一種生脈注射液中麥冬皂苷d和麥冬皂苷d′的檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D′的檢測(cè)方法，該方法包括前處理步驟：將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。缓喜⒂袡C(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，能很好的分離麥冬皂苷D和麥冬皂苷D′的色譜峰以及相鄰色譜峰，能更準(zhǔn)確的測(cè)定麥冬皂苷D和麥冬皂苷D′的含量，提高了生脈注射液的有效性和可控性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥有效成分的測(cè)定方法，尤其涉及生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D,含量的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生脈注射液為淡黃色至淡黃棕色的澄明液體，其主要功能為:益氣養(yǎng)陰，復(fù)脈固脫。生脈注射液用于氣陰兩虧，脈虛欲脫的心悸、氣短、四肢厥冷、汗出、脈欲絕及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等具有上述證候者。生脈注射液靜注射能迅速全面地改善失血休克動(dòng)物的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，促進(jìn)休克狀態(tài)好轉(zhuǎn)，其作用強(qiáng)度明顯強(qiáng)于補(bǔ)充生理鹽水組，與甘露醇組無(wú)顯著差異，但在抗休克作用維持時(shí)間上又明顯長(zhǎng)于甘露醇組；其抗休克作用有一定的量效相關(guān)性。生脈注射液足量靜脈注射能顯著延緩中毒性休克動(dòng)物的血壓下降，對(duì)內(nèi)毒素攻擊后的動(dòng)物死亡也有明顯延緩作用。生脈注射液能明顯降低痢疾桿菌感染所致動(dòng)物的死亡率。
[0003]麥冬具有滋陰生津，潤(rùn)肺清心等功效，是臨床上治療心血管疾病的重要組成藥物，麥冬的主要成分為留體皂苷、多糖和高異黃酮類(lèi)化合物。麥冬總皂苷主要含麥冬皂苷A、B、C、D及麥冬皂苷B'、C'、D'，其中麥冬皂苷A、B、C、D苷元為魯斯考皂苷元，麥冬皂苷B'、C'、D'苷元為薯蕷皂苷元。藥理研究表明:麥冬總皂苷具有抗心肌缺血損傷和抗心率失常作用。在川麥冬中總皂苷主要含麥冬皂苷D，麥冬皂苷D主要藥理作用有:顯著抑制靜脈血栓的模型大鼠早期外周血中性粒細(xì)胞活化和粘附，減輕血栓重量，降低血清sICAM-1含量，降低炎癥反應(yīng)，抑制血栓形成，穩(wěn)定線(xiàn)粒體膜電位，減少鈣離子流失，增加細(xì)胞活力，對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)有一定的保護(hù)作用。
[0004]麥冬作為生脈注射液主要藥物之一，如何對(duì)麥冬阜苷D和D'進(jìn)行定量檢測(cè),進(jìn)一步提高生脈注射液的有效性與可控性，是很多藥學(xué)工作者一直希望解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為此，本發(fā)明提出了一種能夠解決上述問(wèn)題或者部分解決上述問(wèn)題的生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di的檢測(cè)方法。
[0006]根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了一種生脈注射液中麥冬阜苷D和麥冬阜苷D'的檢測(cè)方法，該方法包括前處理步驟:
[0007]將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。?br> [0008]合并有機(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；
[0009]將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。
[0010]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中所述有機(jī)溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
[0011]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中所述正丁醇為水飽和正丁醇。
[0012]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中，在萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:1?1:4。[0013]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中，在萃取時(shí)萃取次數(shù)為2?5次。
[0014]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，該方法進(jìn)一步包括固相萃取步驟:
[0015]將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；
[0016]上樣后用水沖洗,然后用45-65%的甲醇或乙腈水溶液沖洗；
[0017]收集甲醇或乙腈的水溶液，蒸干得到固體；
[0018]將固體用甲醇或乙腈轉(zhuǎn)移定容。
[0019]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中，上樣和洗脫流速小于等于1.0ml/min。
[0020]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中，上樣后用10-30毫升水進(jìn)行沖洗，用25-45毫升甲醇或乙腈水溶液沖洗。
[0021]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，該方法進(jìn)一步包括高效液相檢測(cè)步驟:
[0022]將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為45:55?55:45。
