一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，它包括獨(dú)立包裝的試劑1、試劑2、試劑3；其中，試劑1是由體積百分比為20％的三乙醇胺10μL以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2％的硫化鈉溶液2.5μL組成；試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液10μL以及濃度為2mol／L的氫氧化鈉10μL組成；試劑3是由濃度為2.00-2.10mmol／L，體積為150μL的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.00-2.10mmol／L，體積為150μL的鈣紅以及濃度為2.00-2.10mmol／L，體積為300μL的檸檬黃組成。本發(fā)明試劑不需要專用的儀器設(shè)備，可以直接進(jìn)行使用；同時(shí)，也克服了獸醫(yī)臨床上所存在的困難；同時(shí)本發(fā)明試劑不需要專門的技術(shù)人員便可操作，通過肉眼觀察即可，普通工人也可使用。
【專利說明】一種半定量檢測奶牛血耗的試劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑。
【背景技術(shù)】
[0002]鈣離子是機(jī)體內(nèi)重要的陽離子，血液中的鈣離子具有的重要生理活性，作為體內(nèi)的常量礦物質(zhì)元素，他不僅參與血液的凝固、神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)、肌肉的收縮、致密毛細(xì)血管內(nèi)皮的形成和維持細(xì)胞膜正常的通透性，而且還是許多酶的激活物，能促進(jìn)胰島素、兒茶酚胺、腎上腺皮質(zhì)固醇以及唾液的分泌。正常血鈣范圍是受機(jī)體內(nèi)維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等構(gòu)成的穩(wěn)定的反饋系統(tǒng)相互作用來維持的。當(dāng)鈣離子的含量發(fā)生波動(dòng)時(shí)相應(yīng)的生理功能就會(huì)發(fā)生改變，會(huì)導(dǎo)致許多疾病。如當(dāng)動(dòng)物機(jī)體的血清鈣含量下降時(shí)，會(huì)導(dǎo)致纖維素性骨營養(yǎng)不良、母牛趴窩不起綜合征、佝僂病、骨軟癥、生產(chǎn)癱瘓等。而且奶牛難產(chǎn)、產(chǎn)后酮病、乳房炎、真胃移位、胎衣滯留發(fā)病率明顯增加，造成的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重。據(jù)美國農(nóng)業(yè)部(USDA) 2007年公布的數(shù)據(jù)顯示，因低血鈣直接導(dǎo)致的生產(chǎn)癱瘓已經(jīng)成為影響奶牛健康的第五大類疾病,成母牛發(fā)病率為4.9%，整個(gè)泌乳期產(chǎn)奶量會(huì)降低1200-2000kg，造成4000-7000元的經(jīng)濟(jì)損失，且有13%的奶牛會(huì)死亡。因低血鈣導(dǎo)致的其他疾病更是給美國奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床常用的補(bǔ)鈣方法有口服和輸液兩種。
[0003]目前檢測血清鈣離子較成熟的方法主要有:鈣離子選擇性微電極法、放射示蹤法、核磁共振法、酶法分析等。雖然這些方法均屬于定量的方法，但這些方法操作復(fù)雜，成本較高且需要專門的儀器設(shè)備和技術(shù)人員，很難在基層獸醫(yī)臨床上推廣使用。
[0004]因此，在奶牛生產(chǎn)實(shí)踐中，迫切需要一種快速、簡便、低成本的血鈣檢測試劑和方法，本專利正是針對這個(gè)需求發(fā)明的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的發(fā)明目的是針對上述問題提供一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，用于解決目前現(xiàn)用的定量檢測血鈣方法存在操作復(fù)雜、成本昂貴、且需要專門技術(shù)人員才能完成的問題。
[0006]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，包括獨(dú)立包裝的試劑1、試劑2、試劑3 ;其中所述的試劑I是由體積百分比為20%的三乙醇胺IOyL以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的硫化鈉溶液2.5 μ L組成；試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液IOyL以及濃度為2mol / L的氫氧化鈉10 μ L組成；試劑3是由濃度為
2.00-2.1Ommol / L，體積為150 μ L的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.00-2.1Ommol /L，體積為150 μ L的鈣紅以及濃度為2.00-2.1Ommol / L，體積為300 μ L的檸檬黃組成。
[0007]采用上述技術(shù)方案的積極效果:
[0008]1、本發(fā)明試劑不需要專用的儀器設(shè)備，可以直接進(jìn)行使用，減少了專用儀器設(shè)備的費(fèi)用，同時(shí)，也克服了獸醫(yī)臨床上所存在的困難；
[0009]2、本發(fā)明試劑不需要專門的技術(shù)人員便可操作，通過肉眼觀察即可，普通工人也可使用；
[0010]3、本發(fā)明試劑成本低廉、操作方便、使用簡捷，適合在獸醫(yī)臨床上推廣使用?！揪唧w實(shí)施方式】
