免疫層析法、該方法中使用的檢測(cè)裝置和試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種免疫層析法，其是利用檢測(cè)裝置一并對(duì)熒光和吸光分別進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定的多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法，其中，對(duì)于熒光顆粒和吸光顆粒，將熒光顆粒的熒光的激發(fā)波長(zhǎng)與吸光顆粒的吸收波長(zhǎng)設(shè)為相同的波長(zhǎng)區(qū)域，對(duì)測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、以及測(cè)試區(qū)域和測(cè)試區(qū)域以外的非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度一并進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。
【專利說明】免疫層析法、該方法中使用的檢測(cè)裝置和試劑 【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫層析法、該方法中使用的檢測(cè)裝置和試劑。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 免疫層析法是使用納米顆粒的診斷方法。該方法操作簡(jiǎn)便，至判定為止所需的時(shí) 間較短，為5?30分鐘程度，不需要昂貴的裝置，因此作為優(yōu)異的簡(jiǎn)易診斷方法多用于臨床 現(xiàn)場(chǎng)。例如，在流感病毒的感染的判定中，可以將采自患者的咽喉擦拭液或鼻腔擦拭液作為 被測(cè)物，當(dāng)場(chǎng)在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行判定，作為感染的簡(jiǎn)易判定方法的有力工具得到了普及。
[0003] 免疫層析法中，一般使用金膠體、著色乳液顆粒等著色顆粒作為標(biāo)記顆粒。根據(jù)檢 體的狀態(tài)、量、或者測(cè)定的內(nèi)容的不同，使用這些著色顆粒的免疫層析法中可能會(huì)有靈敏度 不充分的情況。某些情況下，可能被判斷為偽陰性·偽陽(yáng)性，從而成為誤診等的原因。為了 解決這些課題，面對(duì)免疫層析法的高靈敏度化進(jìn)行了嘗試。
[0004] 迄今為止，作為免疫層析法的高靈敏度化的方法，本 申請(qǐng)人:提出了使用熒光顆粒 的熒光免疫層析法、或者將其與吸光顆粒組合的方法（參照后述的專利文獻(xiàn)1?3)。根據(jù) 在此提出的技術(shù)，通過目視就能夠?qū)τ谟蓽y(cè)試區(qū)域發(fā)出的熒光進(jìn)行檢測(cè)，但考慮到更高的 精度及定量測(cè)定的方便性等因素也可以利用受光裝置進(jìn)行檢測(cè)。作為可適于該測(cè)定的高靈 敏度的檢測(cè)裝置，本 申請(qǐng)人:之前提出了下述專利文獻(xiàn)4的利用特有的透鏡體系的技術(shù)。
[0005] 【現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)】
[0006] 【專利文獻(xiàn)】
[0007] 專利文獻(xiàn)1 :國(guó)際公開第2008/018566號(hào)小冊(cè)子
[0008] 專利文獻(xiàn)2 :國(guó)際公開第2007/097377號(hào)小冊(cè)子
[0009] 專利文獻(xiàn)3 :日本特開2010-14631號(hào)公報(bào)
[0010] 專利文獻(xiàn)4 :日本特開2010-197248號(hào)公報(bào) 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0011]【發(fā)明所要解決的課題】
[0012] 此外，本 申請(qǐng)人:還推進(jìn)了多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法的技術(shù)開發(fā)，其是利用將熒光 顆粒和吸光顆粒組合而成的試劑，分別捕捉不同的目標(biāo)物質(zhì)從而進(jìn)行檢測(cè)的方法（所述專 利文獻(xiàn)3公開了使用熒光顆粒和吸光顆粒卻捕捉相同目標(biāo)物質(zhì)的單項(xiàng)目檢測(cè)技術(shù)）。由此 能夠在例如診療現(xiàn)場(chǎng)一并對(duì)2個(gè)以上的疾病或感染項(xiàng)目等進(jìn)行診斷，能夠利用免疫層析法 大幅改善檢査的效率。至今還沒有在將熒光和吸光組合起來的設(shè)想之下的技術(shù)開發(fā)，關(guān)于 其檢測(cè)方法和裝置的研宄，也還處于未著手的狀態(tài)。
[0013] 鑒于以上情況，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)方法和檢測(cè)裝置，在將分別捕捉 不同的目標(biāo)物質(zhì)的熒光顆粒和吸光顆粒組合利用的免疫層析法中，能夠?qū)晒夂臀庖徊?進(jìn)tx檢驗(yàn)測(cè)定。
[0014] 【解決課題的手段】
[0015] 本發(fā)明的上述的課題通過下述的手段得到了解決。
