清涼油含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了清涼油含量測定方法，包括薄荷腦、樟腦、桉油精、丁香酚中的一種或多種成分的定性定量分析。具體包括：（1）采用薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚為對照品；（2）清涼油樣品試劑處理后用GC法進(jìn)行檢測；（3）GC測定方法：色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管柱，檢測器：氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250-300℃，進(jìn)樣口溫度：220-270℃，柱溫：程序升溫，初始溫度60-110℃，升至220-280℃，每分鐘5-15℃，保持8-20min，進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比20:1；該法科學(xué)合理，簡便易行，適用于清涼油中的薄荷腦、樟腦等揮發(fā)性成分及其相關(guān)提取物的質(zhì)量控制。
【專利說明】清涼油含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及清涼油的含量測定方法，具體涉及一種清涼油中薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚的含量測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]清涼油是由薄荷腦、樟腦、桉油、丁香油等原料組成的非處方藥，具有清涼散熱，醒腦提神，止癢止痛之功，主要用于感冒頭痛，中暑，暈車，蚊蟲蜇咬等。由于藥效顯著，且藥用范圍廣泛而沿用至今，為廣大消費(fèi)者所青睞。
[0003]目前，清涼油國內(nèi)有38家醫(yī)藥企業(yè)生產(chǎn)該產(chǎn)品，批準(zhǔn)文號有41個(gè)，另外市場中還有妝字號清涼類產(chǎn)品，規(guī)格品牌均較多。作為國藥準(zhǔn)字號，清涼油的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是衛(wèi)生部頒中藥標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-0144-89)，其中主要檢測指標(biāo)有鑒別、熔點(diǎn)、含量測定、裝量差異，其中含量測定指檢測其中總揮發(fā)油量。到目前為止，未見有關(guān)清涼油中相關(guān)成分的研究報(bào)道，無該復(fù)方中薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚的測定方法。
[0004]按照中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則(2010年中國藥典一部)等相關(guān)要求，建立清涼油中薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚的含量測定方法(氣相色譜法)，分別進(jìn)行了方法學(xué)考察，具體包括專屬性試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、檢測限、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)。確定的色譜條件為:色譜柱:HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱(60mX 0.25mm, 0.25 μ m)，檢測器:氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度:250-30(TC，進(jìn)樣口溫度:220-270°C，柱溫:程序升溫，初始溫度60-110°C，升至220_28(TC，每分鐘5_15°C，保持8-20min，進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣，分流比20:1。該方法科學(xué)合理，簡便易行，適用于清涼油中的薄荷腦、樟腦等揮發(fā)性成分及其相關(guān)提取物的質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于，提供一種清涼油中揮發(fā)性類成分的含量測定方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述缺點(diǎn)和不足。
[0006]本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題，可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0007]清涼油含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0008]( I)設(shè)備和材料的準(zhǔn)備
[0009]①色譜條件
[0010]色譜柱:HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱，其規(guī)格為60mX0.25mm, 0.25 μ m，檢測器:氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度:250-30(TC，進(jìn)樣口溫度:220-27(TC，柱溫:程序升溫，初始溫度60-110°C，升至220-280°C，每分鐘5_15°C，保持8_20min，進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣，分流比20:1。
[0011 ] ②對照品溶液的制備
[0012]精密稱取薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品適量，精密稱定，加試劑分別制成每Iml含薄荷腦1.0-1.6mg、樟腦1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合對照品溶液。
[0013]③供試品溶液的制備
[0014]取清涼油適量，混勻，取0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入試劑10ml，在50°C水浴上加熱數(shù)分鐘使融化，放冷，定容，搖勻，離心，取上清液，即得。
[0015](2)樣品含量測定
[0016]分別取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法分別計(jì)算清涼油中桉油精、樟腦、薄荷腦和丁香酚含量。
[0017](3)方法學(xué)考察項(xiàng)目包括:專屬性試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、檢測限、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)。
[0018]①專屬性試驗(yàn)
[0019]按照上述色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，分別注入氣相色譜儀，理論板數(shù)按樟腦計(jì)算大于300000，分離度均大于2 ;表明陰性對照溶液中的組分不干擾相應(yīng)對照品的測定。
[0020]②耐用性試驗(yàn)
[0021]本發(fā)明考察了不同色譜柱即HP-5MS毛細(xì)管柱，固定相是(5%-苯基)_甲基聚硅氧烷，0.25mm和0.32mm, 0.25 μ m, 30m,和HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱，固定相是聚乙二醇(PEG)，60mX0.25mm, 0.25 μ m,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱比較適合此4種成分的分析檢測；
