一種宮頸細(xì)胞保存液及宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制片方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種宮頸細(xì)胞保存液及宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制片方法，宮頸細(xì)胞保存液包括下列組分：N-乙酰-3-巰基丙氨酸、無水酒精、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、冰醋酸、濃鹽酸和蒸餾水；制作宮頸細(xì)胞標(biāo)本的方法，包括將取出的宮頸細(xì)胞浸泡于如上所述的宮頸細(xì)胞保存液的收集管中，振蕩均勻后加入涂片裝置中，將涂片裝置置于離心機(jī)中離心，取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片；將得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定、染色、脫水和透明，最后封片得到用于診斷的標(biāo)本涂片。本發(fā)明的宮頸細(xì)胞保存液和宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法可靠實(shí)用、成本低效果好，適宜大規(guī)模推廣。
【專利說明】一種宮頸細(xì)胞保存液及宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制片方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種宮頸細(xì)胞保存液及宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制片方法。
【背景技術(shù)】
[0002]宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，因此對宮頸癌的篩查一直受到人們的普遍關(guān)注。傳統(tǒng)的巴氏直接涂片法為早期篩查宮頸癌的主要方法，已應(yīng)用50余年，然而，傳統(tǒng)的巴氏直接涂片法存在以下缺點(diǎn):樣本采集采用棉簽或軟木片，易污染運(yùn)送人員和工具；采用直接涂片所收集的細(xì)胞只有20%涂在了玻片上，細(xì)胞診斷性成份過少；制片質(zhì)量差，涂片厚薄不均，細(xì)胞重疊嚴(yán)重，檢查者閱片時(shí)易于疲勞；涂片時(shí)用力過猛使細(xì)胞變形；容易干片，造成細(xì)胞破裂，難以診斷；丟棄采樣器，約有80%的細(xì)胞樣本被留在取樣器上被丟掉，可能被發(fā)現(xiàn)的異常細(xì)胞也被丟掉；細(xì)胞標(biāo)本無法保存，不能再制片；有大量的粘液、紅細(xì)胞和白細(xì)胞覆蓋在涂片上，導(dǎo)致涂片背景不清晰和染色不佳，不利于診斷，使檢出率受到一定影響。針對傳統(tǒng)巴氏直接涂片法存在的問題，細(xì)胞學(xué)專家近年來又推出了一種新的細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)，即液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)。它是一種嶄新的宮頸癌檢查技術(shù)，該技術(shù)有別于傳統(tǒng)巴氏直接涂片法，在制片之前需要將宮頸細(xì)胞樣本放在“宮頸細(xì)胞保存液”中，以防細(xì)胞變性并對樣本進(jìn)行前期處理，然后，采用先進(jìn)的液基薄層細(xì)胞制片系統(tǒng)(如:細(xì)胞離心涂片機(jī)或膜式超薄細(xì)胞制片機(jī))進(jìn)行制片，它使制片質(zhì)量和診斷檢出率顯著提高。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)目前已逐步取代傳統(tǒng)巴氏直接涂片法。但該技術(shù)所用的“宮頸細(xì)胞保存液”現(xiàn)多從國外引進(jìn)，價(jià)格非常昂貴，來源不便，無法普及，不能作為廣泛宮頸癌篩查用。該技術(shù)中的細(xì)胞離心涂片機(jī)或膜式超薄細(xì)胞制片機(jī)也是價(jià)格非常昂貴，一些中小型醫(yī)院負(fù)擔(dān)不起。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的研究人員根據(jù)宮頸組織的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)，研制出了一種新型的國產(chǎn)宮頸細(xì)胞保存液，新型國產(chǎn)宮頸細(xì)胞保存液使用常見藥物組分，成本低且效果良好，同時(shí)，本發(fā)明也提供一種使用該宮頸細(xì)胞保存液制作標(biāo)本的方法，方法中提供一種涂片裝置，使用所述涂片裝置可以使用普通離心機(jī)完成制片。