[0016] 〔 1〕一種免疫層析法，其是多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法，該方法中，在具有熒光顆粒 和吸光顆粒作為標(biāo)記顆粒的測(cè)試片上施加可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和B的被測(cè)物液體，使所述 熒光顆粒和吸光顆粒流動(dòng)，從而利用檢測(cè)裝置一并對(duì)由在所述測(cè)試片的測(cè)試區(qū)域捕捉到的 熒光顆粒和吸光顆粒所發(fā)出的熒光和吸光分別進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定，
[0017] 其特征在于，
[0018] 所述檢測(cè)裝置具有檢測(cè)熒光和吸光的檢測(cè)部和對(duì)其進(jìn)行控制的控制部，另一方 面，
[0019] 對(duì)于所述熒光顆粒和吸光顆粒，將該熒光顆粒的熒光的激發(fā)波長(zhǎng)（A1)與吸光顆 粒的吸收波長(zhǎng)（λ 2)設(shè)為相同的波長(zhǎng)區(qū)域，并且，將所述熒光顆粒捕捉并檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)A 與所述吸光顆粒捕捉并檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)B設(shè)為不同的物質(zhì)，
[0020] 所述測(cè)試片中，將捕捉所述熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域ntl與捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試 區(qū)域n t2設(shè)為不同的位置，
[0021] 所述檢測(cè)裝置的控制單元由此發(fā)出指令，藉由所述檢測(cè)部對(duì)所述測(cè)試片進(jìn)行掃描 時(shí)，對(duì)所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度、測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、以及測(cè)試區(qū)域ntl和測(cè)試 區(qū)域n t2以外的非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度一并進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。
[0022] 〔 2〕如〔1〕所述的免疫層析法，其中，所述檢測(cè)裝置具有讀取解析單元，該讀取解析 單元根據(jù)捕捉所述熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域ntl的反射光強(qiáng)度大于非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、 以及捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域n t2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來 進(jìn)行目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)。
[0023] 〔3〕如〔1〕或〔2〕所述的免疫層析法，其中，所述吸光顆粒為金膠體顆粒、著色二氧 化硅顆?；蛑橐侯w粒。
[0024] 〔4〕如〔1〕?〔3〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中，所述熒光激發(fā)波長(zhǎng)（A1)和 吸光吸收波長(zhǎng)（λ 2)處于波長(zhǎng)為300?800nm的范圍。
[0025] 〔5〕如〔1〕?〔4〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中，所述測(cè)試區(qū)域ntl與所述測(cè) 試區(qū)域n t2的間隔為1?Ktom的范圍。
[0026] 〔6〕如〔1〕?〔5〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中，由屬于所述熒光激發(fā)波長(zhǎng)的 峰和/或?qū)儆谖馕詹ㄩL(zhǎng)的峰的面積來對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的量進(jìn)行定量。
[0027] 〔7〕如〔1〕?〔6〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中，通過設(shè)于所述檢測(cè)部的1個(gè) 受光器，對(duì)捕捉所述熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度、捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域 nt2的反射光強(qiáng)度、和所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。
