一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，包括如下步驟：(1)樣品的預(yù)處理：樣品用體積比為2:1的2％甲酸溶液和乙腈作為溶劑渦旋振蕩、超聲提取，提取液經(jīng)離心處理及Waters?Oasis?MCX混合型固相萃取小柱凈化后得到凈化液；(2)將所述凈化液上機(jī)測(cè)定，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜的方法對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析。本發(fā)明化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、可靠且靈敏度高。
【專利說(shuō)明】一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種抗生素的測(cè)定方法，特別是涉及一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]氟喹諾酮類抗生素，又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類，是人工合成的含4-喹諾酮母核的抗菌藥物，屬于抗生素中的一大類。自1962年美國(guó)發(fā)現(xiàn)第一種氟喹諾酮藥物萘啶酸(抗菌譜窄，已棄之不用)以來(lái)，發(fā)展歷程大致可分為四個(gè)階段，至今數(shù)以萬(wàn)計(jì)的氟喹諾酮類衍生物已被合成。由于其抗菌譜廣、給藥方便、活性強(qiáng)且價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛用于治療各種感染性疾病。在祛痘化妝品中添加該類藥物，可明顯改善祛痘效果，但其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸道可造成不良反應(yīng)，而且痤瘡內(nèi)的細(xì)菌一旦對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，會(huì)造成嚴(yán)重后果。我國(guó)化妝品衛(wèi)生規(guī)范及歐盟化妝品法規(guī)(EC1223/2009)等均規(guī)定，在化妝品中禁止添加氟喹諾酮類抗菌藥物。因此，建立化妝品中該類抗生素的分析檢測(cè)方法顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、可靠且靈敏度高的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法。
[0004]一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，包括如下步驟:
[0005](I)樣品的預(yù)處理:樣品用體積比為2:1的2%甲酸溶液和乙腈作為溶劑渦旋振蕩、超聲提取，提取液經(jīng)離心處理及Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱凈化后得到凈化液；
[0006](2)將所述凈化液上機(jī)測(cè)定，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜的方法對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析；
[0007]其中液相色譜條件為:采用Waters XBridge C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm的色譜柱分離，以0.1 %甲酸水溶液和含0.1 %甲酸的甲醇溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，柱溫:35°C ；流速:0.2mL/min ;進(jìn)樣量:5 μ L ；
[0008]質(zhì)譜條件為:電離方式:ESI+ ;毛細(xì)管電壓:3.0OkV ;脫溶劑氣溫度:400°C ;脫溶劑氣流速:800L/hr ;錐孔氣流速:50L/hr ;離子源溫度:150°C ;萃取電壓:3.0OV ;射頻透鏡電壓:0.1OV ;碰撞氣體:氬氣；數(shù)據(jù)采集模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。
[0009]本發(fā)明所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其中所述方法能對(duì)化妝品中16種氟喹諾酮類抗生素進(jìn)行測(cè)定，所述16種氟喹諾酮類抗生素為:麻保沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、單諾沙星、洛美沙星、帕珠沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、加替沙星、司帕沙星和莫西沙星。
[0010]本發(fā)明所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其中步驟(2)中流動(dòng)相采用如表I所示的梯度洗脫程序，其中A為含0.1%甲酸的甲醇溶液，B為0.1%甲酸水溶液。
[0011]表I液相色譜梯度洗脫程序
【權(quán)利要求】