[0004]本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:
[0005]一種宮頸細(xì)胞保存液，所述宮頸細(xì)胞保存液包括下列組分:
[0006]N-乙酰-3-巰基丙氨酸，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.05%~0.15% ；
[0007]無水酒精，其含量按體積百分比計(jì)為45%~55% ;
[0008]氯化鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.3%~0.5% ；
[0009]磷酸氫二鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.1%~0.2% ;
[0010]磷酸二氫鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.007%~0.014% ;
[0011]冰醋酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.4%~0.8% ； [0012]濃鹽酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.04%~0.08% ;
[0013]蒸餾水，其含量為按體積百分比補(bǔ)足100%。[0014]優(yōu)選的是，所述宮頸細(xì)胞保存液包括下列組分:
[0015]N-乙酰-3-巰基丙氨酸,其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.11% ；
[0016]無水酒精，其含量按體積百分比計(jì)為49.38% ；
[0017]氯化鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.420% ；
[0018]磷酸氫二鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.173% ；
[0019]磷酸二氫鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.012% ；
[0020]冰醋酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.59% ;
[0021]濃鹽酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.062% ；
[0022]蒸餾水，其含量為按體積百分比補(bǔ)足100%。
[0023]一種宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，包括如下步驟:
[0024]步驟一，將取出的宮頸細(xì)胞浸泡于盛有權(quán)利要求1或2所述的宮頸細(xì)胞保存液的收集管中；
[0025]步驟二，將步驟一中裝有宮頸細(xì)胞的收集管振蕩10~20min，取出5~IOmL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液加入涂片裝置中；
[0026]步驟三，將步驟二中的所述涂片裝置置于離心機(jī)中，2500~3000rpm離心3~5min,取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片；
[0027]步驟四，將步驟三得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定后，行蘇木素-伊紅或巴氏染色，然后用無水酒精脫水，再使用二甲苯透明，最后用中性樹膠封片得到所需要的用于診斷的標(biāo)本涂片。
[0028]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述涂片裝置包括第一殼體和位于所述第一殼體內(nèi)的第二殼體，所述第二殼體的內(nèi)側(cè)壁上設(shè)置有第一對彈性部件和第二對彈性部件，所述第一對彈性部件和所述第二對彈性部件與所述第二殼體的內(nèi)側(cè)壁限定出一凹槽，所述凹槽將所述第二殼體的內(nèi)部空間分隔為第一腔室和第二腔室，所述第二對彈性部件的前端和后端均設(shè)置有吸水墊，所述第一殼體和所述第二殼體上開設(shè)有相對應(yīng)的第一插口和加樣孔，
[0029]先將載玻片從所述第一插口處插入并限制在所述凹槽中，再從所述加樣孔加入所述步驟一中的所述5~IOmL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液通入所述第二腔室中，
[0030]并且，所述第一殼體的內(nèi)部頂端還設(shè)置有依次連接的微控制器、微型驅(qū)動機(jī)構(gòu)和微型氣缸，所述微型氣缸的活塞端與一推片支撐板的一端樞接，所述推片支撐板通過開設(shè)在所述第二殼體上的第二插口沿所述第二殼體的縱向伸縮；