[0028] 〔8〕如〔1〕?〔7〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中，對(duì)于可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和 目標(biāo)物質(zhì)B的被測(cè)物，由所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度 來判定目標(biāo)物質(zhì)A的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光 強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì)B的存在，由所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū)域n t2的反射 光強(qiáng)度、非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度為同程度的值來判定兩者的不存在，由所述測(cè)試區(qū)域ntl 的反射光強(qiáng)度大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、且所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度小于 所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定兩者的存在。
[0029] 〔9〕一種檢測(cè)裝置，其是進(jìn)行多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法的檢測(cè)裝置，該免疫層析法 中，使用具有熒光顆粒和吸光顆粒作為標(biāo)記顆粒的測(cè)試片，施加可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和B的 被測(cè)物液體，使所述熒光顆粒和吸光顆粒流動(dòng)，在所述測(cè)試片中，對(duì)捕捉熒光顆粒的測(cè)試區(qū) 域ntl的反射光強(qiáng)度、捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域n t2的反射光強(qiáng)度、測(cè)試區(qū)域n tl和測(cè)試區(qū)域 nt2以外的非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度一并進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定，
[0030] 其中，
[0031] 所述檢測(cè)裝置具有檢測(cè)熒光和吸光的檢測(cè)部和對(duì)其進(jìn)行控制的控制部，
[0032] 所述檢測(cè)裝置的控制單元由此發(fā)出指令，藉由所述檢測(cè)部對(duì)所述測(cè)試片進(jìn)行掃描 時(shí)，在滿足下述（i)?（iii)的條件下一并對(duì)所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū) 域nt2的反射光強(qiáng)度和所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。
[0033] (i)所述熒光顆粒的熒光的激發(fā)波長(zhǎng)與所述吸光顆粒的吸收波長(zhǎng)為相同的波長(zhǎng)區(qū) 域。
[0034] (ii)所述目標(biāo)物質(zhì)A與所述目標(biāo)物質(zhì)B不同。
[0035] (iii)所述測(cè)試區(qū)域ntl與所述測(cè)試區(qū)域n t2處于不同的位置。
[0036] 〔10〕如〔9〕所述的檢測(cè)裝置，其中，該檢測(cè)裝置還具有讀取解析單元，該讀取解析 單元由所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì) A的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo) 物質(zhì)B的存在，由所述測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū)域n t2的反射光強(qiáng)度、非測(cè)試 區(qū)域的反射光強(qiáng)度為同程度的值來判定兩者的不存在，由所述測(cè)試區(qū)域ntl的反射光強(qiáng)度 大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、且所述測(cè)試區(qū)域n t2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū) 域的反射光強(qiáng)度來判定兩者的存在。
[0037] 〔11〕如〔9〕或〔10〕所述的檢測(cè)裝置，其中，對(duì)于在所述檢測(cè)裝置的檢測(cè)部安裝的 受光器的受光靈敏度，在對(duì)所述吸光和熒光進(jìn)行檢測(cè)的波長(zhǎng)區(qū)域具有受光區(qū)域。
[0038] 〔12〕一種免疫層析法用試劑，其是用于〔1〕?〔8〕的任一項(xiàng)所述的免疫層析法的 試劑，其中，該試劑含有熒光顆粒和吸光顆粒，所述熒光顆粒中導(dǎo)入有捕捉目標(biāo)物質(zhì)A的結(jié) 合性物質(zhì)，所述吸光顆粒中導(dǎo)入有捕捉目標(biāo)物質(zhì)B的結(jié)合性物質(zhì)，所述目標(biāo)物質(zhì)與所述目 標(biāo)物質(zhì)A不同。
[0039] 本說明書中，"一并"進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定是指，利用單一的裝置對(duì)2個(gè)以上的項(xiàng)目進(jìn)行檢 測(cè)或測(cè)定無(wú)需轉(zhuǎn)換其他裝置。也可以不是同時(shí)進(jìn)行，但優(yōu)選同時(shí)期（優(yōu)選為30秒以內(nèi)、更 優(yōu)選為10秒以內(nèi)）進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。典型的含義是能夠利用檢測(cè)部通過一次掃描來進(jìn)行檢 測(cè)和測(cè)定。
