一種從南極磷蝦中提取雌酮的方法及高效薄層層析掃描檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從南極磷蝦中提取雌酮的方法及高效薄層層析掃描檢測(cè)方法，以南極磷蝦為原料，用甲醇提取，過(guò)濾后再用旋蒸儀蒸干濾液，得到含雌酮的粗提物。南極磷蝦雌酮的檢測(cè)采用高效薄層層析掃描法，展開(kāi)劑為體積比為四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：環(huán)己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：3d：2d的混合液，染色劑為5%氯化鐵水溶液。用CAMAG薄層層析掃描儀-Ⅲ，以600nm吸收波長(zhǎng)掃描檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度計(jì)算得到雌酮的含量，該方法操作簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種從南極磷蝦中提取雌酮的方法及高效薄層層析掃描檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從南極磷蝦中提取雌酮的方法及高效薄層層析掃描檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雌酮[1，3，5 (10)-雌三烯-3-醇-17-酮或3-羥基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-酮]或El是分子量為270.37道爾頓的C18留類(lèi)激素，其分子式為C18H22O2，是雌性激素的一種，其生理作用是雌激素的生理作用。
[0003]南極磷奸(Euphausia superba),是一種生活在南極洲水域的磷奸，以群集方式生活，有時(shí)密度可達(dá)每立方米10000-30000只。它們以微小的浮游植物作為食物，身長(zhǎng)大約6cm，重約2g，最長(zhǎng)壽命可達(dá)6年。它們是南極生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵物種，若以生物質(zhì)能來(lái)說(shuō)，它們可能是地球上最成功的生物物種。因南極磷蝦蘊(yùn)藏量巨大，加上群體的生活容易捕撈，所以吸引很多國(guó)家對(duì)它進(jìn)行開(kāi)發(fā)。目前，南極磷蝦最主要用途是作為魚(yú)飼料。而在挪威、加拿大等國(guó)則把南極磷蝦蝦油提取出來(lái)作為保健品，價(jià)格約2000元/kg。由于南極磷蝦含有大量氟(約2400mg kg—1)，不能直接食用。因而，以南極磷蝦為原料，開(kāi)發(fā)天然藥物，對(duì)其綜合利用，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]雌酮的檢測(cè)多采用氣相色譜技術(shù)、液相色譜技術(shù)、放射免疫檢測(cè)、比色法等方法進(jìn)行，但是這些檢測(cè)方法有著如下的不足之處:檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)用高、可能會(huì)引起環(huán)境污染等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種操作簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、可靠的南極磷蝦雌酮的檢測(cè)方法。
[0006]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種雌酮的高效薄層層析掃描檢測(cè)方法，步驟如下:
[0008](I)取待檢測(cè)的樣品液和1.0mg mL 1的標(biāo)準(zhǔn)液5 μ L點(diǎn)于同一塊GF254高效薄層娃膠板上，以體積比為四氯化碳:乙酸乙酯:丙酮:冰醋酸:甲苯:環(huán)己烷=78-80:9-11:9-11:2-4:3d:2d為展開(kāi)劑,在展開(kāi)缸內(nèi)展開(kāi),展距為9.5cm,展完后晾干展板；
[0009](2)用5%氯化鐵水溶液染色，然后置于103°C _107°C下烘烤8_10分鐘；
[0010](3)用CAMAG薄層掃描儀-1II掃描，掃描波長(zhǎng)600nm，通過(guò)檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度計(jì)算得到雌酮的含量。
[0011]樣品液是通過(guò)將雌酮的粗提物溶于5mL甲醇中制得。
[0012]雌酮的粗提物的提取，步驟如下:
[0013](I)取干的南極磷蝦(W)和甲醇(V)以1:8-11的比例在35°C、350w、40kHz的條件下超聲提取，過(guò)濾提取液；
[0014](2)將上述濾液置于旋蒸儀中蒸干，得到雌酮的粗提物；[0015]在展開(kāi)缸內(nèi)展開(kāi)時(shí)，先將展開(kāi)劑在室溫條件下預(yù)平衡35-45分鐘，再放入高效薄層板，繼續(xù)在室溫條件下展開(kāi)，當(dāng)展距達(dá)到4.5cm時(shí)，取出薄層板，室溫下晾干10分鐘，再將薄層板放入展開(kāi)缸中，展開(kāi)到展距為9.5cm。
