一種血葡萄糖的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，采用酶學(xué)速率測(cè)定法，根據(jù)在波長(zhǎng)500nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中血葡萄糖的濃度成正比，延遲30～60秒后，測(cè)定30～180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量,使用酶學(xué)速率測(cè)定法，測(cè)定的是反應(yīng)的速率，在反應(yīng)過(guò)程中的線性期進(jìn)行讀數(shù)，可以完全排除血清樣品本底的干擾，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確度；延遲時(shí)間短，讀數(shù)時(shí)間也很短，這樣就使整個(gè)反應(yīng)時(shí)間大大縮短，由原來(lái)的5～15分鐘縮短為3分鐘以內(nèi)，提高了效率。
【專利說(shuō)明】一種血葡萄糖的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，具體地說(shuō)，涉及一種酶學(xué)速率法人血清血葡萄糖的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒，用于體外定量測(cè)定人血清、血漿中的血葡萄糖的濃度，屬于醫(yī)用診斷制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]正常情況下，人體中糖的分解和合成代謝處于動(dòng)態(tài)平衡中，保持相對(duì)恒定。血清葡萄糖是指血液中的葡萄糖濃度，一般禁食8?12h后空腹抽取靜脈血，標(biāo)本在I小時(shí)內(nèi)送檢，血糖測(cè)定是診斷糖尿病的最主要檢查項(xiàng)目之一。
[0003]正常參考值成人3.9?6.lmmol/L,足月新生兒2.8?4.5mmol/L。異常結(jié)果分析，生理性增高見于餐后I?2h和情緒緊張時(shí)，但不應(yīng)超過(guò)lOmmol/L ;生理性降低見于饑餓、妊娠、劇烈運(yùn)動(dòng)后。病理性增高有以下幾種情況:(1)胰島功能低下，胰島素分泌不足的糖尿病；(2)使血糖升高的激素分泌增多，如嗜鉻細(xì)胞瘤、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)(庫(kù)欣綜合征)、垂體前葉功能亢進(jìn)(肢端肥大癥)、甲狀腺功能亢進(jìn)等；(3)中樞性疾病，如顱內(nèi)壓增高，顱內(nèi)出血，重癥腦炎，顱腦外傷、腦瘤、腦膜炎等；(4)其他疾病，如慢性胰腺炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、心肌梗死、皮質(zhì)醇增多癥、肢端肥大癥、嗜鉻細(xì)胞瘤、胰高血糖素瘤、肝硬化、妊娠嘔吐、脫水、全身麻醉時(shí)。病理性降低有以下幾種情況:(1)胰島β細(xì)胞瘤，胰島素分泌過(guò)多；(2)降血糖藥物用量過(guò)多；(3)垂體前葉功能減退、腎上腺皮質(zhì)功能減退、艾迪生病、甲狀腺功能減退；(4)長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝炎、肝硬變、糖原累積病、酒精中毒等。
[0004]血糖測(cè)定方法很多，迄今為止大體可分為四類:氧化還原法、縮合法、酶法及其他類方法。其中酶法包括葡萄糖氧化酶法(G0D)、己糖激酶法(HK)和葡萄糖脫氫酶法(⑶H)，其中以GOD法應(yīng)用最為廣泛。己糖激酶(HK)法是目前國(guó)際上公認(rèn)的測(cè)定葡萄糖參考方法，但試劑比較昂貴。目前有很少單位仍沿用鄰甲苯胺法。其他方法已基本沒有使用。以上方法均為終點(diǎn)法測(cè)定，有一個(gè)共同的缺點(diǎn)就是易受血清本底干擾，而且反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，大大影響了結(jié)果的準(zhǔn)確性和測(cè)定效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)以上不足，提供一種酶學(xué)速率法人血清血葡萄糖的檢測(cè)方法，用于體外定量測(cè)定人血清、血漿中的血葡萄糖的濃度，克服了現(xiàn)有檢測(cè)方法易受血清本底干擾、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)的缺陷，本發(fā)明檢測(cè)方法以酶催化法，創(chuàng)新使用酶學(xué)速率測(cè)定法，完全排除了血清本底的干擾，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于各種生化分析儀器。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供一種實(shí)施該檢測(cè)方法的檢測(cè)試劑盒。
[0007]為解決以上問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，其特征在于:所述檢測(cè)方法為采用酶學(xué)速率測(cè)定法，根據(jù)在波長(zhǎng)500nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中血葡萄糖的濃度成正比，延遲30?60秒后，測(cè)定30?180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。
[0008]一種優(yōu)化方案，所述吸光度上升速率測(cè)定步驟:
a、制備反應(yīng)液
取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；然后在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，37°C條件下保溫3~5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液；或
將緩沖液和酶試劑按比例混合配成試劑工作液，穩(wěn)定3~5分鐘；然后根據(jù)測(cè)定取所需要的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸懼水及標(biāo)準(zhǔn)液，得到反應(yīng)液；
b、反應(yīng)液在37°C條件下反應(yīng)，延遲30~60秒后，在波長(zhǎng)500nm處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30~180秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率。
[0009]進(jìn)一步地，所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1~1:1 ;緩沖液、酶試劑之和與樣本的體積比為200:1~100:1。
[0010]進(jìn)一步地，所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液。
[0011]進(jìn)一步地，所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5~200U/ml ;過(guò)氧化酶濃度為2~30U/ml。
[0012]進(jìn)一步地，所述標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖溶液，濃度為2~7mmol/L。
[0013]基于所述檢測(cè)方法的檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液；
所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液。
[0014]進(jìn)一步地，所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5~200U/ml ;過(guò)氧化酶濃度為2~30U/ml。
[0015]進(jìn)一步地，所述標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖溶液，濃度為2~7mmol/L。
[0016]另一種優(yōu)化方案，根據(jù)下列公式計(jì)算血葡萄糖的含量:
血葡萄糖含量(mmol/L) =
【權(quán)利要求】
1.一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，其特征在于:所述檢測(cè)方法為采用酶學(xué)速率測(cè)定法，根據(jù)在波長(zhǎng)500nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中血葡萄糖的濃度成正比，延遲30?60秒后，測(cè)定30?180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述吸光度上升速率測(cè)定步驟: a、制備反應(yīng)液 取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；然后在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，37°C條件下保溫3?5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液；或 將緩沖液和酶試劑按比例混合配成試劑工作液，穩(wěn)定3?5分鐘；然后根據(jù)測(cè)定取所需要的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸懼水及標(biāo)準(zhǔn)液，得到反應(yīng)液； b、反應(yīng)液在37°C條件下反應(yīng)，延遲30?60秒后，在波長(zhǎng)500nm處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30?180秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1?1:1 ;緩沖液、酶試劑之和與樣本的體積比為200:1?100:1。
4.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液。
5.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5?200U/ml ;過(guò)氧化酶濃度為2?30U/ml。
6.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖溶液，濃度為2?7mmol/L。
7.實(shí)施如權(quán)利要求1-6其中之一所述檢測(cè)方法的檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述檢測(cè)試劑盒包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液； 所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液。
8.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5?200U/ml ;過(guò)氧化酶濃度為2?30U/ml。
9.如權(quán)利要求8所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖溶液，濃度為2 ?7mmol/L。
【文檔編號(hào)】G01N33/66GK103837685SQ201410101525
【公開日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】孫希武, 郝樹彬, 王春光, 彭新國(guó), 王永慶 申請(qǐng)人:濰坊鑫澤生物科技有限公司