一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種丹紅注射液濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法，通過(guò)設(shè)計(jì)近紅外在線檢測(cè)裝置，在線采集丹紅注射液濃縮液的近紅外透射光譜，并收集濃縮液樣本，采用烘干稱重法和高效液相色譜法分別測(cè)得濃縮液樣本中各質(zhì)控指標(biāo)信息，剔除異常光譜，選擇近紅外光譜建模波段和預(yù)處理方法，使用多元校正算法建立各質(zhì)控指標(biāo)定量模型，并采用各模型評(píng)價(jià)指標(biāo)考察模型性能，將已建模型用于在線分析濃縮過(guò)程中各質(zhì)控指標(biāo)的變化趨勢(shì)。本發(fā)明將近紅外在線分析技術(shù)引入到丹紅注射液的濃縮過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)各質(zhì)控指標(biāo)（丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率）的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，有利于提高丹紅注射液濃縮過(guò)程的質(zhì)量控制水平，充分保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、可靠。
【專利說(shuō)明】一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于近紅外在線檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]丹紅注射液是我國(guó)第一個(gè)快速解決全身臟器供血不足和缺血梗塞性疾病的專利中成藥，具有活血化瘀，通脈舒絡(luò)的功能，是由丹參和紅花組成的復(fù)方制劑。丹參具有活血化瘀、理氣止痛的功效，是臨床上廣泛應(yīng)用的中藥品種之一。從丹參中分離得到的水溶性成分有丹參素、原兒茶醛、和丹酚酸B等。而紅花具有活血通絡(luò)的功效，含有黃色和紅色兩種色素，有效成分主要集中在水溶性紅花黃色素，如羥基紅花黃色素A等。濃縮工藝是丹紅注射液生產(chǎn)過(guò)程的關(guān)鍵工藝環(huán)節(jié)，其主要目的是使提取液中的有效成分得到富集，以利于后期精制純化環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的濃縮過(guò)程質(zhì)量控制主要憑借操作人員的經(jīng)驗(yàn)或密度計(jì)等物理指標(biāo)判別方法，耗時(shí)費(fèi)力，忽略了體系的有效成分濃度變化對(duì)產(chǎn)品均一的影響，易造成不同批次濃縮液質(zhì)量的不穩(wěn)定。故研究發(fā)展丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程中關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo)的在線檢測(cè)方法，有助于解決丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程中關(guān)鍵控制指標(biāo)的質(zhì)量控制問(wèn)題，對(duì)于中藥工業(yè)技術(shù)進(jìn)步和產(chǎn)品質(zhì)量升級(jí)具有重大現(xiàn)實(shí)意義。
[0003]近紅外(NIR)光譜技術(shù)作為一種快速無(wú)損的綠色分析技術(shù)，與傳統(tǒng)技術(shù)相比，具有快速分析、無(wú)污染、樣品處理簡(jiǎn)單、無(wú)需消耗試劑等特點(diǎn)。近年來(lái)，近紅外光譜技術(shù)已經(jīng)越來(lái)越多的被應(yīng)用于中藥研究，包括藥材產(chǎn)地鑒別、有效組分含量測(cè)定和制藥過(guò)程的在線檢測(cè)和監(jiān)控。從近年來(lái)研究進(jìn)展情況看來(lái)，近紅外光譜分析技術(shù)是最有希望在中藥生產(chǎn)過(guò)程實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)及質(zhì)量控制的過(guò)程分析技術(shù)之一。在中藥質(zhì)量控制及生產(chǎn)應(yīng)用領(lǐng)域，近紅外光譜作為一種在線檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于指標(biāo)成分的測(cè)定已有相關(guān)專利文獻(xiàn)，如專利:中藥生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)在線檢測(cè)(CN02137234.9)，近紅外光譜快速在線檢測(cè)中藥苦黃注射劑有效成分的方法(CN200710022408.9)，近紅外在線檢測(cè)技術(shù)在中藥一清顆粒生產(chǎn)中的應(yīng)用方法(CN200810050095.2)和一種對(duì)中藥生產(chǎn)工藝進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控的方法(CN200410090617.3)等。但是這些專利均為離線采集近紅外光譜，也并沒(méi)有將所建模型真正應(yīng)用于在線分析。
