一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟：野黃芩苷含量測(cè)定；木犀草素含量測(cè)定：色譜柱：C18柱；以甲醇—0.1%磷酸水溶液體積比=40：60為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，流速為1.0ml/min，柱溫為35℃；理論板數(shù)按木犀草素峰計(jì)應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備；供試品溶液的制備；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每粒含雪蓮花以木犀草素計(jì)，不得少于0.05mg。本發(fā)明準(zhǔn)確度高、能有效且全面地控制制劑質(zhì)量。
【專利說明】—種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]含量測(cè)定作為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的關(guān)鍵內(nèi)容之一，對(duì)于有效成分制劑而言，可在很大程度上控制藥品質(zhì)量，但對(duì)于復(fù)方制劑，以及采用多種不同提取方式或多條提取路線的工藝和多個(gè)有效部位制成的新藥而言，僅建立某單一成分的含量測(cè)定帶有較大的片面性。雖然研究者越來(lái)越認(rèn)識(shí)到中藥新藥工藝過程的控制對(duì)于質(zhì)量控制的重要性，但是多數(shù)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍然不能全面反映制劑的過程控制結(jié)果，即難以全面控制中藥制劑的質(zhì)量。因此，在中藥研究的技術(shù)要求方面，有必要在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立多指標(biāo)含量測(cè)定，目的之一是實(shí)現(xiàn)對(duì)多數(shù)成分指標(biāo)的控制，并將對(duì)中藥制劑工藝過程的控制直接在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中得到體現(xiàn)，即在處方中含有多個(gè)明確有效成分，或?qū)μ幏街械乃幬?，在分別按不同路線提取等各種不同情況下，均有必要研究建立多個(gè)指標(biāo)的含量測(cè)定。欣力康制劑是一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑，為苗藥驗(yàn)方，其制法為:按處方量稱取半枝蓮501g、龍葵402g、蛇莓231g、輪環(huán)藤根200g、黃芪501g、紅參181g、雪蓮花501g、當(dāng)歸161g、郁金181g、丹參171g，丹參、雪蓮花加75%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，過濾，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.10?1.20的浸膏。醇提后的藥渣再分別加水煎煮兩次，分別提取2小時(shí)和I小時(shí)，過濾，合并濾液，濾液備用；其余8味，加水提取3次，分別提取2小時(shí)、1.5小時(shí)和I小時(shí)，過濾，合并濾液，與上述醇提后水提的濾液合并，減壓蒸發(fā)濃縮至相對(duì)密度為1.15?1.20的浸膏；加乙醇靜置，取上清液過濾，沉淀再加入乙醇靜置取上清液過濾，棄去沉淀，合并兩次濾液，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.10?1.20的浸膏，與上述醇提浸膏合并混勻后，取部分浸膏或全部浸膏噴霧干燥，得噴霧粉備用；未噴粉的浸膏與噴霧粉沸騰制粒，整粒過篩、混勻，制得用于癌癥放化療的輔助治療顆粒劑1000份；或沸騰制粒得到的顆粒粉碎且過篩，干燥，制得用于癌癥放化療的輔助治療膠囊1000份；或全部浸膏噴霧干燥所得噴粉經(jīng)干法制粒后過篩，干燥，制得用于癌癥放化療的輔助治療膠囊1000份。其含十味中藥，制備工藝復(fù)雜，僅建立半枝蓮中野黃芩苷的含量測(cè)定對(duì)其質(zhì)量控制有較大的片面性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述缺點(diǎn)而提供的一種準(zhǔn)確度高、能有效且全面地控制制劑質(zhì)量的用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明的一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括如下步驟: 一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟:
(I)野黃芩苷含量測(cè)定
照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。[0006]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
色譜柱:C18柱(5 m，4.6X 250mm);以甲醇一0.1%三氟乙酸水溶液(25:75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm，流速為1.0ml/min，柱溫為40°C。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于4000。
[0007]對(duì)照品溶液的制備
取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每Iml含野黃芩苷50 μ g的溶液，即得。
[0008]供試品溶液的制備
取裝量差異項(xiàng)下的本品粉末約0.5g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%甲醇定容，密塞，稱重，超聲(功率100W，頻率59HZ) 30分鐘，放冷，稱重，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0009]測(cè)定法
分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0010]本品每粒含半枝蓮以野黃岑苷(C21H18O12)計(jì),不得少于0.50mg。
[0011](2)木犀草素含量測(cè)定
照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。
[0012]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
色譜柱:C18柱(5 m，4.6X 250mm);以甲醇一0.1%磷酸水溶液(40:60)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm,流速為1.0ml/min,柱溫為35°C。理論板數(shù)按木犀草素峰計(jì)應(yīng)不低于5000。
[0013]對(duì)照品溶液的制備
取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每Iml含木犀草素20 μ g的溶液，即得。
[0014]供試品溶液的制備
取裝量差異項(xiàng)下的本品粉末約1.0g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，密塞，稱重，超聲(功率100W，頻率59HZ) 30分鐘，放冷，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0015]測(cè)定法
分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0016]本品每粒含雪蓮花以木犀草素(C15HltlO6)計(jì),不得少于0.05mg。
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯的有益效果，由以上技術(shù)方案可知:發(fā)明人試驗(yàn)采用了專屬性強(qiáng)、靈敏度高的高效液相色譜法測(cè)定用于癌癥放化療的輔助治療制劑中齊墩果酸、熊果酸和木犀草素的含量，但齊墩果酸、熊果酸的含量均低于萬(wàn)分之一，而木犀草素含量高于萬(wàn)分之一，且木犀草素與其他組分分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率都較好，故確定本發(fā)明的用于癌癥放化療的輔助治療制劑中木犀草素的含量。雪蓮花為方中臣藥，具有清熱解毒，消腫止痛的功效。其主要有效成分為木犀草素，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明該成分具多重藥理活性，故在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上增加了雪蓮花中木犀草素含量測(cè)定的指標(biāo)，以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。