[0040] 【發(fā)明的效果】
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的免疫層析法及其檢測(cè)裝置，在將分別捕捉不同的目標(biāo)物質(zhì)的熒光顆 粒和吸光顆粒組合利用的免疫層析法中，能夠?qū)晒夂臀庖徊⑦M(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。并且，通過 該一次性的熒光和吸光的檢驗(yàn)測(cè)定，能夠有效地進(jìn)行2個(gè)以上的目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)等，能夠 大幅改善用于診斷和治療等的免疫層析法測(cè)試的效率。此外，本發(fā)明的檢測(cè)裝置能夠利用1 個(gè)檢測(cè)部對(duì)熒光和吸光一并進(jìn)行檢測(cè)，因此有利于免疫層析法中的省空間化和器件成本的 降低。
[0042] 此外，本發(fā)明的免疫層析法中，作為試劑顆粒（特別是熒光顆粒）可以舉出二氧化 硅顆粒和乳液顆粒，與乳液顆粒相比，二氧化硅是光透過性更高的材質(zhì)，因此光源能夠有效 地浸入和透過內(nèi)部，作為熒光顆粒的情況下，二氧化硅顆粒所含有的色素能夠有效地得到 激發(fā)，作為吸光顆粒的情況下，二氧化硅顆粒所含有的色素能夠有效地吸收光源，發(fā)揮出更 優(yōu)異的效果。
[0043] 本發(fā)明的上述和其他的特征和優(yōu)點(diǎn)會(huì)通過下述的記載和附圖得到進(jìn)一步明確。 【【專利附圖】

【附圖說明】】
[0044] 圖1是示意性表示適于本發(fā)明使用的長(zhǎng)條測(cè)試體的分解立體圖。
[0045] 圖2是適于本發(fā)明使用的免疫層析測(cè)試片的說明圖，圖2的（a)為俯視圖，圖2的 (b)為展開截面圖。
[0046] 圖3是表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的試劑顆粒的捕捉形態(tài)的說明圖。
[0047] 圖4是示意性表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的雜化檢測(cè)裝置的實(shí)例的立體圖。
[0048] 圖5是示意性表示本發(fā)明的免疫層析法中檢測(cè)到的熒光峰和吸光峰與測(cè)試片的 測(cè)試區(qū)域的關(guān)系的說明圖。
[0049] 圖6是表示A型流感核蛋白質(zhì)的濃度與I1-Ie的關(guān)系的曲線圖。
[0050] 圖7是表示B型流感核蛋白質(zhì)的濃度與1。_12的關(guān)系的曲線圖。 【【具體實(shí)施方式】】
[0051] 本發(fā)明的免疫層析法的特征在于利用特定的檢測(cè)裝置（以下有時(shí)稱為"雜化檢測(cè) 裝置"）一并對(duì)熒光和吸光進(jìn)行檢測(cè)。以下針對(duì)這一點(diǎn)，以優(yōu)選的實(shí)施方式為中心進(jìn)行詳細(xì) 說明。
[0052] [測(cè)試片]
[0053] 首先，從本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的測(cè)試片的基本構(gòu)成來進(jìn)行說明。本實(shí)施方式的 免疫層析法用測(cè)試片（試紙條）以下述部件相互產(chǎn)生毛細(xì)現(xiàn)象的方式串聯(lián)聯(lián)結(jié)。
[0054] ?試樣添加用部件（樣品墊）8a
[0055] ?滲入有熒光二氧化硅顆粒（熒光標(biāo)記體）2和金膠體顆粒（吸光標(biāo)記體）3并干 燥所獲得的部件（結(jié)合墊）8b
[0056] ?具有測(cè)試區(qū)域和參照區(qū)域的膜（抗體固定化膜）8c
[0057] ?吸收墊8d
[0058] 本實(shí)施方式中，對(duì)構(gòu)成測(cè)試片的部件沒有特別限制，只要具有膜，也可以省略上述 列舉的部分部件，或者也可以組合使用上述以外的部件。例如，上述部件以外，也可以應(yīng)用 覆蓋表面的透明膜，或者在各部件之間賦予功能性的片材。反過來，在將被測(cè)物液體與標(biāo)記 試劑納米顆粒的混合液混合而滴加于樣品墊的方法中，也可以省略結(jié)合墊。
[0059] 本實(shí)施方式中，如圖1和圖2所示，上述的平面測(cè)試片10夾持內(nèi)包于殼體上部6a 與殼體下部6b之間，形成了長(zhǎng)條測(cè)試體100。殼體上部6a設(shè)有檢測(cè)開口部61和被測(cè)物導(dǎo) 入開口部62。通過該檢測(cè)開口部61，能夠?qū)⒄丈涔馑椭羶?nèi)部的膜10,從而對(duì)由此處發(fā)出的 反射光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)?觀測(cè)。另一方面，能夠藉由被測(cè)物導(dǎo)入開口部62將被測(cè)物液體S供 給至膜10進(jìn)行測(cè)定測(cè)試。需要說明的是，本說明書中，將由熒光顆粒所發(fā)出的熒光、吸光顆 粒所吸收的吸光以及測(cè)試區(qū)域以外的部分（非測(cè)試區(qū)域）中針對(duì)所述照射光的反射光總稱 為"反射光"。因此，將來自捕捉熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域n tl的熒光的強(qiáng)度稱為"測(cè)試區(qū)域ntl的 反射光強(qiáng)度（I1) "，將來自捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的吸光的強(qiáng)度稱為"測(cè)試區(qū)域n t2的 反射光強(qiáng)度（I2) "，將所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度稱為"非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度（I。)"。