[0004]目前近紅外光譜檢測(cè)中常用的模型建立方法較多的是主成分回歸(PCR)和偏最小二乘(PLS)。其中，PLS建立的模型更優(yōu)于PCR建立的模型，因?yàn)樵赑LS中，同時(shí)對(duì)自變量X和因變量Y數(shù)據(jù)矩陣進(jìn)行分解，相對(duì)于PCR中只對(duì)自變量X矩陣進(jìn)行分解，不僅消除了 X和Y中的無(wú)用信息，而且使自變量X主成分直接與被分析組分含量Y關(guān)聯(lián)，PLS方法優(yōu)于PCR，現(xiàn)已成為化學(xué)計(jì)量學(xué)中備受推崇的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程的在線檢測(cè)方法。該方法的檢測(cè)目標(biāo)為實(shí)現(xiàn)丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程中各質(zhì)控指標(biāo)的在線定量分析，為丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程質(zhì)量控制提供方法。[0006]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
1.設(shè)計(jì)近紅外在線檢測(cè)裝置
近紅外在線檢測(cè)裝置包括第一閥門(mén)(I)、第二閥門(mén)(2)、第三閥門(mén)(3)、第四閥門(mén)(4)、濃縮設(shè)備一效加熱室(5)、濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)、濃縮設(shè)備二效加熱室(5’)、濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室(6’)、循環(huán)總管旁路(7)、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)、過(guò)濾器(9)、流通池(10)、光纖探頭(11)、取樣管(12)、近紅外光譜儀(13)、一效循環(huán)總管(14)、二效循環(huán)總管(14’)和蒸汽管路，濃縮設(shè)備一效加熱室(5)通過(guò)一效循環(huán)總管(14)連接濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)，濃縮設(shè)備二效加熱室(5 ’)通過(guò)二效循環(huán)總管(14 ’)連接濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室(6 ’)，濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6 )通過(guò)蒸汽管路(15)連接濃縮設(shè)備一效加熱室(5 ’)，循環(huán)總管旁路(7 )以循環(huán)支路形式連接在濃縮設(shè)備一效加熱室(5)和濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)之間的一效循環(huán)總管(14)上，第一閥門(mén)(I)、第二閥門(mén)(2)、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)、過(guò)濾器(9)、流通池(10)以串聯(lián)方式連接在循環(huán)總管旁路(7 )上，流通池(10 )通過(guò)光纖探頭(11)連接近紅外光譜儀(13)，第三閥門(mén)(3)、第四閥門(mén)(4)和取樣管(12)串聯(lián)并以支路形式連接在循環(huán)總管旁路
(7)上，靠近流通池(10)。
[0007]2.在線采集近紅外透射光譜及濃縮液樣本
濃縮開(kāi)始后，打開(kāi)第一閥門(mén)(I)和第二閥門(mén)(2)，連通循環(huán)管路(7)，濃縮液通過(guò)微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)進(jìn)入過(guò)濾器(9)，濾除雜質(zhì)后到達(dá)流通池(10)，近紅外光譜儀(13)在線采集流通池內(nèi)濃縮液的近紅外光譜，取樣時(shí)，打開(kāi)第三閥門(mén)(3)，待濃縮液充滿取樣管(12)后關(guān)閉第三閥門(mén)(3)，打 開(kāi)第四閥門(mén)(4)，收集濃縮液樣本用于測(cè)定各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)，流通池
(10)及循環(huán)管路中水沉液流速控制在120 mL/min，過(guò)濾器用于濾除水沉液中的大部分固體雜質(zhì)顆粒，過(guò)濾精度為60微米。
[0008]采用透射法采集近紅外光譜，光譜范圍為4500 cm_卜12000 cnT1，掃描次數(shù)為32次，分辨率為8 cnT1，以空氣為參比。
[0009]光譜和濃縮液樣品在線采集分三個(gè)階段:第一階段，將丹參、紅花藥材水提得到的提取液通過(guò)真空先后引入一效蒸發(fā)室(6)和二效蒸發(fā)室(6’)中，直至放液結(jié)束，過(guò)程中每隔5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔20分鐘從取樣口取樣；第二階段，將二效蒸發(fā)室中的濃縮液抽入一效蒸發(fā)室中，過(guò)程中每隔2.5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔5分鐘從取樣口取樣；第三階段，濃縮液全部轉(zhuǎn)移至一效蒸發(fā)室后，每隔30秒在線采集近紅外光譜，每隔2分鐘從取樣口取樣，直至藥液密度達(dá)到1.27^1.28g/ml，濃縮過(guò)程結(jié)束。
[0010]3.采用傳統(tǒng)分析方法(高效液相色譜法和烘干稱重法)測(cè)得濃縮液樣本中各質(zhì)控指標(biāo)信息
所述的濃縮液樣本的各質(zhì)控指標(biāo)包括丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率，采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定濃縮液樣本中丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B ;使用烘干稱重法測(cè)定含水率。
