一種測定新橙皮苷二氫查爾酮含量的高效液相色譜方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定新橙皮苷二氫查爾酮含量檢測的高效液相色譜方法，流動(dòng)相：甲醇-水（45-55，體積比）；流速：1.0ml/min；色譜柱：C18（4.6×250mm5μm）；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：5μl；紫外檢測器；檢測波長：283nm。新橙皮苷二氫查爾酮在進(jìn)樣量0.05~5μg內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r=1.0000。采用本發(fā)明的高效液相方法檢測新橙皮苷二氫查爾酮含量，具有樣品分析時(shí)間短；檢測成本低；準(zhǔn)確性和精確性高；檢測有效范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種測定新橙皮苷二氫查爾酮含量的高效液相色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定新橙皮苷二氫查爾酮含量的高效液相色譜方法。
【背景技術(shù)】
[0002]普通食糖如蔗糖、甜菜糖是人們?nèi)粘Ｉ钪凶顝V泛使用的調(diào)味品，但是它們易使身體發(fā)胖，牙齒蛀牙，尤其被糖尿病人所忌諱。隨著生活質(zhì)量的提高，人們越來越關(guān)注健康問題，于是各種健康的低熱量，高甜度調(diào)味品出現(xiàn)了，二氫查爾酮化合物就是其中一類。
[0003]二氫查爾酮類化合物是天然存在于自然界的物質(zhì)，具有許多生理和藥理活性，如用于治療糖尿病。有些二氫查爾酮類化合物本身具有甜味，可用作食品添加劑，如新橙皮苷二氫查爾酮。經(jīng)過人們的研究，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種二氫查爾酮配糖物都具有非常高的甜度，通常相當(dāng)于蔗糖甜度的100-1000倍，且具有無毒性，無熱量或低熱量，是理想的食品調(diào)味劑。
[0004]新橙皮苷二氫查爾酮是從天然柑橘植物中提取得到的新橙皮苷經(jīng)氫化而成的新型甜味劑，具有甜度高、熱量少、無毒等特點(diǎn)，主要用于甜味劑和屏味劑，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥以及飼料工業(yè)中。目前新橙皮苷二氫查爾酮的安全性已經(jīng)在世界范圍內(nèi)得到認(rèn)可，已有包括美國、中國、日本在內(nèi)的30多個(gè)國家批準(zhǔn)其作為食品添加劑使用。在國內(nèi)，對新橙皮苷或二氫查爾酮類化合物的的含量測定方法已有很多報(bào)道。
[0005]徐海燕等 (HPLC同時(shí)測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，徐海燕，金藝，張紅霞，趙懷清，中成藥，2010，(8):1355~1357)報(bào)道了一種檢測胃力片中新橙皮苷含量的方法。采用了 C18 (200mmx4.6mm, 5 μ m)色譜柱，乙腈-1%冰醋酸溶液(19:81, v/v),流速為1.0ml/min，檢測波長為283nm，新橙皮苷在10.2^102.0 μ g/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993，平均回收率97.1%。
[0006]楊武亮(RP-HPLC法測定枳殼中柚皮苷和新橙皮苷的含量，楊武亮，楊世林，張敏，黃加龍，中藥新藥與臨床醫(yī)藥，2005，，16 (4):26f2635)報(bào)道了一種檢測枳殼中新橙皮苷含量的方法。用了 C18 (200mmx4.6mm, 5 μ m)色譜柱，乙腈-磷酸水(pH=3) (19:81, v/v),流速為lml/min，檢測波長為283nm，新橙皮苷在0.155 μ g^0.930 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.9991，平均回收率103.12%。
[0007]目前，關(guān)于檢測新橙皮苷含量的方法有很多，但這些檢測方法進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系的范圍較窄，本發(fā)明中進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系中進(jìn)樣量最小能到0.05μ g，最大能到5 μ g，線性關(guān)系范圍較大。本發(fā)明還具有分離效果好，測定準(zhǔn)確，靈敏度高，分析簡便快速等技術(shù)特點(diǎn)，對于準(zhǔn)確測定新橙皮苷二氫查爾酮含量具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種簡便、分離效果好、精密度和準(zhǔn)確性高的新橙皮苷二氫查爾酮含量的檢測方法。為達(dá)到上述目的，本方法采用了如下技術(shù)方案:
(I)色譜條件:色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，分別選用Thermo C18柱(4.6X250mm5 μ m) >Thermo C18 柱(4.6X 150mm 5 μ m)和 Thermo C18 柱(4.6X 100mm 5 μ m)進(jìn)行試驗(yàn)，優(yōu)選Thermo C18柱(4.6 X 250mm 5 μ m),具有更好的分離效果。
[0009]流動(dòng)相是甲醇-水，乙腈體積分?jǐn)?shù)為40-70%，甲醇優(yōu)選體積為45% ；流速0.6~1.5ml/min ;柱溫 2(T40°C，優(yōu)選柱溫為 25°C，流速為 lml/min。
[0010]本發(fā)明使用Agilent-1260高效液相色譜儀，采用紫外檢測器，檢測波長283nm。
[0011](2)樣品處理:
精確稱量標(biāo)準(zhǔn)品約50.0mg，放入50ml容量瓶中，加入色譜甲醇適量超聲溶解后定容至刻度線，搖勻后用0.2Mm有機(jī)濾頭過濾。
[0012]精確稱量相同質(zhì)量的供試品，放入50ml容量瓶中，加入色譜乙腈適量超聲溶解后定容至刻度線，搖勻后用0.2Mm有機(jī)濾頭過濾。
[0013](3)測定法:
按上述條件，分別對標(biāo)準(zhǔn)品與供試品進(jìn)行自動(dòng)進(jìn)樣。用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算新橙皮苷
二氫查爾酮的含量。