[0031]所述步驟三離心過程中，所述載玻片在離心力的作用下離開所述凹槽進(jìn)入所述第一腔室中，所述推片支撐板延伸進(jìn)所述第一腔室并作用于所述載玻片上。
[0032]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，將取出的宮頸細(xì)胞浸泡于盛有權(quán)利要求2所述的宮頸細(xì)胞保存液的收集管中。
[0033]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，將步驟一中裝有宮頸細(xì)胞的收集管振蕩15min，取出6mL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液置于所述涂片裝置中。
[0034]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述步驟四中使用的所述固定液由冰醋酸和質(zhì)量體積濃度95%的酒精組成，所述冰醋酸與所述95%酒精的體積比為1:100。[0035]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述微控制器的開關(guān)設(shè)置在所述第一殼體的外部，所述微控制器的開關(guān)還設(shè)置有延時(shí)裝置，所述延時(shí)裝置用于所述開關(guān)打開后，延遲3~5min再啟動所述微型氣缸。
[0036]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述第一殼體的內(nèi)壁上設(shè)置有至少一道滑槽，所述第二殼體的外壁設(shè)置有至少一道突起，所述突起位于所述滑槽內(nèi)。
[0037]優(yōu)選的是，所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述第二插口的縱向中心線與所述第一插口的縱向中心線有一夾角a，30° ^ a ^ 45°。
[0038]本發(fā)明的有益效果為:
[0039]本發(fā)明宮頸細(xì)胞保存液中的N-乙酰-3-巰基丙氨酸能有效地分解粘液，N-乙酰-3-巰基丙氨酸分解粘液的效率能達(dá)到90%以上，使制片時(shí)背景清晰透亮；冰醋酸和濃鹽酸主要用于去除紅細(xì)胞、同時(shí)也和無水酒精一起減少了炎癥細(xì)胞的影響，無水酒精主要作為固定劑，另加入緩沖劑磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉作為緩沖劑，氯化鈉調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度，經(jīng)本發(fā)明宮頸細(xì)胞保存液處理的標(biāo)本，幾乎100%保存了細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)量，常溫下可保存3周，可重復(fù)制片且制片效果好；細(xì)胞形態(tài)完整、結(jié)構(gòu)清晰、集中均勻分布，染色鮮艷，細(xì)胞不易重疊，觀察省時(shí)省力，不易漏診；并且涂片背景清晰干凈，為宮頸細(xì)胞普查提供了高質(zhì)量的細(xì)胞涂片，從而大大提聞了宮頸癌的診斷，可提聞宮頸癌10%的檢出率；
[0040]本發(fā)明的宮頸細(xì)胞保存液在室溫下5分鐘內(nèi)徹底殺滅所有病菌及微生物的活性，確保了操作人員的健康；
[0041]本發(fā)明的宮頸細(xì)胞保存液中原料組分價(jià)格非常便宜，所用試劑易于購買，制片快捷方便，易于普及推廣；
[0042]本發(fā)明中的涂片裝置的第一殼體和第二殼體可拆卸，可將第二殼體拆卸清洗滅菌，重復(fù)使用；
[0043]本發(fā)明中將載玻片限制在彈性部件組成的凹槽中，在不離心的狀態(tài)下，載玻片處在所述凹槽中，當(dāng)離心時(shí)，由于離心力的作用，彈性部件發(fā)生形變載玻片也受到離心力而滑入第二腔室內(nèi)并貼在第二殼體的內(nèi)壁上，這樣吸水墊露出將帶有細(xì)胞的宮頸細(xì)胞保存液的水分和雜質(zhì)吸走，而細(xì)胞留在載玻片上完成制片，涂片裝置設(shè)計(jì)新穎實(shí)用，且本涂片裝置可在醫(yī)院沒有液基薄層細(xì)胞制片系統(tǒng)的裝置下(如:細(xì)胞離心涂片機(jī)或膜式超薄細(xì)胞制片機(jī))完成制片，提供醫(yī)護(hù)人員的工作效率；
[0044]本發(fā)明提供的宮頸細(xì)胞保存液和宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法可靠實(shí)用、成本低效果好，適用于大規(guī)模推廣。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0045]圖1為本發(fā)明所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法的流程圖；