[0011](I)高效液相色譜法:
條件:Agilent eclipse C18 分析柱(2ο0 λ 4.b mm, 5 μ m);流速 I mL/min ;柱溫 35°C ;進(jìn)樣量5 μ L ;流動(dòng)相:Α為甲醇，B為0.5%甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脫程序?yàn)?0-20min, A:9% — 39% ;20~36 min, A:39% — 47% ;36~39 min, A:47% — 90% ;39~45 min, A:90%。檢測(cè)波長(zhǎng):0~13 min, 280 nm (參比波長(zhǎng)360 nm) ;13~21 min, 403 nm (參比波長(zhǎng)500 nm)；21 ~45 min, 280 nm (參比波長(zhǎng) 360 nm)；
濃縮液樣本于1500 r/min高速離心機(jī)中離心10分鐘，再稀釋成不同倍數(shù)，濾過(guò)(0.45Mffl微孔濾膜)，取續(xù)濾液用于液相分析。
[0012]標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密稱取丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B對(duì)照品適量，使用流動(dòng)相(甲醇-0.5%甲酸，v/v，50:50)稀釋，制成單一成分對(duì)照品儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液等比稀釋，配成不同濃度的工作液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，以色譜峰面積Y對(duì)進(jìn)樣濃度X進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明，丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B的線性范圍分別為9.84~147.6,1.13~22.68,3.74~37.41,4.83~57.98，52.80~1056 μ g/mL,相關(guān)系數(shù)R值均大于0.9998。
[0013](2)烘干稱重法:稱定烘干至恒重的稱量瓶(兩次烘干后重量差異小于5 mg，記石)，量取I mL濃縮液至扁形瓶，稱重(石)，于105 °C烘干至恒重，取出置干燥器內(nèi)冷卻30min，迅速稱重Qp，按下述公式計(jì)算含水率:
含水率(％)=(Z;- X2KXs-X0) X100%
4.剔除異常光譜
雙效濃縮過(guò)程中由于設(shè)備的劇烈晃動(dòng)，容易導(dǎo)致流通池采集的光譜出現(xiàn)基線漂移或毛刺明顯等情況，從而引起模型精度的下降。本發(fā)明計(jì)算原始近紅外光譜的馬氏距離，并使用肖維勒(Chauvenet)準(zhǔn)則剔除異常光譜。若測(cè)量值Xi (I < i < η)的殘差滿足I Vi I >Wno則Xi被視為異常數(shù)據(jù)，予以剔除。其中，Vi為殘差，σ為標(biāo)準(zhǔn)差，Wn可查表得到。
[0014]5.選擇近紅外光譜建模波段和預(yù)處理方法
采用一階導(dǎo)數(shù)法、Norris導(dǎo)數(shù)濾波、減去一條直線和標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換法對(duì)光譜預(yù)處理，用于消除基線漂移、噪音、固體顆粒大小、表面散射及光程變化等對(duì)近紅外光譜的影響。丹參素、羥基紅花黃色素Α、迷迭香酸和丹酚酸B模型的光譜預(yù)處理方法包括:一階導(dǎo)數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換和Norris導(dǎo)數(shù)濾波處理；原兒茶醛模型的光譜預(yù)處理方法包括:一階導(dǎo)數(shù)和減去一條直線；含水率模型的光譜預(yù)處理方法包括:一階導(dǎo)數(shù)。
[0015]丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素Α、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率模型的建模波段為 5446.2~6101.9 cnT1 和 7498.2~9403.6 cnT1。
[0016]6.使用多元校正算法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型，并采用各模型評(píng)價(jià)指標(biāo)考察模型性倉(cāng)泛;
采用偏最小二乘回歸法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型。模型評(píng)價(jià)指標(biāo)包括:模型評(píng)價(jià)指標(biāo)包括相關(guān)系數(shù)(R)、校正集均方根誤差(RMSEC)、校正集相互驗(yàn)證均方根誤差(RMSECV)、校正集相對(duì)偏差(RSEC)，相對(duì)分析誤差(RPD)。當(dāng)R值接近于1，RMSEC值小于RMSECV值，且兩者盡可能小，RSEC小于20%，RPD≥3時(shí)，說(shuō)明所建模型具有較好的穩(wěn)定性和預(yù)測(cè)精度，可以用于丹紅注射液濃縮過(guò)程的在線檢測(cè)。
[0017] 7.將已建模型用于在線分析丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程中各質(zhì)控指標(biāo)的變化趨勢(shì) 在線采集丹紅注射液雙效濃縮液的近紅外光譜圖，將光譜數(shù)據(jù)輸入到校正模型中，經(jīng)
過(guò)計(jì)算即可實(shí)時(shí)得知濃縮液中各質(zhì)控指標(biāo)的信息。