[0011]下面對本發(fā)明作進(jìn)一步說明:一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，包括獨(dú)立包裝的試劑1、試劑2、試劑3。其中所述的試劑I是由體積百分比為20%的三乙醇胺10 μ L以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2 %的硫化鈉溶液2.5 μ L組成。試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液1(^1^以及濃度為211101 / L的氫氧化鈉10 μ L組成。試劑3是由濃度為2.00-2.1Ommol /L，體積為150 μ L的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.00-2.1Ommol / L，體積為150 μ L的鈣紅以及濃度為2.00-2.1Ommol / L，體積為300 μ L的檸檬黃組成。
[0012]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑包括獨(dú)立包裝的試劑
1、試劑2、試劑3。其中所述的試劑I是由體積百分比為20%的三乙醇胺10 μ L以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的硫化鈉溶液2.5 μ L組成。試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液10 μ L以及濃度為2mol / L的氫氧化鈉10 μ L組成。試劑3是由濃度為2.05mmol / L，體積為150 μ L的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.05mmol / L，體積為150 μ L的鈣紅以及濃度為2.05mmol / L，體積為300 μ L的檸檬黃組成。
[0013]具體使用方式如下:
[0014]首先，采取待檢奶牛血清300 μ L。
[0015]然后，將血清中加入12.5μ L的試劑I，20 μ L的試劑2。
[0016]最后，再加入600 μ L的試劑3。
[0017]觀察顏色變化，由綠色變成橙色時(shí)，為陰性，表明不缺鈣；顏色仍為綠色時(shí)，為陽性，表明缺鈣。
[0018]反應(yīng)原理:在堿性環(huán)境中，乙二胺四乙酸二鈉鹽，以下簡稱為EDTA，EDTA與鈣紅均可以和血清中的鈣離子結(jié)合，但是EDTA與鈣離子結(jié)合常數(shù)遠(yuǎn)大于與鈣紅的結(jié)合常數(shù)，檸檬黃為惰性染料不與鈣離子結(jié)合，EDTA本身沒有顏色，與鈣離子結(jié)合后也沒有顏色。鈣紅本身為紫色，與檸檬黃共同作用變?yōu)榫G色，當(dāng)鈣紅與鈣離子結(jié)合后呈現(xiàn)酒紅色，與檸檬黃作用變?yōu)槌壬?。另外血清中還存在其他金屬陽離子也可以與EDTA結(jié)合，會(huì)干擾鈣離子的測定。所以應(yīng)首先加入試劑I掩蔽血清中的亞鐵離子、銅離子、鈷離子和鋅離子。再加入試劑2形成堿性環(huán)境的同時(shí)也使鎂離子形成白色沉淀。最后在反應(yīng)管中加入綠色的試劑3。實(shí)際以EDTA、鈣紅和檸檬黃的濃度均為2.05mmol / L為例進(jìn)行描述，具體描述如下:
[0019]選取大慶市周邊3家奶牛養(yǎng)殖場對圍產(chǎn)期奶牛進(jìn)行檢測，同時(shí)運(yùn)用半自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行對比(2.05-2.69mmol / L)。統(tǒng)計(jì)如下:
[0020]牛場一對比檢測統(tǒng)計(jì)表
[0021]
【權(quán)利要求】
1.一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，其特征在于:該試劑包括獨(dú)立包裝的試劑1、試劑2、試劑3 ;其中所述的試劑I是由體積百分比為20%的三乙醇胺10 μ L以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的硫化鈉溶液2.5 μ L組成；試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液10 μ L以及濃度為2mol / L的氫氧化鈉10 μ L組成；試劑3是由濃度為2.00-2.1Ommol / L，體積為150 μ L的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.00-2.1Ommol / L，體積為150 μ L的鈣紅以及濃度為2.00-2.1OmmOl / L，體積為300 μ L的檸檬黃組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種半定量檢測奶牛血鈣的試劑，其特征在于:該試劑包括獨(dú)立包裝的試劑1、試劑2、試劑3 ;其中所述的試劑I是由體積百分比為20%的三乙醇胺10 μ L以及質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%的硫化鈉溶液2.5 μ L組成。試劑2是由pH為10的氨水-氯化銨混合緩沖溶液10 μ L以及濃度為2mol / L的氫氧化鈉10 μ L組成。試劑3是由濃度為2.05mmol / L，體積為150 μ L的乙二胺四乙酸二鈉鹽以及濃度為2.05mmol / L，體積150 μ L的鈣紅以及濃度為2.05mmol / L，體積為300 μ L的檸檬黃組成。
【文檔編號(hào)】G01N21/78GK103837531SQ201410111461
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】武瑞, 賀顯晶, 宋國希, 郝丹丹, 王建發(fā), 趙雅婧, 趙微微, 陳允, 王翠媛, 曲艷鵬, 于德斌, 梁建斌 申請人:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)