一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法。該方法包括以下步驟：（1）稱取待測(cè)食品，配制成樣品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液進(jìn)行萃取，然后過濾，將濾液蒸干；（2）用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液對(duì)步驟（1）得到的蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取，然后過濾，濾液靜置；（3）取下層溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。本發(fā)明所建立的方法具有很高的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確性。
【專利說明】一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品檢測(cè)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]磷脂酰絲氨酸(簡(jiǎn)稱ps)是一種磷脂類物質(zhì)，對(duì)人的腦部神經(jīng)系統(tǒng)健康具有重要作用。目前，可以將PS作為食品原料添加到食品中服用，或者作為保健食品服用。當(dāng)PS作為保健食品服用時(shí)，由于純度高，含量高，使用一般的高效液相色譜法即可檢測(cè)，不需要復(fù)雜的前處理技術(shù)，而當(dāng)PS作為普通食品原料添加到食品中時(shí)，其添加量一般較少，在食品中受其他原料的干擾不易檢測(cè)，尤其是以蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉等物質(zhì)為主的食品中，由于蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉等物質(zhì)會(huì)對(duì)PS起到一定的包埋作用，使PS不易于從這些物質(zhì)中分離，從而影響PS的檢測(cè)。
[0003]由于ps的功效被人們廣泛認(rèn)可，越來越多的食品中添加了 ps，探索建立有效檢測(cè)食品中磷脂酰絲氨酸含量的新方法對(duì)于食品原料的監(jiān)測(cè)具有更加重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法。該方法利用特殊的分離提取技術(shù)使得磷脂酰絲氨酸幾乎可以全部從食品原料的干擾物質(zhì)中提取出來，方法的回收率高、重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單，為磷脂酰絲氨酸在食品中的規(guī)?；褂锰峁┝思夹g(shù)支持。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案:
[0006]一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法，該方法包括以下步驟:
[0007](I)稱取待測(cè)食品，配制成樣品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液進(jìn)行萃取，然后過濾，將濾液蒸干；
[0008](2)用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液對(duì)步驟(I)得到的蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取，然后過濾，濾液靜置分層；
[0009](3)取下層溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。
[0010]上述方法中，所述食品包括固態(tài)制品和液態(tài)制品。由于不同食品中磷脂酰絲氨酸的添加量差別較大，配制樣品水溶液時(shí)，為了檢測(cè)方便，優(yōu)選地控制樣品水溶液中磷脂酰絲氨酸的濃度為 0.lmg/mL-5mg/mL,更優(yōu)選為 0.lmg/mL-1.5mg/mL。
[0011]進(jìn)一步地，步驟(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷與甲醇的體積比為1-10，優(yōu)選為2.5-5。用三氯甲烷和甲醇的混合溶液對(duì)樣品水溶液進(jìn)行萃取時(shí)，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液與樣品水溶液的體積比至少大于10。此外，萃取的時(shí)間和溫度對(duì)于ps萃取率也有影響，通常在15°C _70°C條件下萃取15min-5h，優(yōu)選為在35°C _50°C條件下萃取30min_2h。
[0012]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，步驟(I)中將濾液蒸干采用的是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。[0013]進(jìn)一步地，步驟(2)中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法為:按照三氯甲烷與甲醇的體積比為1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液與水的體積比為1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液。用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液對(duì)蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取時(shí)，三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的用量只要可以將蒸干物質(zhì)充分溶解即可。
[0014]本發(fā)明通過兩步萃取有效地去除了食品中的干擾物質(zhì)，通過常規(guī)的高效液相色譜就可以完成食品中的磷脂酰絲氨酸的含量檢測(cè)。為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地實(shí)施本發(fā)明，在此提供一種優(yōu)選的高效液相色譜檢測(cè)方法，具體如下:
[0015]高效液相色譜的檢測(cè)條件為:采用LiChrospherelOOdiol色譜柱，流動(dòng)相由A相和B相組成，進(jìn)行梯度洗脫，流速1.5mL/min，柱溫25°C -30°C，用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，其中，所述A相為η-正己烷:2_丙醇:乙酸:三乙胺的體積比為820:170:10:0.8，B相為2-丙醇:純水:乙酸:三乙胺的體積比為850:140:10:0.8。
[0016]優(yōu)選的梯度洗脫條件為:0-23min，流動(dòng)相中A相的體積濃度從95%降至60%，B相的體積濃度從5%升至40% ；23-28min,流動(dòng)相中A相的體積濃度從60%降至0，B相的體積濃度從40%升至100% ；28-39min,流動(dòng)相中A相的體積濃度從O升至95%，B相的體積濃度從100%降至5% ;39-50min，流動(dòng)相中A相的體積濃度為95%，B相的體積濃度為5%。