[0018]采用偏最小二乘回歸法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型。全局模型為濃縮液樣本不按濃度分類(lèi)，全部用于建模；局部模型為使用主成分分析方法將濃縮液樣本按照濃度高低分成兩類(lèi)，按照類(lèi)別分別建立各質(zhì)控指標(biāo)的局部模型。當(dāng)全局模型性能不佳時(shí)，可使用局部模型以提高模型性能和預(yù)測(cè)能力。
[0019]本發(fā)明將近紅外在線分析技術(shù)引入到丹紅注射液的雙效濃縮過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)各質(zhì)控指標(biāo)(丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，有利于提高丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程的質(zhì)量控制水平，充分保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、可靠。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是雙效濃縮過(guò)程近紅外在線檢測(cè)系統(tǒng)簡(jiǎn)圖。
[0021]圖2是濃縮液樣品相對(duì)密度與含水率相關(guān)關(guān)系圖。
[0022]圖3是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程丹參素預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0023]圖4是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程原兒茶醛預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0024]圖5是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程羥基紅花黃色素A預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0025]圖6是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程迷迭香酸預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0026]圖7是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程丹酚酸B預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0027]圖8是使用全局模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程含水率預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0028]圖9是濃縮液樣品光譜主成分得分圖。
[0029]圖10是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程丹參素預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0030]圖11是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程原兒茶醛預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0031]圖12是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程羥基紅花黃色素A預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0032]圖13是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程迷迭香酸預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0033]圖14是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程丹酚酸B預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
[0034]圖15是使用局部模型時(shí)雙效濃縮過(guò)程含水率預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值對(duì)比圖。
【具體實(shí)施方式】
[0035]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例做進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0036]實(shí)施例1 (使用全部濃縮液樣本建立全局模型)
1.設(shè)計(jì)近紅外在線檢測(cè)裝置