[0022]另外，對參數(shù)進(jìn)樣口溫度、檢測器溫度、程序升溫速度、流速進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)微調(diào)條件，4種成分的色譜峰理論塔板數(shù)、`分離度、拖尾因子均較好。
[0023]③線性關(guān)系
[0024]分別將低濃度對照品溶液I μ 1，中濃度對照品溶液1、2 μ 1，高濃度對照品溶液注入氣相色譜儀。
[0025]按上述色譜條件測定，以對照品峰面積的積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量C(Ug)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為:薄荷腦A=690.09C+4.9889，r=0.9999(n=6)，線性范圍為 0.0286-2.86 μ g ;樟腦 A=673.90C+5.5854，r=0.9999 (n=6),線性范圍為 0.02852-2.852 μ g ;桉油精 Α=623.98C+3.6800，r=0.9999 (n=6)，線性范圍為 0.0157842-1.57842 μ g ; 丁香酚 A=624.76C+0.5610，r=0.9999 (n=6)，線性范圍為
0.0043868-0.43868 μ g ;薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚在相應(yīng)范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系O
[0026]④精密度試驗(yàn)
[0027]精密取混合對照品溶液I μ 1，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD，％)，RSD均小于0.9%，表明4種成分的精密度均良好；
[0028]⑤穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0029]4種對照品溶液在24h內(nèi)RSD均小于2%，穩(wěn)定性較好。
[0030]⑥檢測限
[0031]采用信噪比法，分別取適量薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品，精密稱定，用試劑溶解制成高濃度溶液，濃度分別為0.3320mg/ml、0.11682mg/ml、0.52947mg/ml、
0.370884mg/ml ;得到薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品的最低檢測限濃度分別為
0.0006308mg/ml、0.0005841mg/ml、0.0052947mg/ml 和 0.002967lmg/ml?[0032]⑦重復(fù)性試驗(yàn)
[0033]取清涼油樣品6份，按供試品溶液制備方法分別制備，按樣品測定法測定，4種成分的平均含量RSD均〈1%，重復(fù)性較好。
[0034]⑧加樣回收率試驗(yàn)
[0035]取已知含量的清涼油樣品適量，混勻，取約0.lg，6份，精密稱定，分別精密加入同量的桉油精、樟腦、薄荷腦和丁香酚對照品，按供試品溶液制備方法制備樣品，計(jì)算回收率，薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚的平均加樣回收率均符合要求，RSD均〈2%。
[0036]進(jìn)一步，所述的對照品溶液和供試品溶液制備采用的試劑是指30_60°C石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和環(huán)己烷中的一種。
[0037]進(jìn)一步，還包括步驟(2)測試方法的方法學(xué)考察項(xiàng)目，包括:專屬性試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、檢測限、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)。
[0038]進(jìn)一步，所述專屬性試驗(yàn):按照上述色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，分別注入氣相色譜儀，理論板數(shù)按樟腦計(jì)算大于300000，分離度均大于2 ;表明陰性對照溶液中的組分不干擾相應(yīng)對照品的測定。
[0039]進(jìn)一步，所述耐用性試驗(yàn):試驗(yàn)考察了不同色譜柱即HP-5MS毛細(xì)管柱，固定相是(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷，0.25mm和0.32mm, 0.25 μ m, 30m,和HP-1NNOffAX毛細(xì)管柱，固定相是聚乙二醇(PEG)，60mX0.25mm, 0.25 μ m,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HP-1NNOWAX毛細(xì)管柱比較適合此4種成分的分析檢測；另外，對參數(shù)進(jìn)樣口溫度、檢測器溫度、程序升溫速度、流速進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)微調(diào)條件，4種成分的色譜峰理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子均較好。
[0040]進(jìn)一步，所述線性關(guān)系:按上述色譜條件測定，以對照品峰面積的積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量C ( μ g)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸，薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚在相應(yīng)范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。
[0041]進(jìn)一步，所述精密度試驗(yàn)均良好。
[0042]進(jìn)一步，所述穩(wěn)定性試驗(yàn):4種對照品溶液在24h內(nèi)RSD均小于2%，穩(wěn)定性較好。
[0043]進(jìn)一步，所述檢測限:采用信噪比法，得到薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品的最低檢測限濃度。
[0044]進(jìn)一步，所述重復(fù)性試驗(yàn):4種成分的平均含量RSD均〈1%，重復(fù)性較好。
[0045]進(jìn)一步，所述加樣回收率試驗(yàn):4種成分的平均加樣回收率均符合要求，RSD均
〈2%。
[0046]本發(fā)明的有益效果:
[0047]清涼油含量測定方法，具有良好的準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、線性范圍、耐用性和穩(wěn)定性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0048]圖1混合對照品圖譜。
[0049]圖2陰性對照溶液缺薄荷腦的圖譜。
[0050]圖3陰性對照溶液缺樟腦的圖譜。
[0051 ] 圖4陰性對照溶液缺桉油精的圖譜。
[0052]圖5陰性對照溶液缺丁香酚的圖譜。[0053]圖6供試品溶液圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0054]以下結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0055]實(shí)施例1
[0056]具體如下所示:
[0057]I儀器材料
[0058]7890A 氣相色譜儀(Agilent)、900B 離心機(jī)(T0M0S)、AB104-S 分析天平(METTLERTOLEDO)
