一種比伐盧定中三氟乙酸的含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種比伐盧定中三氟乙酸的含量測定方法，檢測方法為高效液相色譜法；本發(fā)明提供了一種檢測方法，克服了比伐盧定不易從色譜柱上洗脫下來的缺點(diǎn)；本發(fā)明的技術(shù)方案特點(diǎn)是：以磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，其中，流動(dòng)相A為0.05%～0.10%磷酸溶液，磷酸溶液要用10%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.01～4.00；采用梯度洗脫的方式，該梯度洗脫的方式很容易將比伐盧定從色譜柱上洗脫下來。
【專利說明】一種比伐盧定中三氟乙酸的含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種高效液相色譜法測定比伐盧定中三氟乙酸含量的方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]比伐盧定為新型抗凝藥，抗凝成分是水蛭素衍生物(片段)，系一合成20肽，相對分子量2180。本品為凝血酶直接的、特異的、可逆性抑制劑。無論凝血酶處于血循環(huán)中還是與血栓結(jié)合，本品均可與其催化位點(diǎn)和陰離子結(jié)合位點(diǎn)(又稱底物識別位點(diǎn))發(fā)生特異性結(jié)合，從而直接抑制凝血酶的活性。因凝血酶可水解本品多肽順序中Arg3和Pro4之間的肽鍵，使本品失活，所以本品對凝血酶的抑制作用是可逆而短暫的，大大降低了臨時(shí)抗凝帶來的出血風(fēng)險(xiǎn)，使該藥在高?；颊咧幸驳玫搅藦V泛的應(yīng)用，取得了較好的臨床應(yīng)用效果。
[0003]在比伐盧定的合成工藝中，為保護(hù)比伐盧定的氨基游離而遭受氧化而變質(zhì)，最后一步是將比伐盧定制成三氟乙酸鹽，以保證比伐盧定的質(zhì)量。通過檢測比伐盧定中三氟乙酸的含量，來保證其均已成鹽(全部成鹽后，三氟乙酸的理論含量為9.5%)。
[0004]三氟乙酸的含量測定方法多采用氣相色譜法，由于三氟乙酸的極性大，酸性強(qiáng)，所以對氣相色譜柱損傷大，分析成本高，且效果不很理想。而用氧瓶燃燒法測定氟的含量，操作繁瑣且誤差較大。也可以考慮用強(qiáng)酸型陽離子交換色譜柱測定三氟乙酸的含量，但也不是實(shí)驗(yàn)室常用手段。
[0005]目前比伐盧定中三氟乙酸的含量測定已發(fā)表(高效液相色譜法測定比伐盧定中三氟乙酸含量，中國生化藥物雜志，2010年第30卷第2期)的方法為HPLC法，具體如下:
[0006]精密稱取三氟乙酸對照品適量，用流動(dòng)相配制成每Iml中含0.5mg三氟乙酸的溶液，作為對照品溶液；精密稱取比伐盧定適量，用流動(dòng)相配制成每Iml中含比伐盧定5mg的溶液，作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定。用十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18柱)為填充劑，以0.07%磷酸溶液(pH3.0)-甲醇(98:2)為流動(dòng)相；流速為1.0ml/min ;柱溫為30°C ;檢測波長為210nm。分別精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，得到樣品中三氟乙酸的含量。
[0007]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在實(shí)際操作過程中，上述方法存在不足:采用上述流動(dòng)相無法將比伐盧定從C18柱上洗脫下來，雖多次進(jìn)樣尚未發(fā)現(xiàn)其對三氟乙酸測定存在干擾，但主峰未洗脫易使色譜柱污染而減少其壽命。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0008]為了解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種檢測方法，克服了比伐盧定不易從色譜柱上洗脫下來的缺點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案特點(diǎn)是:以磷酸溶液為流動(dòng)相Α，甲醇為流動(dòng)相B，其中，流動(dòng)相A為0.05%?0.10%磷酸溶液，磷酸溶液要用10%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.0l?4.0O ;采用梯度洗脫的方式，該梯度洗脫的方式很容易將比伐盧定從色譜柱上洗脫下來。
[0009]本發(fā)明的具體的梯度洗脫的方式，包括流動(dòng)相濃度，洗脫時(shí)間如下表:
【權(quán)利要求】
1.一種高效液相色譜法測定比伐盧定中三氟乙酸含量的方法，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其特征在于:流動(dòng)相由流動(dòng)相A、流動(dòng)相B組成，磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，洗脫方式采用梯度洗脫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定方法，其特征在于:梯度洗脫的方式，包括流動(dòng)相濃度，洗脫時(shí)間如下表:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述測定方法，其特征在于:梯度洗脫的方式，包括流動(dòng)相濃度，洗脫時(shí)間如下表:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定方法，其特征在于:流動(dòng)相A為0.05%~0.10%磷酸溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述測定方法，其特征在于:磷酸溶液要用10%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.0l~4.00。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的測定方法，比伐盧定中三氟乙酸含量的測定方法如下: 精密稱取三氟乙酸對照品適量，用流動(dòng)相配制成每1ml中含1mg三氟乙酸的溶液，作為對照品溶液；精密稱取比伐盧定適量，用流動(dòng)相配制成每1ml中含比伐盧定IOmg的溶液，作為供試品溶液；照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.05%~0.10%磷酸溶液(用10%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.01~.4.00)為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.8~1.5ml/min，柱溫為25~.35 °C，檢測波長為200~220nm，進(jìn)樣量為20 μ 1，梯度洗脫； 梯度洗脫的方式，包括流動(dòng)相濃度，洗脫時(shí)間如下表:
【文檔編號】G01N30/02GK103837626SQ201410109919
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月21日
【發(fā)明者】吳雪英, 喬春蓮, 于艷春, 楊波, 耿海明 申請人:武漢武藥科技有限公司