參見(jiàn)圖1，近紅外在線檢測(cè)裝置包括第一閥門(mén)1、第二閥門(mén)2、第三閥門(mén)3、第四閥門(mén)4、濃縮設(shè)備一效加熱室5、濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室6、濃縮設(shè)備二效加熱室5’、濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室6’、循環(huán)總管旁路7、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵8、過(guò)濾器9、流通池10、光纖探頭11、取樣管12、近紅外光譜儀13、一效循環(huán)總管14、二效循環(huán)總管14’和蒸汽管路；濃縮設(shè)備一效加熱室5通過(guò)一效循環(huán)總管14連接濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室6，濃縮設(shè)備二效加熱室5’通過(guò)二效循環(huán)總管14’連接濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室6’，濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室6通過(guò)蒸汽管路15連接濃縮設(shè)備一效加熱室5’，循環(huán)總管旁路7以循環(huán)支路形式連接在濃縮設(shè)備一效加熱室5和濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室6之間的一效循環(huán)總管14上,第一閥門(mén)1、第二閥門(mén)2、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵8、過(guò)濾器9、流通池10以串聯(lián)方式連接在循環(huán)總管旁路7上，流通池10通過(guò)光纖探頭11連接近紅外光譜儀13，第三閥門(mén)3、第四閥門(mén)4和取樣管12串聯(lián)并以支路形式連接在循環(huán)總管旁路7上，靠近流通池10。
[0037]2.近紅外光譜和濃縮液樣本的在線采集
濃縮開(kāi)始后，打開(kāi)第一閥門(mén)I和第二閥門(mén)2，連通循環(huán)管路7，濃縮液通過(guò)微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵8進(jìn)入過(guò)濾器9，濾除雜質(zhì)后到達(dá)流通池10，近紅外光譜儀13在線采集流通池內(nèi)濃縮液的近紅外光譜，取樣時(shí)，打開(kāi)第三閥門(mén)3，待濃縮液充滿取樣管12后關(guān)閉第三閥門(mén)3，打開(kāi)第四閥門(mén)4，收集濃縮液樣本用于測(cè)定各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)。流通池10及循環(huán)管路中水沉液流速控制在120 mL/min，過(guò)濾器用于濾除水沉液中的大部分固體雜質(zhì)顆粒，過(guò)濾精度為60微米。
[0038]采用透射法采集近紅外光譜，光譜范圍為4500 cm_卜12000 cnT1，掃描次數(shù)為32次，分辨率為8 cnT1，以空氣為參比。光譜和濃縮液樣品在線采集分三個(gè)階段:第一階段，將丹參、紅花藥材水提得到的提取液通過(guò)真空先后引入一效蒸發(fā)室6和二效蒸發(fā)室6’中，直至放液結(jié)束，過(guò)程中每隔5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔20分鐘從取樣口取樣；第二階段，將二效蒸發(fā)室6’中的濃縮液抽入一效蒸發(fā)室6中，過(guò)程中每隔2.5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔5分鐘從取樣口取樣；第三階段，濃縮液全部轉(zhuǎn)移至一效蒸發(fā)室6后，每隔30秒在線采集近紅外光譜，每隔2分鐘從取樣口取樣，直至藥液密度達(dá)到1.27^1.28g/ml，濃縮過(guò)程結(jié)束。
[0039]收集不同批次雙效濃縮過(guò)程中的濃縮液樣品，隨機(jī)選擇其中2批數(shù)據(jù)作為驗(yàn)證集，其余樣品作為校正集參與建模。重復(fù)10批丹紅注射液的濃縮實(shí)驗(yàn)，每批次的實(shí)驗(yàn)都以相同方式進(jìn)行取樣和采集光譜。共得到176個(gè)濃縮液樣本。
[0040]3.各質(zhì)控指標(biāo)測(cè)定
各質(zhì)控指標(biāo)包括丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率。采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定濃縮液樣本中丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B ;使用烘 干稱重法測(cè)定含水率。
[0041](I)高效液相色譜法:條件:Agilent eclipse C18分析柱(250 4.6 mm, 5 μ m)；流速I(mǎi) mL/min;柱溫35 °C;進(jìn)樣量5 μ L ;流動(dòng)相:A為甲醇，B為0.5%甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脫程序?yàn)?0~20 min,A:9%—39% ;20~36 min, A:39%^ 47% ;36~39 min,A:47% —90% ；39~45 min, A:90%。檢測(cè)波長(zhǎng):0~13 min, 280 nm (參比波長(zhǎng) 360 nm) ;13~21 min, 403 nm(參比波長(zhǎng) 500 nm) ;21 ~45 min, 280 nm (參比波長(zhǎng) 360 nm)。
[0042]濃縮液樣本于1500 r/min高速離心機(jī)中離心10分鐘，再稀釋成不同倍數(shù)，濾過(guò)(0.45 Mffl微孔濾膜)，取續(xù)濾液用于液相分析。
[0043]標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密稱取丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B對(duì)照品適量，使用流動(dòng)相(甲醇-0.5%甲酸，v/v，50:50)稀釋，制成單一成分對(duì)照品儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液等比稀釋，配成不同濃度的工作液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析。以色譜峰面積Y對(duì)進(jìn)樣濃度X進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B的線性范圍分別為9.84~147.6,1.13~22.68,3.74~37.41,4.83~57.98，52.80~1056 μ g/mL,相關(guān)系數(shù)R值均大于0.9998。