[0060] 本實(shí)施方式中，在所述測(cè)試片10的中央，在膜8c設(shè)有2個(gè)測(cè)試區(qū)域（第1測(cè)試 區(qū)域n tl和第2測(cè)試區(qū)域nt2)。該第1測(cè)試區(qū)域ntl中配置并固定有捕捉目標(biāo)物質(zhì)（被測(cè)物 質(zhì)）IA的生物體分子4。即，第1測(cè)試區(qū)域中捕捉含有熒光顆粒的標(biāo)記體2。另一方面，第 2測(cè)試區(qū)域配置有捕捉目標(biāo)物質(zhì)（被測(cè)物質(zhì)）IB的生物體分子5,在此捕捉吸光標(biāo)記體3。 由此能夠?qū)?個(gè)目標(biāo)物質(zhì)、即目標(biāo)物質(zhì)A(IA)和目標(biāo)物質(zhì)B(IB)進(jìn)行區(qū)別檢測(cè)。即，施加被 測(cè)物液體s后，其中所含有的目標(biāo)物質(zhì)1(目標(biāo)物質(zhì)A(IA)和目標(biāo)物質(zhì)B(IB))隨熒光標(biāo)記 體2和吸光標(biāo)記體3-起朝著流動(dòng)方向L在膜內(nèi)流動(dòng)。然后，捕捉到目標(biāo)物質(zhì)A(IA)的熒 光標(biāo)記體2被第1測(cè)試區(qū)域n tl捕捉，成為能夠在此判斷其存在的狀態(tài)。進(jìn)而，朝著流動(dòng)方 向L流動(dòng)的目標(biāo)物質(zhì)B(IB)被吸光標(biāo)記體3捕捉，其在第2測(cè)試區(qū)域n t2被捕捉，由此處于 能夠?qū)ζ浯嬖谶M(jìn)行檢測(cè)的狀態(tài)。
[0061] 對(duì)上述的捕捉形態(tài)進(jìn)行總結(jié)，本實(shí)施方式中，針對(duì)含有目標(biāo)物質(zhì)A和目標(biāo)物質(zhì)B的 被測(cè)物試樣，通過捕捉熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度（I1)大于測(cè)試區(qū)域ntl和測(cè)試 區(qū)域nt2以外的非測(cè)試區(qū)域11。（參照?qǐng)D2)的反射光強(qiáng)度（U(I 1Mc)來進(jìn)行判定。并且，通 過捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度（I 2)小于非測(cè)試區(qū)域η。的反射光強(qiáng)度（I。） (I2〈IC)來判定目標(biāo)物質(zhì)B的存在。通過捕捉熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域n tl的反射光強(qiáng)度（I1)、 捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度（I 2)、非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度（I。）為同程度 的值來判定兩者的不存在?？梢酝ㄟ^捕捉熒光顆粒的測(cè)試區(qū)域ntl的反射光強(qiáng)度（I 1)大于 非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度（I2)、且捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度（I 2)小于非 測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度（I。）來判定兩者的存在。由此能夠通過一次掃描對(duì)可能含有2種 目標(biāo)物質(zhì)的試樣進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。需要說明的是，所述反射光的強(qiáng)度為同程度是指，根據(jù)需要 以非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度（I。）（a. u.)為基礎(chǔ)，將I。的±10%以內(nèi)的情況稱為"同程度"， 更嚴(yán)格地說，是指I。的± 5 %以內(nèi)的情況。需要說明的是，反射光強(qiáng)度原本會(huì)根據(jù)測(cè)定裝置 和條件而變化，如上所述，可以通過利用相對(duì)值（比例）進(jìn)行評(píng)價(jià)來歸納。嚴(yán)密地定義測(cè)定 條件時(shí)，只要不特別聲明，則設(shè)為后述實(shí)施例中測(cè)定的條件。
[0062] 參照?qǐng)D2(a)和（b)對(duì)本實(shí)施方式的免疫層析法用試紙條進(jìn)行說明，但本發(fā)明不限 于這些說明。需要說明的是，圖2中顯示出了襯板Se而未做省略。圖2(a)表示本發(fā)明的 免疫層析法用試紙條（測(cè)試片）10的優(yōu)選實(shí)施方式的俯視圖，圖2(b)是顯示圖2(a)中示 出的免疫層析法用試紙條的展開縱截面圖的圖。如上所述，本實(shí)施方式的免疫層析法用試 紙條10具備樣品墊8a、結(jié)合墊8b、膜8c、吸收墊8d。此外，上述各構(gòu)成部件利用帶有粘合 劑的襯板8e進(jìn)行了打底。