[0017]根據(jù)上述檢測(cè)條件，對(duì)前處理后的樣品，即步驟(2)中獲得的下層溶液，進(jìn)行檢測(cè)。一般情況，檢測(cè)前還要使用三氯甲烷或甲醇定容，在高效液相色譜中獲取磷脂酰絲氨酸的峰面積，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線校正方程計(jì)算磷脂酰絲氨酸的濃度。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，從保護(hù)儀器并減少測(cè)試過程中干擾的角度出發(fā)，在對(duì)所述樣品的溶液進(jìn)行檢測(cè)之前優(yōu)選對(duì)該樣品溶液進(jìn)行過濾，從而除去該樣品溶液中的不溶物。所述過濾可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方法，優(yōu)選采用微孔濾膜對(duì)所述樣品的溶液進(jìn)行過濾。所述微孔濾膜的孔徑可以為0.1-0.45 μ m，優(yōu)選為0.2 μ m。
[0019]本發(fā)明的有益效果如下:
[0020]基于本發(fā)明的檢測(cè)方法，磷脂酰絲氨酸的濃度在1.08-127.9 μ g/μ L范圍內(nèi)線性良好，可以穩(wěn)定分析Ps的含量。并且方法線性范圍較寬，適合于不同ps添加量的食品的分析；方法檢出限為0.54 μ g/ μ L，方法定量限為1.8 μ g/ μ L。本發(fā)明的方法檢出限低，靈敏度高、可以檢測(cè)添加了微量ps的食品；方法平均回收率為在97.0%-101.0%之間，方法準(zhǔn)確度高。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021 ] 圖1磷脂酰絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。
[0022]圖2實(shí)施例2中樣品檢測(cè)的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024]實(shí)施例1[0025]將ps標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為50mg/100mL，即0.5 μ g/ μ L，按照色譜檢測(cè)條件分別進(jìn)樣 IOyL (ps 含量 5yg)、30yL (ps 含量 15yg)、50yL (ps 含量 25 μ g)、80 μ L (ps 含量40 μ g)，以ps含量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得的直線回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 y=4132.3x-2956.2，R2=0.9919。
[0026]HPLC分析條件:
[0027]磷脂酰絲氨酸(ps)標(biāo)準(zhǔn)樣品:sigma公司，產(chǎn)品名稱:L-A-PHOSPHATIDYL_SERINEFROM SOYBEAN
[0028]儀器:ShimatzuHPLCIOVP series
[0029]柱型號(hào):LiChrosphere100diol(Merck):4mm (內(nèi)徑)Xl25mm (柱長(zhǎng))(Merck),粒徑:5 μ m
[0030]預(yù)柱:LiChrosphere diol pre cartridge
[0031]柱溫:35°C
[0032]檢測(cè)器參數(shù):ELSD2000，ALLTECH,U.S.A
[0033]Drift tube 100°C
[0034]Nebulizer gas flow rate:2.0SLPM
[0035]流速:1.5mL/min
[0036]梯度洗脫條件:
[0037]
【權(quán)利要求】
1.一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)稱取待測(cè)食品，配制成樣品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液進(jìn)行萃取，然后過濾，將濾液蒸干； (2)用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液對(duì)步驟(I)得到的蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取，然后過濾，濾液靜置分層； (3)取下層溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷與甲醇的體積比為1-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢查方法，其特征在于，步驟(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷與甲醇的體積比為2.5-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液與樣品水溶液的體積比大于10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法為:按照三氯甲烷與甲醇的體積比為1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液與水的體積比為1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中，所述萃取是在15°C _70°C條件下萃取 15min-5h。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中，所述萃取是在350C -50°C條件下萃取 30min-2h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中，高效液相色譜的檢測(cè)條件為:采用LiChrospherelOOdiol色譜柱,流動(dòng)相由A相和B相組成,進(jìn)行梯度洗脫,用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，其中，所述A相為η-正己烷:2_丙醇:乙酸:三乙胺，體積比為820:170:10:0.8，B相為2_丙醇:純水:乙酸:三乙胺，體積比為850:140:10:0.8。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述梯度洗脫的條件為:0-23min，流動(dòng)相中A相的體積濃度從95%降至60%, B相的體積濃度從5%升至40% ;23_28min,流動(dòng)相中A相的體積濃度從60%降至0，B相的體積濃度從40%升至100% ；28-39min,流動(dòng)相中A相的體積濃度從O升至95%, B相的體積濃度從100%降至5% ;39-50min,流動(dòng)相中A相的體積濃度為95%，B相的體積濃度為5%。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103884813SQ201410145181
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】石丹, 王曉彥, 劉彪 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司