[0044](2)烘干稱重法:稱定烘干至恒重的稱量瓶(兩次烘干后重量差異小于5 mg，記石)，量取I mL濃縮液至扁形瓶，稱重(石)，于105 °C烘干至恒重，取出置干燥器內(nèi)冷卻30min，迅速稱重Qp，按下述公式計(jì)算含水率:
【權(quán)利要求】
1.一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法，其特征在于，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)設(shè)計(jì)近紅外在線檢測(cè)裝置 該裝置包括第一閥門(mén)(1)、第二閥門(mén)(2)、第三閥門(mén)(3)、第四閥門(mén)(4)、濃縮設(shè)備一效加熱室(5)、濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)、濃縮設(shè)備二效加熱室(5’)、濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室(6’)、循環(huán)總管旁路(7)、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)、過(guò)濾器(9)、流通池(10)、光纖探頭(11)、取樣管(12)、近紅外光譜儀(13)、一效循環(huán)總管(14)、二效循環(huán)總管(14’)和蒸汽管路，濃縮設(shè)備一效加熱室(5)通過(guò)一效循環(huán)總管(14)連接濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)，濃縮設(shè)備二效加熱室(5’)通過(guò)二效循環(huán)總管(14’)連接濃縮設(shè)備二效蒸發(fā)室(6’)，濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)通過(guò)蒸汽管路(15)連接濃縮設(shè)備一效加熱室(5’)，循環(huán)總管旁路(7)以循環(huán)支路形式連接在濃縮設(shè)備一效加熱室(5)和濃縮設(shè)備一效蒸發(fā)室(6)之間的一效循環(huán)總管(14)上，第一閥門(mén)(1)、第二閥門(mén)(2)、微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)、過(guò)濾器(9)、流通池(10)以串聯(lián)方式連接在循環(huán)總管旁路(7 )上，流通池(10 )通過(guò)光纖探頭(11)連接近紅外光譜儀(13 )，第三閥門(mén)(3)、第四閥門(mén)(4)和取樣管(12)串聯(lián)并以支路形式連接在循環(huán)總管旁路(7)上，靠近流通池(10)； (2)在線采集近紅外透射光譜及濃縮液樣本 濃縮開(kāi)始后，打開(kāi)第一閥門(mén)(I)和第二閥門(mén)(2)，連通循環(huán)管路(7)，濃縮液通過(guò)微型磁力驅(qū)動(dòng)齒輪泵(8)進(jìn)入過(guò)濾器(9)，濾除雜質(zhì)后到達(dá)流通池(10)，近紅外光譜儀(13)在線采集流通池內(nèi)濃縮液的近紅外光譜，取樣時(shí)，打開(kāi)第三閥門(mén)(3)，待濃縮液充滿取樣管(12)后關(guān)閉第三閥門(mén)(3)，打開(kāi)第四閥門(mén)(4)，收集濃縮液樣本用于測(cè)定各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)，流通池(10)及循環(huán)管路中水沉液流速控制在120 mL/min，過(guò)濾精度為60微米； 其中近紅外光譜范圍為4500 cm_卜12000 cnT1，掃描次數(shù)為32次，分辨率為8 cnT1，以空氣為參比； (3)檢測(cè)濃縮液樣本中各質(zhì)控指標(biāo):質(zhì)控指標(biāo)為丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率， (a)采用高效液相色譜法測(cè)定丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B ;濃縮液樣本于1500 r/min高速離心機(jī)中離心10分鐘，再稀釋成不同倍數(shù)，0.45 Mm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液用于液相分析； 色譜條件:Agilent eclipse C18 分析柱，250X4.6mm，5 μ m ;流速I(mǎi) mL/min ;柱溫35 °C;進(jìn)樣量5 μ L ;流動(dòng)相:A為甲醇，B為0.5%甲酸水溶液(v/v)，梯度洗脫程序?yàn)?0~20 min，A:9% — 39% ;20~36 min，A:39% — 47% ;36~39min, A:47% — 90% ;39~45 min, A:90% ;檢測(cè)波長(zhǎng):0~13 min,280 nm ; 13~21 min，403 nm ；21~45 min,280 nm ； (b)烘干稱重法測(cè)定含水率:稱定烘干至恒重的稱量瓶，兩次烘干后重量差異小于5mg，記石，量取I mL濃縮液至扁形瓶，稱重(Z7)，于105 °C烘干至恒重，取出置干燥器內(nèi)冷卻.30 min，迅速稱重Qp，按下述公式計(jì)算含水率: 含水率(％)=(AV Χ2)?