[0059]薄荷腦對照品(110728-200506，含量測定用，中國食品藥品檢定研究院)、樟腦對照品(110747-201008，含量測定用，含量以99.0%計(jì)，中國食品藥品檢定研究院)、桉油精對照品(110788-201105，含量測定用，含量以99.9%計(jì)，中國食品藥品檢定研究院)、丁香酚對照品(110725-201213，含量測定用，含量以99.7%計(jì)，中國食品藥品檢定研究院)、30-60 V石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和環(huán)己烷(均為分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)
[0060]2試驗(yàn)內(nèi)容
[0061]2.1色譜條件
[0062]色譜柱:即-1剛0歡乂毛細(xì)管柱(6011^0.25mm, 0.25 μ m)，檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)，檢測器溫度:250-30(TC，進(jìn)樣口溫度:220_27(TC，柱溫:程序升溫，初始溫度60-110°C，升至220-280°C，每分鐘5_`15°C，保持8_20min，進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣，分流比20:1。
[0063]2.2對照品溶液的制備
[0064]精密稱取薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品適量，精密稱定，加試劑分別制成每Iml含薄荷腦1.0-1.6mg、樟腦1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合對照品溶液。
[0065]2.3供試品溶液的制備
[0066]取清涼油適量，混勻，取0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入試劑10ml，在50°C水浴上加熱數(shù)分鐘使融化，放冷，定容，搖勻，離心，取上清液，即得。
[0067]2.4樣品含量測定
[0068]分別精密吸取對照品溶液I μ 1、供試品溶液I μ 1，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法分別計(jì)算桉油精、樟腦、薄荷腦和丁香酚含量，分別對清涼油產(chǎn)品進(jìn)行了測定，具體含量結(jié)果見下表1所示。
[0069]圖1混合對照品圖譜。圖2陰性對照溶液缺薄荷腦的圖譜。圖3陰性對照溶液缺樟腦的圖譜。圖4陰性對照溶液缺桉油精的圖譜。圖5陰性對照溶液缺丁香酚的圖譜。圖6供試品溶液圖譜。具體圖譜如圖1-6所示。
[0070]表1清涼油成品的含量測定數(shù)據(jù)
[0071]
【權(quán)利要求】
1.一種清涼油含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)設(shè)備和材料的準(zhǔn)備 ①色譜條件 色譜柱:HP-1NNOWAX毛細(xì)管柱，其規(guī)格為60mX0.25mm, 0.25 μ m，檢測器:氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度:250-30(TC、進(jìn)樣口溫度:220-27(TC，柱溫:程序升溫，初始溫度60-110°C，升至220-280°C，每分鐘5_15°C，保持8_20min，進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣，分流比20:1 ； ②對照品溶液的制備 精密稱取薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品適量，精密稱定，加試劑分別制成每Iml含薄荷腦1.0-1.6mg、樟腦1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合對照品溶液； ③供試品溶液的制備 取清涼油適量，混勻，取0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入試劑10ml，在50°C水浴上加熱數(shù)分鐘使融化，放冷，定容，搖勻，離心，取上清液，即得； (2)樣品含量測定 分別取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法分別計(jì)算清涼油中桉油精、樟腦、薄荷腦和丁香酚含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述的對照品溶液和供試品溶液制備采用的試劑是指30-60°C石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和環(huán)己烷中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:還包括步驟(2)測試方法的方法學(xué)考察項(xiàng)目，包括:專屬性試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、檢測限、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述專屬性試驗(yàn):按照上述色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，分別注入氣相色譜儀，理論板數(shù)按樟腦計(jì)算大于300000，分離度均大于2 ;表明陰性對照溶液中的組分不干擾相應(yīng)對照品的測定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述耐用性試驗(yàn):試驗(yàn)考察了不同色譜柱即HP-5MS毛細(xì)管柱，固定相是(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷，0.25mm和 0.32mm，0.25 μ m，30m，和 HP-1NNOWAX 毛細(xì)管柱，固定相是聚乙二醇 PEG，60mX 0.25mm，0.25 μ m,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HP-1NNOWAX毛細(xì)管柱比較適合此4種成分的分析檢測；另外，對參數(shù)進(jìn)樣口溫度、檢測器溫度、程序升溫速度、流速進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)微調(diào)條件，4種成分的色譜峰理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子均較好。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述線性關(guān)系:按上述色譜條件測定，以對照品峰面積的積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量C ( μ g)為橫坐標(biāo)X，進(jìn)行線性回歸，薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚在相應(yīng)范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述穩(wěn)定性試驗(yàn):4種對照品溶液在24h內(nèi)RSD均小于2%，穩(wěn)定性較好。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述檢測限:采用信噪比法，得到薄荷腦、樟腦、桉油精和丁香酚對照品的最低檢測限濃度。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法，其特征在于:所述重復(fù)性試驗(yàn):4種成分的平均含量RSD均〈1%，重復(fù)性較好。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清涼油含量測定方法,其特征在于:所述加樣回收率試驗(yàn):4種成分的平均加樣回收率均符`合要求，RSD均〈2%。
【文檔編號】G01N30/02GK103776930SQ201410035390
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】丁禮琴, 金家驊, 杜子榮, 鞠家星, 卞寶軍 申請人:上海中華藥業(yè)有限公司