一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法
【專利摘要】一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法，包括以下步驟：(1)配置大腸桿菌顯色培養(yǎng)基，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)；(2)微生物代謝將顯色底物進(jìn)行氧化生成有色物質(zhì)；(3)對(duì)有色物質(zhì)進(jìn)行紫外可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)。本發(fā)明提供的大腸桿菌紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)方法，能夠在一定范圍內(nèi)能夠?qū)Υ竽c桿菌進(jìn)行定量檢測(cè)，適用于快速檢測(cè)，檢測(cè)方法方便、快捷、實(shí)用。
【專利說(shuō)明】一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法。
【背景技術(shù)】
[0003]特定微生物可在特異性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并且微生物在代謝過(guò)程中呼吸鏈中的細(xì)胞色素c在氧化還原過(guò)程中可以將顯色底物氧化生成有色物質(zhì)，此過(guò)程可通過(guò)光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)，并且顯色與否和顯色的程度與特定微生物的有無(wú)及濃度存在定量關(guān)系，此過(guò)程中的顏色變化可通過(guò)分光光度法檢測(cè)。因此可實(shí)現(xiàn)特定微生物的快速定量檢測(cè)。
[0004]其中分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。具體如下:將不同波長(zhǎng)的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí)，便可得到與眾不同波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度。如以波長(zhǎng)(λ )為橫坐標(biāo)，吸收強(qiáng)度(A)為縱坐標(biāo)，就可繪出該物質(zhì)的吸收光譜曲線。利用該曲線進(jìn)行物質(zhì)定性、定量分析。用紫外光源測(cè)定無(wú)色物質(zhì)的方法，稱為紫外分光光度法；用可見(jiàn)光光源測(cè)定有色物質(zhì)的方法，稱為可見(jiàn)光光度法。它們都以Beer-Lambert定律為基礎(chǔ)。當(dāng)一束強(qiáng)度為/o的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后，由于一部分光被體系吸收，因此透射光的強(qiáng)度降至I,則溶液的吸光度A為:
A=abc
式中J為吸光度泌為溶液層厚度(cm)，c為溶液的濃度(g/L)，a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù)與溶液的本性、溫度以及波長(zhǎng)等因素有關(guān)。
[0005]由上式可知，當(dāng)固定溶液層厚度b和吸光系數(shù)a時(shí)，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時(shí)，首先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況(吸收光譜)，從中確定最大吸收波長(zhǎng)，然后以此波長(zhǎng)的光為光源，測(cè)定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A-c工作曲線。在分析未知溶液時(shí)，根據(jù)測(cè)量的吸光度A和預(yù)先測(cè)量得到的工作曲線即可確定出待測(cè)物濃度。
[0006]選擇性培養(yǎng)基可以允許特定微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制其他微生物的生長(zhǎng)。這種選擇性可以通過(guò)幾種方式獲得。例如，某種微生物可以以培養(yǎng)基中所含特定糖類物質(zhì)作為唯一的碳源，從而抑制其他不能利用該特定糖類物質(zhì)做為碳源的微生物的生長(zhǎng)。同樣，某些微生物可以被培養(yǎng)基中所含可影響微生物新陳代謝或酶系統(tǒng)的特定染料，抗生素，鹽類或特殊抑制劑所選擇性抑制。例如，培養(yǎng)基中包含0.1-0.5g/L的亞碲酸鉀，疊氮化鈉或乙酸鉈可以抑制所有革蘭氏陰性細(xì)菌的生長(zhǎng)。而亞碲酸鹽瓊脂可用來(lái)篩選革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，含有抗生素盤尼西林的培養(yǎng)基可用來(lái)篩選革蘭氏陰性細(xì)菌。因而，在檢測(cè)過(guò)程中采用適當(dāng)?shù)倪x擇性培養(yǎng)基可以特異性篩選出待測(cè)微生物并同時(shí)抑制其他微生物的生長(zhǎng)。目前發(fā)展有大腸桿菌/大腸菌群、沙門氏菌、李斯特菌/單核增生李斯特菌、大腸桿菌0157、阪崎腸桿菌等顯色培養(yǎng)基，并且這些培養(yǎng)技術(shù)得到了 ISO、WHO、AOAC、FDA等國(guó)際或官方組織得認(rèn)可和采納。
[0007]大腸桿菌又稱大腸埃希氏菌(E.coli),是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的,在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性，尤其對(duì)嬰兒和幼畜(禽)，常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問(wèn)題。
[0009]本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法，包括以下步驟:
(1)配置大腸桿菌顯色培養(yǎng)基，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)；
(2)微生物代謝將顯色底物進(jìn)行氧化生成有色物質(zhì)；
(3)對(duì)有色物質(zhì)進(jìn)行紫外可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)。
[0010]步驟(I)中，所述大腸桿菌顯色培養(yǎng)液包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和顯色劑，顯色培養(yǎng)液的PH值為 6.8±0.2。
[0011]綜上所述，本發(fā)明有益效果:
本發(fā)明提供的大腸桿菌紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)方法，能夠在一定范圍內(nèi)能夠?qū)Υ竽c桿菌進(jìn)行定量檢測(cè)，適用于快速檢測(cè)，檢測(cè)方法方便、快捷、實(shí)用。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0013]實(shí)施例1
一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法，包括以下步驟:
(I)稱取待檢測(cè)物品40.0g加入IOOOml蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌，煮沸不要超過(guò)I分鐘，分裝三角瓶，121°C高壓滅菌15分鐘，冷卻至45-50°C時(shí)，傾入無(wú)菌培養(yǎng)試管，在37°C的培養(yǎng)箱中放置1-2小時(shí)，以無(wú)菌試管吸取Iml勻液加入大腸桿菌顯色培養(yǎng)液中，在36 ± I °C對(duì)大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)6?12h,
其中待檢測(cè)物品需要進(jìn)行前處理，包括以下步驟:
1)固體和半固體樣品
稱取25g樣品，放入盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min-10000r/min均質(zhì)lmin-2min,或放入盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打lmin-2min,制成1:10的樣品勻液；
2)液體樣品
以無(wú)菌吸管吸取25ml樣品，置盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液；(2)將培養(yǎng)完成后的樣品進(jìn)行離心處理，取上清液待測(cè)；
(3)將標(biāo)樣管從冰箱取出，置于室溫平衡溫度，待溫度達(dá)到室溫(約15min)，打開(kāi)標(biāo)樣瓶，將標(biāo)樣放于100ml無(wú)菌水中，充分混勻待用；按步驟(1)中的操作，分別配置一系列不同濃度的大腸桿菌標(biāo)液，見(jiàn)表1、表2
表1
【權(quán)利要求】
1.一種大腸桿菌的紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)法，其特征是，包括以下步驟:(1)配置大腸桿菌顯色培養(yǎng)基，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)；(2)微生物代謝將顯色底物進(jìn)行氧化生成有色物質(zhì)；(3)對(duì)有色物質(zhì)進(jìn)行紫外可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)。
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK103760122SQ201410002266
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月3日
【發(fā)明者】邱自兵, 王志苗, 岳瑞江, 葉文婷, 成院飛 申請(qǐng)人:深圳市宇馳檢測(cè)技術(shù)有限公司