標(biāo)記物的水平的確定。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述照護(hù)點(diǎn)裝置為側(cè)流型檢測(cè)裝置。
28. -種用于個(gè)體生物標(biāo)記物監(jiān)測(cè)的試劑盒，所述個(gè)體經(jīng)過(guò)卵巢癌療法治療，所述試劑 盒包括： 多個(gè)照護(hù)點(diǎn)裝置或使用點(diǎn)裝置，所述多個(gè)照護(hù)點(diǎn)裝置或使用點(diǎn)裝置能夠定量多個(gè)血液 樣本中的一個(gè)中的所述生物標(biāo)記物。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的試劑盒，進(jìn)一步包括用于收集至少兩個(gè)所述樣本的指令。
30. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述POC裝置為擴(kuò)大范圍的側(cè)流型檢測(cè)裝置。
31. -種用于檢測(cè)女性中妊娠的方法，所述方法包括： 在第一時(shí)間點(diǎn)確定患者中的hCG的水平；以及 在第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較受試者中的生物標(biāo)記物水平以確定妊娠。
【文檔編號(hào)】G01N33/53GK104395755SQ201380031664
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2013年6月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月15日
【發(fā)明者】武永·特里優(yōu) 申請(qǐng)人:斯特林醫(yī)藥公司