[0046]圖2為本發(fā)明所述的傳統(tǒng)巴氏直接涂片法制作的宮頸細(xì)胞涂片的顯微照片之一；
[0047]圖3為本發(fā)明所述的傳統(tǒng)巴氏直接涂片法制作的宮頸細(xì)胞涂片的顯微照片之二 ；
[0048]圖4為采用本發(fā)明所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法制作的宮頸細(xì)胞涂片的顯微照片之一；
[0049]圖5為采用本發(fā)明所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法制作的宮頸細(xì)胞涂片的顯微照片之二 ；[0050]圖6為本發(fā)明所述的涂片裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0051]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0052]實(shí)施例一:
[0053]1材料與方法
[0054]1.1樣本來源:選取2012年I月~2013年1月北京軍區(qū)總醫(yī)院門診就診行宮頸癌篩查的婦科標(biāo)本共1450例，分別進(jìn)行傳統(tǒng)巴氏直接涂片和液基細(xì)胞學(xué)制片，比較二種制片方法的陽性病變檢出率及制片質(zhì)量。
[0055]1.2宮頸細(xì)胞保存液的配制
[0056]分別稱取N-乙酰-3-巰基丙氨酸9g，氯化鈉34g，磷酸氫二鈉14g，磷酸二氫鈉lg，量取無水酒精4000mL，冰醋酸48mL，濃鹽酸5mL，蒸餾水4000M1，溶解后使用。
[0057]1.3儀器震蕩儀、離心機(jī)和涂片裝置。
[0058]1.4樣本采集與制片方法
[0059]1.41傳統(tǒng)巴氏直接涂片方法:暴露宮頸，將宮頸刮板插入子宮頸管內(nèi)，用刮板輕刮，取出后均勻的涂于載玻片上，95%酒精固定0.5h，行巴氏染色，使用酒精脫水，然后用二甲苯透明，最后用樹膠封片后鏡下閱片。
[0060]1.4.2宮頸細(xì)胞保存液的液基細(xì)胞學(xué)制片方法
[0061]如圖1所示，依照如下步驟制作標(biāo)本:
[0062]步驟一，婦科醫(yī)生在陰道擴(kuò)張器直視下，用棉簽拭去宮頸和陰道表面的分泌物，然后用宮頸刷沿子宮頸外口插入子宮頸管內(nèi)，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3圈，取出宮頸刷后，將刷頭浸泡于盛有宮頸細(xì)胞保存液的收集管中，旋緊管蓋后貼上標(biāo)簽，和對應(yīng)的申請單一起送往病理科檢查；
[0063]步驟二，病理科將裝有所述收集管在振蕩器上充分振蕩15min，對宮頸細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行固定及消化等處理，取出6mL溶解好的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液從涂片裝置的加樣孔8加入第二腔室6內(nèi)，
[0064]如圖6所不,所述涂片裝置包括第一殼體I和位于所述第一殼體I內(nèi)的第二殼體2，所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁上設(shè)置有第一對彈性部件3和第二對彈性部件4，所述第一對彈性部件3和所述第二對彈性部件4與所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁限定出一凹槽，所述凹槽將所述第二殼體的內(nèi)部空間分隔為第一腔室5和第二腔室6，所述第二對彈性部件4的前端和后端均設(shè)置有吸水墊7，所述第一殼體I和所述第二殼體2上開設(shè)有相對應(yīng)的第一插口 9和所述加樣孔8，
[0065]先將載玻片從所述第一插口 9處插入并限制在所述凹槽中，再從所述加樣孔8加入所述6mL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液通入所述第二腔室6中，
[0066]并且，所述第一殼體I的內(nèi)部還設(shè)置有依次連接的微控制器、微型驅(qū)動機(jī)構(gòu)和微型氣缸，所述微型氣缸 的活塞端與一推片支撐板的一端樞接，所述推片支撐板通過開設(shè)在所述第二殼體2上的第二插口 10沿所述第二殼體2的縱向伸縮；所述第二插口的縱向中心線與所述第一插口的縱向中心線有一 30°的夾角α[0067]步驟三，將步驟二中的所述涂片裝置置于離心機(jī)中并打開所述開關(guān)，2800rpm離心4min，取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片；離心過程中，彈性部件發(fā)生形變，所述載玻片在離心力的作用下離開所述凹槽進(jìn)入所述第一腔室5中，所述推片支撐板延伸進(jìn)所述第一腔室5并將推片放出作用于所述載玻片上；所述微控制器的開關(guān)設(shè)置在所述第一殼體I的外部，所述微控制器的開關(guān)還設(shè)置有延時(shí)裝置，所述延時(shí)裝置用于所述開關(guān)打開后，延遲4min再啟動所述推片支撐板，延遲的時(shí)間為等待載玻片進(jìn)入到所述第一腔室5內(nèi)的時(shí)間。