[0014]本發(fā)明經(jīng)過精密度試驗(yàn)、線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)、線性范圍實(shí)驗(yàn)和加樣回收實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)對方法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，檢測迅速；成本低廉；檢測范圍大；靈敏度、精確性高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為新橙皮苷二氫查爾酮的結(jié)構(gòu)式。
[0016]圖2為新橙皮苷二氫查爾酮標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC檢測圖譜。
[0017]圖3為新橙皮苷二氫查爾酮的線性關(guān)系圖與回歸方程。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的詳細(xì)分析方法，但本發(fā)明并不局限于權(quán)利要求所保護(hù)的范圍的限定。
[0019]實(shí)施例1
精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品適量，置于50ml容量瓶中，加色譜乙腈超聲使樣品溶解后稀釋定容至刻度線，用Iml注射器取溶液經(jīng)0.2 μ m，13mm的一次性有機(jī)濾頭過濾，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取相同重量的供試品，置于50ml容量瓶中，加色譜乙腈超聲使樣品溶解后稀釋定容至刻度線，用Iml注射器取溶液經(jīng)0.2 μ m，13mm的一次性有機(jī)濾頭過濾，即得供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)品和供試品各配直5個(gè)
色譜條件:用Agilent-1260高效液相色譜儀，用C18反相色譜柱(Thermo C18
4.6x250mm 5 μ m);流動(dòng)相:甲醇-水(45-55 V/V);流速:lml/min ;檢測波長:283nm ;檢測器:紫外檢測器；采集時(shí)間:20min ;柱溫:25°C。
[0020]按上述色譜條件，對所有標(biāo)準(zhǔn)品和供試品分別進(jìn)樣，標(biāo)準(zhǔn)品溶液5個(gè)樣品分別進(jìn)樣所得峰面積平均值為7392.1295，RSD值為0.61% ;供試品溶液5個(gè)樣品分別進(jìn)樣所得峰面積平均值為7402.6429，RSD值為0.54%。
[0021]根據(jù)公式:新橙皮苷二氫查爾酮含量(％)=(待測樣品峰面積/標(biāo)準(zhǔn)峰面積)* (標(biāo)準(zhǔn)品濃度/待測樣品濃度)*100%
采用外標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)品與供試品平均值代入即可新橙皮苷二氫查爾酮的含量為99.13%。
[0022]通過上述實(shí)例表明本發(fā)明穩(wěn)定性好，精確度高，適用于新橙皮苷二氫查爾酮的含量測定。
[0023]本發(fā)明的方法學(xué)考察
(I)線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)
根據(jù)發(fā)明所述方法，用50ml的容量瓶配置濃度為lmg/ml的儲(chǔ)備液，加甲醇分別稀釋成 0.0 lmg/ml、0.05g/ml、0.lmg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、lmg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本發(fā)明分析方法，對進(jìn)樣量(X)和峰面積(Y)進(jìn)行數(shù)據(jù)回歸分析(線性關(guān)系圖見圖3)，回歸方程為:Y=1480.5Χ+1.7233，r=l.0000。結(jié)果表明，新橙皮苷二氫查爾酮在0.05 μ g~5 μ g濃度范圍內(nèi)，峰面積和進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0024](2)精密度考察
稱取同一新橙皮苷二氫查爾酮樣品，進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，峰面積如表1:
表1新橙皮苷二氫查爾酮6次重復(fù)試驗(yàn)的峰面積
【權(quán)利要求】
1.一種高效液相色譜法測定新橙皮苷二氫查爾酮含量的方法，其特征在于色譜柱為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-水；檢測器為紫外檢測器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于流動(dòng)相為甲醇與水，其中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為40%~70%，優(yōu)選體積為45%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，流動(dòng)相流速為0.6^1.5ml/min，柱溫20~35°C，其中最佳流速為lml/min，柱溫為25°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于使用紫外檢測器，檢測波長為283nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于樣品用甲醇溶解，進(jìn)樣量為5μ l。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于本高效液相色譜法采用外標(biāo)法進(jìn)行新橙皮苷二氫查爾酮的含量測定；進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系中濃度范圍為0.05 μ g~5μ g。
【文檔編號】G01N30/88GK103808848SQ201410071151
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月1日
【發(fā)明者】彭學(xué)東, 張梅, 趙金召, 閆勇義 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司