{X1-X0) X100% ； (4)剔除異常光譜: 計(jì)算原始近紅外光譜的馬氏距離，并使用肖維勒準(zhǔn)則剔除異常光譜，若測(cè)量值Xi (1≤i^n)的殘差滿足| Vi |> Wn σ則Xi被視為異常數(shù)據(jù),予以剔除,其中,Vi為殘差，σ為標(biāo)準(zhǔn)差，Wn可查表得到； (5)選擇近紅外光譜建模波段和預(yù)處理方法: 采用一階導(dǎo)數(shù)法、Norris導(dǎo)數(shù)濾波、減去一條直線和標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換法對(duì)光譜預(yù)處理，用于消除基線漂移、噪音、固體顆粒大小、表面散射及光程變化等對(duì)近紅外光譜的影響，丹參素、羥基紅花黃色素Α、迷迭香酸和丹酚酸B模型的光譜預(yù)處理方法是:一階導(dǎo)數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換和Norris導(dǎo)數(shù)濾波處理；原兒茶醛模型的光譜預(yù)處理方法是:一階導(dǎo)數(shù)和減去一條直線；含水率模型的光譜預(yù)處理方法是:一階導(dǎo)數(shù)； 丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素Α、迷迭香酸、丹酚酸B和含水率模型的建模波段為5446.2~6101.9 cnT1 和 7498.2~9403.6 cnT1 ； (6)使用多元校正算法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型，并采用各模型評(píng)價(jià)指標(biāo)考察模型性能: 采用偏最小二乘回歸法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型，模型評(píng)價(jià)指標(biāo)包括:模型評(píng)價(jià)指標(biāo)包括相關(guān)系數(shù)(R)、校正集均方根誤差(RMSEC)、校正集相互驗(yàn)證均方根誤差(RMSECV)、校正集相對(duì)偏差(RSEC)，相對(duì)分析誤差(RPD)，當(dāng)R值接近于I，RMSEC值小于RMSECV值，且兩者盡可能小，RSEC小于20%，RPD≥3時(shí)，說(shuō)明所建模型具有好的穩(wěn)定性和預(yù)測(cè)精度，可用于丹紅注射液濃縮過(guò)程的在線檢測(cè)； (7)將已建模型用于在線分析丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程中各質(zhì)控指標(biāo)的變化趨勢(shì): 在線采集丹紅注射液濃縮液的近紅外光譜圖，將光譜數(shù)據(jù)輸入到校正模型中，經(jīng)過(guò)計(jì)算實(shí)時(shí)得知濃縮液中各質(zhì)控指標(biāo)的信息。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的光譜和濃縮液樣品在線采集分三個(gè)階段:第一階段，將丹參、紅花藥材水提得到的提取液通過(guò)真空先后引入一效蒸發(fā)室(6)和二效蒸發(fā)室(6’)中，直至放液結(jié)束，過(guò)程中每隔5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔20分鐘從取樣口取樣；第二階段，將二效蒸發(fā)室(6’)中的濃縮液抽入一效蒸發(fā)室(6)中，過(guò)程中每隔2.5分鐘在線采集近紅外光譜，每隔5分鐘從取樣口取樣；第三階段，濃縮液全部轉(zhuǎn)移至一效蒸發(fā)室(6)后，每隔30秒在線采集近紅外光譜，每隔2分鐘從取樣口取樣，直至藥液密度達(dá)到1.27^1.28g/ml，濃縮過(guò)程結(jié)束。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(a)中標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別稱取丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B對(duì)照品，使用甲醇-0.5%甲酸，v/v, 50:50的流動(dòng)相稀釋，制成單一成分對(duì)照品儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液等比稀釋，配成不同濃度的工作液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，以色譜峰面積Y對(duì)進(jìn)樣濃度X進(jìn)行線性回歸，測(cè)得丹參素、原兒茶醛、羥基紅花黃色素A、迷迭香酸和丹酚酸B 的線性范圍分別為 9.84~147.6，1.13~22.68，3.74~37.41，4.83~57.98,52.80~1056 μ g/mL,相關(guān)系數(shù)R值均大于0.9998。
4.根據(jù)權(quán)利I要求所述的一種丹紅注射液雙效濃縮過(guò)程在線檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(6)采用偏最小二乘回歸法建立各質(zhì)控指標(biāo)模型，全局模型為濃縮液樣本不按濃度分類(lèi)，全部用于建模，局部模型為使用主成分分析方法將濃縮液樣本按照濃度高低分成兩類(lèi)，按照類(lèi)別分別建立各質(zhì)控指標(biāo)的局部模型，當(dāng)全局模型性能不佳時(shí)，可使用局部模型以提高模型性能和預(yù)測(cè)能力。
【文檔編號(hào)】G01N21/359GK103913433SQ201410135322
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】金葉, 吳永江, 劉雪松, 蘇曉濤, 劉象銀, 陸世海, 劉林軍, 王臣臣 申請(qǐng)人:浙江大學(xué), 山東丹紅制藥有限公司