[0068]步驟四，將步驟三得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定后，行蘇木素-伊紅或巴氏染色，然后用無水酒精脫水，再使用二甲苯透明，最后用中性樹膠封片得到所需要的用于診斷的標(biāo)本涂片。
[0069]所述步驟四中使用的所述固定液由冰醋酸和質(zhì)量體積濃度95%的酒精組成，所述冰醋酸與所述95%酒精的體積比為1:100。
[0070]所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法中，所述第一殼體I的內(nèi)壁上設(shè)置有至少一道滑槽，所述第二殼體2的外壁設(shè)置有至少一道凸起，所述凸起位于所述滑槽內(nèi)。
[0071]1.5細(xì)胞學(xué)診斷:采用TBS (the bethesda system)分級系統(tǒng)。即正常范圍(WNL)、意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞(ASCUS)、鱗狀上皮內(nèi)病變(SIL)和鱗狀細(xì)胞癌(SCC)。SIL包括鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)和鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)。腺上皮不正常為意義不明的不典型腺細(xì)胞(AGUS)和腺癌。
[0072]2 結(jié)果
[0073]2.1宮頸細(xì)胞保存 液的制片方法與傳統(tǒng)巴氏直接涂片方法的陽性檢出率結(jié)果比較
[0074]1450例婦科細(xì)胞學(xué)標(biāo)本經(jīng)宮頸細(xì)胞保存液處理后，制作的液基薄層涂片共檢出異常者 585 例(包括 HSIL121 例，LSIL109 例，ASCUS171 例，AGUS118 例，SCC66 例)，檢出率為40.3% (585 / 1450)。而傳統(tǒng)巴氏直接涂片法在1450例婦科標(biāo)本中共檢出異常者451例(包括 HSIL99 例，LSIL97 例，ASCUS150 例，AGUS80 例，SCC25 例)，檢出率為 31.1% (451 /1450)。宮頸細(xì)胞保存液的液基細(xì)胞學(xué)制片法的檢出率高于巴氏直接涂片法。
[0075]2.2宮頸細(xì)胞保存液的制片方法與傳統(tǒng)巴氏直接涂片方法的制片質(zhì)量比較
[0076]如圖2和圖3所示，傳統(tǒng)巴氏直接涂片中粘液絲較多，背景污穢，細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示不清晰，涂片厚薄不均，細(xì)胞易重疊，細(xì)胞需仔細(xì)尋找辨認(rèn)，而如圖4和圖5所示,經(jīng)宮頸細(xì)胞保存液處理后制作的液基細(xì)胞學(xué)涂片，鏡下粘液絲溶解，背景較干凈，細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示清晰，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞分布薄層均勻分布，無重疊，容易辨認(rèn)，陽性細(xì)胞不易漏診
[0077]實(shí)施例二:
[0078]本實(shí)施例二中宮頸細(xì)胞保存液的配制:
[0079]分別稱取N-乙酰-3-巰基丙氨酸5g，氯化鈉30g，磷酸氫二鈉IOg和磷酸二氫鈉0.7g溶于少量水中，再量取無水酒精4500mL，冰醋酸40mL和濃鹽酸4mL，最后定容至1000OmL 備用。
[0080]使用上述配方的宮頸細(xì)胞保存液依照如下的方法制作宮頸細(xì)胞標(biāo)本:
[0081]步驟一，婦科醫(yī)生在陰道擴(kuò)張器直視下，用棉簽拭去宮頸和陰道表面的分泌物，然后用宮頸刷沿子宮頸外口插入子宮頸管內(nèi)，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3圈，取出宮頸刷后，將刷頭浸泡于盛有宮頸細(xì)胞保存液的收集管中，旋緊管蓋后貼上標(biāo)簽，和對應(yīng)的申請單一起送往病理科檢查；[0082]步驟二，病理科將裝有所述收集管在振蕩器上充分振蕩lOmin，對宮頸細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行固定及消化等處理，取出5mL溶解好的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液從涂片裝置的加樣孔8加入第二腔室6內(nèi)，