[0063] 圖1和2中給出了按照敘述順序配置有第1測(cè)試區(qū)域ntl、第2測(cè)試區(qū)域n t2、參照 區(qū)域的例子。并且，本實(shí)施方式中，非測(cè)試區(qū)域η。被定義為膜8c的表面上第1測(cè)試區(qū)域 n tl、第2測(cè)試區(qū)域nt2以及參照區(qū)域以外的部分。但是，本發(fā)明并不限于如此，例如測(cè)試 區(qū)域的順序可以相反，或者可以將參照區(qū)域的配置位置設(shè)于其他部分。并且，也可以是不設(shè) 置參照區(qū)域I的構(gòu)成。
[0064] 對(duì)第1測(cè)試區(qū)域ntl與第2測(cè)試區(qū)域n t2的間隔d(圖2)沒有特別限定，從避免由熒 光與吸光的重復(fù)導(dǎo)致的光強(qiáng)度的相抵的方面考慮，優(yōu)選為2mm?8_，更優(yōu)選為3mm?5_。
[0065] [目標(biāo)物質(zhì)]
[0066] 本發(fā)明中，作為檢測(cè)、定量的對(duì)象的目標(biāo)物質(zhì)1可以舉出抗原、抗體、DNA、RNA、糖、 糖鏈、配位體、受體、肽、化學(xué)物質(zhì)等。本發(fā)明中，對(duì)含有目標(biāo)物質(zhì)1的試樣沒有特別限制，可 以舉出尿、血液等液體試樣。在此示出本發(fā)明的重要特征之一，該目標(biāo)物質(zhì)經(jīng)熒光檢測(cè)到的 物質(zhì)（目標(biāo)物質(zhì)1A)和經(jīng)吸光檢測(cè)到的物質(zhì)（目標(biāo)物質(zhì)1B)不同。從該方面考慮，本發(fā)明 與針對(duì)同一目標(biāo)物質(zhì)利用熒光和吸光兩者進(jìn)行檢測(cè)的所述專利文獻(xiàn)3的技術(shù)在發(fā)明的基 本構(gòu)想上是不同的。
[0067] 本發(fā)明的免疫層析法中，能夠?qū)δ繕?biāo)物質(zhì)A與目標(biāo)物質(zhì)B不同的2種以上的目標(biāo) 物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。其中，也可以出于確認(rèn)不存在目標(biāo)物質(zhì)A和B(陰性）的目的進(jìn)行檢査。因 此，被測(cè)物液體中可以含有目標(biāo)物質(zhì)A和B，也可以僅含有目標(biāo)物質(zhì)A或B，還可以不含有目 標(biāo)物質(zhì)A和B中的任一種。
[0068] [樣品墊]
[0069] 樣品墊8a是滴加含有目標(biāo)物質(zhì)的樣品的構(gòu)成部件。對(duì)其材料和尺寸等沒有特別 限定，可以利用應(yīng)用于這種產(chǎn)品的通常的材料。
[0070] [結(jié)合墊]
[0071] 結(jié)合墊8b是滲入有熒光二氧化硅顆粒等熒光標(biāo)記體2和金膠體顆粒等吸光標(biāo)記 體3的構(gòu)成部件。并且，由樣品墊8a通過毛細(xì)現(xiàn)象移動(dòng)來的試樣所含有的目標(biāo)物質(zhì)是由于 抗原抗體反應(yīng)等特異性分子識(shí)別反應(yīng)而被所述熒光二氧化硅顆粒（標(biāo)記體）捕捉、標(biāo)記的 部分。對(duì)結(jié)合墊8b的每單位面積（cm 2)的熒光標(biāo)記體的含量沒有特別限制，優(yōu)選為Iyg? 100 μ g。吸光標(biāo)記體也同樣優(yōu)選為1 μ g?100 μ g。作為滲入方法，可以舉出涂布、滴加標(biāo) 記體的分散液或?qū)?biāo)記體的分散液噴霧后進(jìn)行干燥的方法等。
[0072] [膜]
[0073] 在對(duì)抗體進(jìn)行固定化的膜8c的抗體固定化部設(shè)有用于判斷目標(biāo)物質(zhì)的有無(wú)、即 判斷陽(yáng)性陰性的測(cè)試線（第1測(cè)試區(qū)域n tl和第2測(cè)試區(qū)域nt2)。該測(cè)試線ntl、nt2中，目標(biāo) 物質(zhì)捕捉用抗體（測(cè)試用捕捉性物質(zhì)）4和5分別得到固定化。此外，膜8c中含有用于捕 捉熒光二氧化硅顆粒的抗體（參照用捕捉性物質(zhì)）7得到了固定化的控制線（參照區(qū)域） IV該測(cè)試區(qū)域n tl、nt2中，通過例如上述那樣的組合，進(jìn)行由固定化抗體（測(cè)試用捕捉性物 質(zhì)）_目標(biāo)物質(zhì)-標(biāo)記體構(gòu)成的夾層型免疫復(fù)合物形成反應(yīng)（參照?qǐng)D3)。對(duì)所述膜的判定 部（測(cè)試區(qū)域、參照區(qū)域）的形狀沒有特別限制，只要固定化抗體被局部地固定化即可，可 以舉出線狀、圓狀、帶狀等，優(yōu)選為線狀，更優(yōu)選為寬〇. 5?I. 5mm的線狀。
[0074] 可以通過上述夾層型免疫復(fù)合物形成反應(yīng)，捕捉經(jīng)標(biāo)記的目標(biāo)物質(zhì)，根據(jù)標(biāo)記的 程度來判斷目標(biāo)物質(zhì)的有無(wú)（陽(yáng)性陰性）。此時(shí)，在所述測(cè)試區(qū)域，熒光二氧化硅顆粒等熒 光標(biāo)記體和金膠體顆粒等吸光標(biāo)記體得到濃縮，其附近發(fā)生熒光發(fā)光或吸光著色，可以利 用檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)以及判定。