1.一種化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)樣品的預(yù)處理:樣品用體積比為2:1的2%甲酸溶液和乙腈作為溶劑渦旋振蕩、超聲提取，提取液經(jīng)離心處理及Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱凈化后得到凈化液； (2)將所述凈化液上機(jī)測(cè)定，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜的方法對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析； 其中液相色譜條件為:采用Waters XBridge C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm的色譜柱分離，以0.1 %甲酸水溶液和含0.1 %甲酸的甲醇溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，柱溫:35°C ;流速:0.2mL/min ;進(jìn)樣量:5 μ L ； 質(zhì)譜條件為:電離方式=ESI+ ;毛細(xì)管電壓:3.0OkV ;脫溶劑氣溫度:400°C ;脫溶劑氣流速:800L/hr ;錐孔氣流速:50L/hr ;離子源溫度:150°C ;萃取電壓:3.0OV ;射頻透鏡電壓:0.1OV ;碰撞氣體:氬氣；數(shù)據(jù)采集模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:所述方法能對(duì)化妝品中16種氟喹諾酮類抗生素進(jìn)行測(cè)定，所述16種氟喹諾酮類抗生素為:麻保沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、單諾沙星、洛美沙星、帕珠沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、加替沙星、司帕沙星和莫西沙星。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:步驟(2)中流動(dòng)相采用如表1所示的梯度洗脫程序，其中A為含0.1%甲酸的甲醇溶液，B為0.1%甲酸水溶液。 表1液相色譜梯度洗脫程序
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:步驟(2)中16種氟喹諾酮類抗生素化合物的質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)見表2。 表216種氟喹諾酮類化合物的分子式及質(zhì)譜采集參數(shù)
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:所述Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱的規(guī)格為3mL,含60mg填料,使用前采用3mL甲醇活化和3mL水平衡。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:步驟(I)具體包括如下步驟: 分別稱取水劑、膏霜類化妝品試樣各0.5g于兩支25mL比色管中，分別加入體積比為2:1的2%甲酸水溶液和乙腈的混合溶液至IOmL刻度，渦旋振蕩30s，然后在超聲波清洗儀中超聲提取30min，取出，靜置至室溫，將上清液全部轉(zhuǎn)移至聚丙烯離心管中，在離心機(jī)上以5000r/min高速離心10min后，取2mL上清液至IOmL氮吹管中，氮吹至近干，加入2mL0.1%甲酸水溶液重新溶解殘?jiān)纬蓮?fù)溶液，所述復(fù)溶液過(guò)預(yù)先用3mL甲醇活化和3mL水平衡的Waters Oasis MCX, 3cc, 60mg混合型固相萃取小柱； 先依次加入3mL2%甲酸水溶液和3mL甲醇分別淋洗,棄去淋洗液,再先后兩次用ImL體積比為20:80的氨水和甲醇的混合溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫流速控制在I~2mL/min，合并兩次所得洗脫液至同一 IOmL氮吹管中，將合并后的洗脫液氮吹至近干，殘?jiān)肐mL的體積比為25:75的含0.1%甲酸的甲醇溶液和0.1 %甲酸水溶液的混合溶液復(fù)溶，復(fù)溶后的溶液過(guò)0.22 μ m微孔濾膜后得到凈化液，所述凈化液供上機(jī)測(cè)定。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化妝品中氟喹諾酮類抗生素的測(cè)定方法，其特征在于:所述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，包括如下步驟: 準(zhǔn)確稱取16種氟喹諾酮類抗生素標(biāo)準(zhǔn)品各25mg，精確至0.0OOlg,分別置于50mL容量瓶中，麻保沙星、雙氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、莫西沙星、沙拉沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、加替沙星、氧氟沙星、單諾沙星及氟羅沙星均用含I %甲酸的40%乙腈水溶液溶解，洛美沙星及司帕沙星用甲醇溶解，帕珠沙星用體積比為90:10的甲醇-氨水混合溶液溶解，分別用對(duì)應(yīng)溶液溶解并定容至50mL刻度，分別得到濃度為500 μ g/mL的16種氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；分別量取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液ImL置于同一 50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，得到每種氟喹諾酮類抗生素的質(zhì)量濃度均為10 μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，然后用體積比為25:75的含0.1 %甲酸的甲醇溶液和0.1 %甲酸水溶液的混合溶液將其稀釋成濃度分別為 0.1 μ g/L、0.2 μ g/L、0.5 μ g/L、I μ g/L、2 μ g/L、5 μ g/L、10 μ g/L、20 μ g/L、.50 μ g/L、100 μ g/L、200 μ g/L、500 μ g/L、I μ g/mL、2 μ g/mL、5 μ g/mL 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103969383SQ201410181477
【公開日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】馬強(qiáng), 孟憲雙, 白樺, 張慶, 陳云霞, 李晶瑞, 馬會(huì)娟, 王元成 申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院