[0083]如圖6所不,所述涂片裝置包括第一殼體I和位于所述第一殼體I內(nèi)的第二殼體2，所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁上設(shè)置有第一對彈性部件3和第二對彈性部件4，所述第一對彈性部件3和所述第二對彈性部件4與所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁限定出一凹槽，所述凹槽將所述第二殼體的內(nèi)部空間分隔為第一腔室5和第二腔室6，所述第二對彈性部件4的前端和后端均設(shè)置有吸水墊7，所述第一殼體I和所述第二殼體2上開設(shè)有相對應(yīng)的第一插口 9和所述加樣孔8，
[0084]先將載玻片從所述第一插口 9處插入并限制在所述凹槽中，再從所述加樣孔8加入所述5mL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液通入所述第二腔室6中，
[0085]并且，所述第一殼體I的內(nèi)部還設(shè)置有依次連接的微控制器、微型驅(qū)動機(jī)構(gòu)和微型氣缸，所述微型氣缸的活塞端與一推片支撐板的一端樞接，所述推片支撐板通過開設(shè)在所述第二殼體2上的第二插口 10沿所述第二殼體2的縱向伸縮；所述第二插口的縱向中心線與所述第一插口的縱向中心線有一 45°的夾角α ；
[0086]步驟三，將步驟二中的所述涂片裝置置于離心機(jī)中并打開所述開關(guān)，2500rpm離心5min，取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片；離心過程中，彈性部件發(fā)生形變，所述載玻片在離心力的作用下離開所述凹槽進(jìn)入所述第一腔室5中，所述推片支撐板延伸進(jìn)所述第一腔室5并將推片作用于所述載玻片上；所述微控制器的開關(guān)設(shè)置在所述第一殼體I的外部，所述微控制器的開關(guān)還設(shè)置有延時(shí)裝置，所述延時(shí)裝置用于所述開關(guān)打開后，延遲5min再啟動所述推片支撐板， 延遲的時(shí)間為等待載玻片進(jìn)入到所述第一腔室5內(nèi)的時(shí)間。
[0087]步驟四，將步驟三得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定后，行蘇木素-伊紅或巴氏染色，然后用無水酒精脫水，再使用二甲苯透明，最后用中性樹膠封片得到所需要的用于診斷的標(biāo)本涂片。
[0088]所述步驟四中使用的所述固定液由冰醋酸和質(zhì)量體積濃度95%的酒精組成，所述冰醋酸與所述95%酒精的體積比為1:100。
[0089]依照本實(shí)施例二制作的宮頸細(xì)胞的標(biāo)本制片清晰、雜質(zhì)少、細(xì)胞數(shù)量多，易于觀察，提高了 8%的陽性檢出率。
[0090]實(shí)施例三:
[0091]分別稱取N-乙酰-3-巰基丙氨酸15g，氯化鈉50g，磷酸氫二鈉20g和磷酸二氫鈉1.4g溶于少量水中，再量取無水酒精5500mL，冰醋酸80mL和濃鹽酸8mL，最后定容至1000OmL制成宮頸細(xì)胞保存液備用。
[0092]使用上述配方的宮頸細(xì)胞保存液依照如下的方法制作宮頸細(xì)胞標(biāo)本:
[0093]步驟一，婦科醫(yī)生在陰道擴(kuò)張器直視下，用棉簽拭去宮頸和陰道表面的分泌物，然后用宮頸刷沿子宮頸外口插入子宮頸管內(nèi)，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，取出宮頸刷后，將刷頭浸泡于盛有宮頸細(xì)胞保存液的收集管中，旋緊管蓋后貼上標(biāo)簽，和對應(yīng)的申請單一起送往病理科檢查；
[0094]步驟二，病理科將裝有所述收集管在振蕩器上充分振蕩20min，對宮頸細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行固定及消化等處理，取出IOmL溶解好的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液從涂片裝置的加樣孔加入第二腔室內(nèi)，
[0095]如圖6所示，所述涂片裝置包括第一殼體I和位于所述第一殼體I內(nèi)的第二殼體2，所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁上設(shè)置有第一對彈性部件3和第二對彈性部件4，所述第一對彈性部件3和所述第二對彈性部件4與所述第二殼體2的內(nèi)側(cè)壁限定出一凹槽，所述凹槽將所述第二殼體的內(nèi)部空間分隔為第一腔室5和第二腔室6，所述第二對彈性部件4的前端和后端均設(shè)置有吸水墊7，所述第一殼體I和所述第二殼體2上開設(shè)有相對應(yīng)的第一插口 9和所述加樣孔8，