【具體實(shí)施方式】[0018]以下通過具體實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步說明本發(fā)明方法的有益效果。
[0019]實(shí)驗(yàn)例:
1.1儀器、對(duì)照品、試劑和試藥
1.1.1儀器:島津LC-20AD型高效液相色譜儀，LC Solution工作站；超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；電子天平(十萬(wàn)分之一)AUW120D型(日本島津)。
[0020]1.1.2對(duì)照品:木犀草素對(duì)照品(批號(hào):111520-200504)含量測(cè)定用，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。
[0021]1.1.3試劑:磷酸為分析純，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。
[0022]1.1.4供試品:用于癌癥放化療的輔助治療膠囊樣品和陰性樣品為貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司提供。
[0023]1.2對(duì)照品溶液的制備
儲(chǔ)備液的制備:精密稱取木犀草素對(duì)照品12.38mg (批號(hào):111520-200504)
置50ml容量瓶中加甲醇溶解，制成每Iml含木犀草素247.60 μ g的溶液。
[0024]對(duì)照品溶液①:精密稱取對(duì)照品貯備液1ml，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含12.38 Ug的溶液。
[0025]對(duì)照品溶液②:精密稱取對(duì)照品貯備液5ml，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含24.760 Ug的溶液。
[0026]1.3 色譜條件試驗(yàn)色譜柱:Elite Hypersil C18 柱(5 μ m, 250nmX4.6nm)
1.3.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇:參照文獻(xiàn)中雪蓮花藥材木犀草素含量測(cè)定波長(zhǎng)為360nm，木犀草素對(duì)照品紫外掃描最大吸收波長(zhǎng)為348nm。擬定檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。
[0027]1.3.2供試品的制備:精密稱取樣品(121001)1.0g，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，用50%甲醇補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
[0028]1.3.3流動(dòng)相選擇:分別以甲醇-0.1%磷酸水溶液(47:53)，(40:60), (38:62)，(39:61)為流動(dòng)相對(duì)木犀草素對(duì)照品溶液與供試品溶液進(jìn)行含量測(cè)定。色譜圖顯示，在以甲醇-0.1%磷酸水(40:60)為流動(dòng)相的色譜條件下檢測(cè)，木犀草素峰對(duì)稱性較好，與其他峰之間分離度較好，柱效好，故以甲醇-0.1%磷酸水(40:60)為流動(dòng)相。
[0029]1.4專屬性試驗(yàn)
精密稱取樣品1.0g，置50ml容量瓶中，加50%甲醇定容，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取樣品溶液過微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取陰性樣品同法制成陰性樣品溶液。精密吸取木犀草素對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液和供試品溶液各10 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖。從色譜圖中可看出，供試品在與對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)的位置上出峰，且峰形好，而陰性樣品在相應(yīng)的位置上無(wú)峰，說明陰性樣品對(duì)樣品的測(cè)定無(wú)干擾。樣品在圖譜中的木犀草素的理論塔板數(shù)在5000以上，且與其他物質(zhì)的分離度大于1.5，峰形好，結(jié)合本試驗(yàn)的研究結(jié)果,規(guī)定本試驗(yàn)的理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。
[0030]1.5線性關(guān)系試驗(yàn)
自動(dòng)進(jìn)樣器分別精密吸取12.38 μ g/ml木犀草素對(duì)照品溶液2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、10 μ 1、12 μ 1、16 μ 1、20 μ I自動(dòng)進(jìn)樣，按10 μ I的濃度為12.38 μ g/ml計(jì)算，得進(jìn)樣量-面積關(guān)系，如下表:
【權(quán)利要求】
1.一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括以下步驟: (1)野黃芩苷含量測(cè)定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:C18柱；以甲醇一 0.1%三氟乙酸水溶液體積比=25:75為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm，流速為1.0ml/min，柱溫為40°C，理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于4000 ； 對(duì)照品溶液的制備 取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每1ml含野黃芩苷50 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品粉末約0.5g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%甲醇定容，密塞，稱重，功率100W、頻率59HZ超聲30分鐘，放冷，稱重，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本品每粒含半枝蓮以野黃岑苷計(jì)，不得少于0.5Omg ； (2)木犀草素含量測(cè)定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:C18柱；以甲醇一0.1%磷酸水溶液體積比=40:60為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm,流速為1.0ml/min,柱溫為35°C ;理論板數(shù)按木犀草素峰計(jì)應(yīng)不低于5000 ； 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱定，加適量甲醇超聲溶解，冷卻定容，制成每1ml含木犀草素20 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品粉末約1.0g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入50%甲醇定容，密塞，稱重，功率100W、頻率59HZ超聲30分鐘，放冷，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1Oy 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本品每粒含雪蓮花以木犀草素計(jì)，不得少于0.05mg。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于癌癥放化療的輔助治療制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中:C18 柱為 5m，4.6 X 250mm。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK103901138SQ201410144551
【公開日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】董大倫 申請(qǐng)人:貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司