[0075] 在此，將本發(fā)明的免疫層析法中的目標(biāo)物質(zhì)、捕捉性物質(zhì)、顆粒的種類等的組合代 表例列于表1。本發(fā)明不被限定解釋為這些例子。表中0內(nèi)的編號(hào)與附圖中的符號(hào)對(duì)應(yīng) (特別參照?qǐng)D3)。
[0076]
【權(quán)利要求】
1. 一種免疫層析法，其是多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法，該方法中，在具有巧光顆粒和吸光 顆粒作為標(biāo)記顆粒的測(cè)試片上施加可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和B的被測(cè)物液體，使所述巧光顆 粒和吸光顆粒流動(dòng)，從而利用檢測(cè)裝置一并對(duì)由在所述測(cè)試片的測(cè)試區(qū)域捕捉到的巧光顆 粒和吸光顆粒所發(fā)出的巧光和吸光分別進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定， 其中， 所述檢測(cè)裝置具有檢測(cè)巧光和吸光的檢測(cè)部和對(duì)其進(jìn)行控制的控制部，另一方面， 對(duì)于所述巧光顆粒和吸光顆粒，將該巧光顆粒的巧光的激發(fā)波長(zhǎng)（A1)與吸光顆粒的 吸收波長(zhǎng)（^2)設(shè)為相同的波長(zhǎng)區(qū)域，并且，將所述巧光顆粒捕捉并檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)A與所 述吸光顆粒捕捉并檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)B設(shè)為不同的物質(zhì)， 所述測(cè)試片中，將捕捉所述巧光顆粒捕捉的測(cè)試區(qū)域nti與捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試 區(qū)域叫2設(shè)為不同的位置， 所述檢測(cè)裝置的控制單元由此發(fā)出指令，藉由所述檢測(cè)部對(duì)所述測(cè)試片進(jìn)行掃描時(shí)， 對(duì)所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度、測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、W及測(cè)試區(qū)域n和測(cè)試區(qū) 域ntsW外的非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度一并進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。
2. 如權(quán)利要求1所述的免疫層析法，其中， 所述檢測(cè)裝置具有讀取解析單元，該讀取解析單元根據(jù)捕捉所述巧光顆粒的測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度大于非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、W及捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的 反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來進(jìn)行目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的免疫層析法，其中， 所述巧光顆粒為巧光二氧化娃顆粒，所述吸光顆粒為金膠體顆粒、著色二氧化娃顆粒 或著色乳液顆粒。
4. 如權(quán)利要求1?3的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中， 所述巧光激發(fā)波長(zhǎng)（^1)和吸光吸收波長(zhǎng)（^2)處于波長(zhǎng)為300nm?800nm的范圍。
5. 如權(quán)利要求1?4的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中， 所述測(cè)試區(qū)域n。與所述測(cè)試區(qū)域nt2的間隔為1?10mm的范圍。
6. 如權(quán)利要求1?5的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中， 由屬于所述巧光激發(fā)波長(zhǎng)的峰和/或?qū)儆谖馕詹ㄩL(zhǎng)的峰的面積來對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的 量進(jìn)行定量。
7. 如權(quán)利要求1?6的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中， 通過設(shè)于所述檢測(cè)部的1個(gè)受光器，對(duì)捕捉所述巧光顆粒的測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng) 度、捕捉所述吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、和所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度同時(shí) 進(jìn)行檢測(cè)。