[0096]先將載玻片從所述第一插口 9處插入并限制在所述凹槽中，再從所述加樣孔8加入所述IOmL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液通入所述第二腔室6中，
[0097]并且，所述第一殼體I的內(nèi)部還設(shè)置有依次連接的微控制器、微型驅(qū)動機(jī)構(gòu)和微型氣缸，所述微型氣缸的活塞端與一推片支撐板的一端樞接，所述推片支撐板通過開設(shè)在所述第二殼體2上的第二插口 10沿所述第二殼體2的縱向伸縮；
[0098]步驟三，將步驟二中的所述涂片裝置置于離心機(jī)中并打開所述開關(guān)，3500rpm離心3min，取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片；離心過程中，彈性部件發(fā)生形變，所述載玻片在離心力的作用下離開所述凹槽進(jìn)入所述第一腔室5中，所述推片支撐板延伸進(jìn)所述第一腔室5并將推片作用于所述載玻片上；所述微控制器的開關(guān)設(shè)置在所述第一殼體I的外部，所述微控制器的開關(guān)還設(shè)置有延時(shí)裝置，所述延時(shí)裝置用于所述開關(guān)打開后，延遲3min再啟動所述推片支撐板，延遲的時(shí)間為等待載玻片進(jìn)入到所述第一腔室5內(nèi)的時(shí)間。
[0099]步驟四，將步驟三得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定后，行蘇木素-伊紅或巴氏染色， 然后用無水酒精脫水，再使用二甲苯透明，最后用中性樹膠封片得到所需要的用于診斷的標(biāo)本涂片。
[0100]所述步驟四中使用的所述固定液由冰醋酸和質(zhì)量體積濃度95%的酒精組成，所述冰醋酸與所述95%酒精的體積比為1:100。
[0101]依照本實(shí)施例三制作的宮頸細(xì)胞的標(biāo)本制片清晰、雜質(zhì)少、細(xì)胞數(shù)量多，易于觀察，提高了 9%的陽性檢出率。
[0102]經(jīng)過本發(fā)明研究人員進(jìn)行了大量的臨床實(shí)際應(yīng)用證實(shí)，本發(fā)明的宮頸細(xì)胞保存液效果理想，涂片裝置使用方便快捷，均適用于液基學(xué)細(xì)胞制片。本發(fā)明的宮頸細(xì)胞保存液除用于宮頸細(xì)胞樣本的保存和處理外，還適用于各種臨床樣本的保存和處理，如:尿液、胸腹水、乳頭溢液、腦脊液、滲出液、灌洗液、穿刺液細(xì)胞的保存等。制片后剩余的標(biāo)本可進(jìn)一步直接做免疫組化及分子生物學(xué)檢測(如HPV-DNA、衣原體、淋病、PCR檢測)，這種一個(gè)樣本兩個(gè)測試報(bào)告的方法極大地方便了對患者病情的掌握。
[0103]盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和描述的實(shí)施例。
【權(quán)利要求】
1.一種宮頸細(xì)胞保存液，其特征在于，所述宮頸細(xì)胞保存液包括下列組分: N-乙酰-3-巰基丙氨酸，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.05%~0.15% ; 無水酒精，其含量按體積百分比計(jì)為45%~55% ； 氯化鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.3%~0.5% ; 磷酸氫二鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.1 %~0.2% ； 磷酸二氫鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.007%~0.014% ； 冰醋酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.4%~0.8% ； 濃鹽酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.04%~0.08% ; 蒸餾水，其含量為按體積百分比補(bǔ)足100%。
2.如權(quán)利要求1所述的宮頸細(xì)胞保存液，其特征在于，所述宮頸細(xì)胞保存液包括下列組分: N-乙酰-3-巰基丙氨酸，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.11% ； 無水酒精，其含量按體積百分比計(jì)為49.38% ； 氯化鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.420% ； 磷酸氫二鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.173% ； 磷酸二氫鈉，其含量按質(zhì)量百分比計(jì)為0.012% ； 冰醋酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.59% ; 濃鹽酸，其含量為按體積百分比計(jì)為0.062% ； 蒸餾水，其含量為按體積百分比補(bǔ)足100%。