[0016]制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:
[0017](I)精密稱(chēng)取1.0OOOmg雌酮標(biāo)準(zhǔn)品(J&K公司)溶于1.0mL甲醇，得濃度為1.0mgmL-1的標(biāo)準(zhǔn)液；
[0018](2)取配置好的雌酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液2 μ L、3 μ L、4 μ L、7 μ L、8 μ L,點(diǎn)樣于同一硅膠板，按雌酮的高效薄層層析掃描檢測(cè)方法條件展開(kāi)，晾干；
[0019](3)用5%氯化鐵水溶液染色后，用CAMAG薄層掃描儀-1II，600nm吸收波長(zhǎng)掃描，經(jīng)薄層掃描儀軟件wincatsl.4.1統(tǒng)計(jì)得到回歸方程Y=_275.7133+742.4928Χ，相關(guān)性系數(shù)r=0.99916, RSD=2.77%。
[0020]本發(fā)明的檢測(cè)雌酮的高效薄層掃描檢測(cè)方法，其精確度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率情況、展開(kāi)劑配方確定如下:
[0021]1.精密度測(cè)定
[0022]精密吸取樣品液，在同一塊高效薄層硅膠板上水平點(diǎn)樣5 μ L，展開(kāi)，晾干，5%氯化鐵水溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以600nm吸收波長(zhǎng)掃描得峰面積分別為1803.8，1651.7，1655.1，1729.3，1775.0, RSD=3.99%。
[0023]2.重復(fù)性測(cè)定
[0024]精密吸取樣品液5 μ L，在五塊高效薄層硅膠板上分別點(diǎn)樣，展開(kāi)，晾干，5%氯化鐵水溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以600nm吸收波長(zhǎng)掃描的峰面積分別為1670.0,1688.2，1663.1，1642.1，1655.1，RSD=L 03%。
[0025]3.穩(wěn)定性測(cè)定
[0026]取5 μ L樣品液于高效薄層板上點(diǎn)樣，展開(kāi)，晾干，5%氯化鐵水溶液染色后用CAMAG薄層掃描儀-1II，以600nm吸收波長(zhǎng)掃描，以后每隔10分鐘掃描一次，記錄每次的峰面積，計(jì)算相應(yīng)RSD值，多次試驗(yàn)證明，染色后40-80分鐘內(nèi)比較穩(wěn)定，平均RSD=L 53%。具體數(shù)據(jù)如表1所示:
[0027]表1
[0028]
【權(quán)利要求】
1.一種雌酮的高效薄層層析掃描檢測(cè)方法，其特征在于，步驟如下: (O取待檢測(cè)的樣品液和1.0mg mL—1的標(biāo)準(zhǔn)液5 μ L點(diǎn)于同一塊GF254高效薄層娃膠板上，以體積比為四氯化碳:乙酸乙酯:丙酮:冰醋酸:甲苯:環(huán)己烷=78-80:9-11:9-11:2~4:3d:2d為展開(kāi)劑，在展開(kāi)缸內(nèi)展開(kāi)，展距為9.5cm,展完后晚干展板； (2)用5%氯化鐵水溶液染色，然后置于103°C_107°C下烘烤8_10分鐘； (3)用CAMAG薄層掃描儀-1II掃描，掃描波長(zhǎng)600nm，通過(guò)檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度計(jì)算得到雌酮的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的雌酮的高效薄層層析掃描檢測(cè)方法，其特征在于，所述樣品液是通過(guò)將雌酮粗提物溶于5mL甲醇中制得。
3.如權(quán)利要求1所述的雌酮的高效薄層層析掃描檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟I)中在展開(kāi)缸內(nèi)展開(kāi)時(shí)，先將展開(kāi)劑在室溫條件下預(yù)平衡35-45分鐘，再放入高效薄層板，繼續(xù)在室溫條件下展開(kāi)，當(dāng)展距達(dá)到4.5cm時(shí)，取出薄層板，室溫下晾干10分鐘，再將薄層板放入展開(kāi)缸中，展開(kāi)到展距為9.5cm。
4.一種從南極磷蝦中提取雌酮的方法，其特征在于，步驟如下: (1)取干的南極磷奸(w)和甲醇(V)以I:8-11的比例在35°C、350w、40kHz的條件下超聲提取后過(guò)濾提取液； (2)將上述濾液置于旋蒸儀中蒸干，得到雌酮的粗提物。
【文檔編號(hào)】G01N30/90GK103808855SQ201410034815
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】馬善利, 劉代成 申請(qǐng)人:山東師范大學(xué)