8. 如權(quán)利要求1?7的任一項(xiàng)所述的免疫層析法，其中， 對(duì)于可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和目標(biāo)物質(zhì)B的被測(cè)物，由所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度大 于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì)A的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng) 度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì)B的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nti的反射 光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度為同程度的值來判定兩 者的不存在，由所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、且所述 測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定兩者的存在。
9. 一種檢測(cè)裝置，其是進(jìn)行多項(xiàng)目檢測(cè)用免疫層析法的檢測(cè)裝置，該免疫層析法中，使 用具有巧光顆粒和吸光顆粒作為標(biāo)記顆粒的測(cè)試片，施加可能含有目標(biāo)物質(zhì)A和B的被測(cè) 物液體，使所述巧光顆粒和吸光顆粒流動(dòng)，在所述測(cè)試片中，對(duì)捕捉巧光顆粒的測(cè)試區(qū)域nti 的反射光強(qiáng)度、捕捉吸光顆粒的測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、測(cè)試區(qū)域nU和測(cè)試區(qū)域ntsW 外的非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度一并進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定， 其中， 所述檢測(cè)裝置具有檢測(cè)巧光和吸光的檢測(cè)部和對(duì)其進(jìn)行控制的控制部， 所述檢測(cè)裝置的控制單元由此發(fā)出指令，藉由所述檢測(cè)部對(duì)所述測(cè)試片進(jìn)行掃描時(shí)， 在滿足下述（i)?（iii)的條件下一并對(duì)所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū)域nt2 的反射光強(qiáng)度和所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定： (i) 所述巧光顆粒的巧光的激發(fā)波長(zhǎng)與所述吸光顆粒的吸收波長(zhǎng)為相同的波長(zhǎng)區(qū)域； (ii) 所述目標(biāo)物質(zhì)A與所述目標(biāo)物質(zhì)B不同； (iii) 所述測(cè)試區(qū)域nu與所述測(cè)試區(qū)域nt2處于不同的位置。
10. 如權(quán)利要求9所述的檢測(cè)裝置，其中， 該檢測(cè)裝置還具有讀取解析單元，該讀取解析單元由所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度 大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì)A的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光 強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定目標(biāo)物質(zhì)B的存在，由所述測(cè)試區(qū)域nti的反 射光強(qiáng)度、所述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度、非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度為同程度的值來判定 兩者的不存在，由所述測(cè)試區(qū)域nti的反射光強(qiáng)度大于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度、且所 述測(cè)試區(qū)域nt2的反射光強(qiáng)度小于所述非測(cè)試區(qū)域的反射光強(qiáng)度來判定兩者的存在。
11. 如權(quán)利要求9或10所述的檢測(cè)裝置，其中， 對(duì)于在所述檢測(cè)裝置的檢測(cè)部安裝的受光器的受光靈敏度，在對(duì)所述吸光和巧光進(jìn)行 檢測(cè)的波長(zhǎng)區(qū)域具有受光區(qū)域。
12. -種免疫層析法用試劑，其是用于權(quán)利要求1?8的任一項(xiàng)所述的免疫層析法的試 劑， 其中，該試劑含有巧光顆粒和吸光顆粒，所述巧光顆粒中導(dǎo)入有捕捉目標(biāo)物質(zhì)A的結(jié) 合性物質(zhì)，所述吸光顆粒中導(dǎo)入有捕捉目標(biāo)物質(zhì)B的結(jié)合性物質(zhì)，所述目標(biāo)物質(zhì)與所述目 標(biāo)物質(zhì)A不同。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104471398SQ201380037337
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月28日
【發(fā)明者】會(huì)澤英樹, 大久保典雄, 三好一富 申請(qǐng)人:古河電氣工業(yè)株式會(huì)社