3.一種宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟一，將取出的宮頸細(xì)胞浸泡于盛有權(quán)利要求1或2所述的宮頸細(xì)胞保存液的收集管中； 步驟二，將步驟一中裝有宮頸細(xì)胞的收集管振蕩10~20min，取出5~IOmL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液加入涂片裝置中； 步驟三，將步驟二中的所述涂片裝置置于離心機(jī)中，2500~3000rpm離心3~5min，取出帶有均勻薄層細(xì)胞涂片的載玻片； 步驟四，將步驟三得到的帶有細(xì)胞涂片的載玻片使用固定液固定后，行蘇木素-伊紅或巴氏染色，然后用無水酒精脫水，再使用二甲苯透明，最后用中性樹膠封片得到所需要的用于診斷的標(biāo)本涂片。
4.如權(quán)利要求3所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述涂片裝置包括第一殼體和位于所述第一殼體內(nèi)的第二殼體，所述第二殼體的內(nèi)側(cè)壁上設(shè)置有第一對彈性部件和第二對彈性部件，所述第一對彈性部件和所述第二對彈性部件與所述第二殼體的內(nèi)側(cè)壁限定出一凹槽，所述凹槽將所述第二殼體的內(nèi)部空間分隔為第一腔室和第二腔室，所述第二對彈性部件的前端和后端均設(shè)置有吸水墊，所述第一殼體和所述第二殼體上開設(shè)有相對應(yīng)的第一插口和加樣孔， 先將載玻片從所述第一插口處插入并限制在所述凹槽中，再從所述加樣孔加入所述步驟一中的所述5~IOmL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液通入所述第二腔室中， 并且，所述第一殼體的內(nèi)部頂端還設(shè)置有依次連接的微控制器、微型驅(qū)動機(jī)構(gòu)和微型氣缸，所述微型氣缸的活塞端與一推片支撐板的一端樞接，所述推片支撐板通過開設(shè)在所述第二殼體上的第二插口沿所述第二殼體的縱向伸縮； 所述步驟三離心過程中，所述載玻片在離心力的作用下離開所述凹槽進(jìn)入所述第一腔室中，所述推片支撐板延伸進(jìn)所述第一腔室并作用于所述載玻片上。
5.如權(quán)利要求3所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，將取出的宮頸細(xì)胞浸泡于盛有權(quán)利要求2所述的宮頸細(xì)胞保存液的收集管中。
6.如權(quán)利要求3所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，將步驟一中裝有宮頸細(xì)胞的收集管振蕩15min，取出6mL溶解后的宮頸細(xì)胞標(biāo)本混合液置于所述涂片裝置中。
7.如權(quán)利要求3所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述步驟四中使用的所述固定液由冰醋酸和質(zhì)量體積濃度95%的酒精組成，所述冰醋酸與所述95%酒精的體積比為1: 100。
8.如權(quán)利要求4所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述微控制器的開關(guān)設(shè)置在所述第一殼體的外部，所述微控制器的開關(guān)還設(shè)置有延時(shí)裝置，所述延時(shí)裝置用于所述開關(guān)打開后，延遲3~5min再啟動所述微型氣缸。
9.如權(quán)利要求4所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述第一殼體的內(nèi)壁上設(shè)置有至少一道滑槽，所述第二殼體的外壁設(shè)置有至少一道突起，所述突起位于所述滑槽內(nèi)。
10.如權(quán)利要求4所述的宮頸細(xì)胞標(biāo)本的制作方法，其特征在于，所述第二插口的縱向中心線與所述第一插口的縱向中心線有一夾角α，30°≤α≤45°。
【文檔編號】G01N1/28GK103875653SQ201410047949
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年2月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月11日
【發(fā)明者】田玉旺 申請人:中國人民解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院