[0023]可選地，根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，其中高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，在生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D，的色譜峰與相鄰色譜峰能夠得到很好的分離，麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的含量能夠更準(zhǔn)確的測(cè)定，提高了生脈注射液的有效性和可控性。本發(fā)明技術(shù)方案還具有:準(zhǔn)備工作簡(jiǎn)單、使用設(shè)備較少、成本低廉，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性高、精密度強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
[0025]經(jīng)本發(fā)明方法測(cè)定過(guò)麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'含量的生脈注射液可以保證在臨床醫(yī)學(xué)上的量化使用，醫(yī)生可以準(zhǔn)確把握對(duì)患者使用生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的量，并對(duì)不同患者調(diào)整生脈注射液的用量。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026]通過(guò)閱讀下文優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述，各種其它優(yōu)點(diǎn)和益處對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將變得清楚明了。附圖僅用于示出優(yōu)選實(shí)施方式的目的，而并不認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的限制。而且在整個(gè)附圖中，用相同的參考符號(hào)表示相同的部件。其中在附圖中，參考數(shù)字之后的字母標(biāo)記指示多個(gè)相同的部件，當(dāng)泛指這些部件時(shí)，將省略其最后的字母標(biāo)記。在附圖中:
[0027]圖1示出了根據(jù)本發(fā)明一種實(shí)施方式的檢測(cè)方法流程圖；
[0028]圖2示出了麥冬皂苷D和麥冬皂苷IV對(duì)照品HPLC色譜圖；
[0029]圖3示出了生脈注射液濃縮后直接進(jìn)樣的HPLC色譜圖；
[0030]圖4示出了生脈注射液用水飽和正丁醇萃取濃縮后HPLC色譜圖；
[0031]圖5示出了不含麥冬的樣品(陰性)用水飽和正丁醇萃取濃縮后HPLC色譜圖；
[0032]圖6示出了不含麥冬的樣品(陰性)的HPLC色譜圖
[0033]圖7示出了生脈注射液HPLC色譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0034]本發(fā)明提供了許多可應(yīng)用的創(chuàng)造性概念，該創(chuàng)造性概念可大量的體現(xiàn)于具體的上下文中。在下述本發(fā)明的實(shí)施方式中描述的具體的實(shí)施例僅作為本發(fā)明的具體實(shí)現(xiàn)方式的示例性說(shuō)明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
[0035]本發(fā)明提供了一種生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di的檢測(cè)方法，首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃??；合并有機(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑優(yōu)選正丁醇或乙酸乙酯；正丁醇進(jìn)一步優(yōu)選水飽和正丁醇，萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比優(yōu)選1:1?1: 4，更進(jìn)一步地優(yōu)選1: 2，萃取次數(shù)優(yōu)選2?5次，更進(jìn)一步地優(yōu)選4次。其中所述水飽和正丁醇是通過(guò)將正丁醇和蒸餾水混合(混合比例為1:1)，振搖混勻后放置過(guò)夜或超聲處理lOmin，得到的混合液進(jìn)行分層后，上層為水飽和的正丁醇溶液，用于藥物有效成分提取時(shí)增加了正丁醇的溶解度，適用于深度萃取。
[0036]在前處理步驟結(jié)束后進(jìn)入固相萃取步驟S1200:將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；上樣后用水沖洗,然后用45-65%的甲醇或乙腈水溶液沖洗；收集甲醇或乙腈的水溶液，蒸干得到固體；將固體用甲醇或乙腈轉(zhuǎn)移定容。其中在上樣和洗脫時(shí)其流速小于等于1.0ml/min,優(yōu)選0.5ml/min ;上樣后優(yōu)選用10-30毫升水進(jìn)行沖洗,進(jìn)一步優(yōu)選用20毫升水沖洗；上樣后用25-45毫升甲醇或乙腈水溶液沖洗；其中ODS柱是一種常用的反相色譜柱，也叫C18柱，由于他有較高的碳含量和更好的疏水性，對(duì)各種類(lèi)型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，因此在生物化學(xué)分析工作中應(yīng)用的最為廣泛。
[0037]最后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為55:45?45:55，優(yōu)選52:48 ;高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0038]在通常的高效液相分析中，麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'不易得到分離度好的色譜圖，不能準(zhǔn)確測(cè)定其含量。采用本發(fā)明的方法使大部分干擾測(cè)定的物質(zhì)被有效除去，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性。
[0039]根據(jù)本發(fā)明檢測(cè)方法涉及的工藝參數(shù)眾多，因此根據(jù)本發(fā)明的權(quán)利要求可以設(shè)計(jì)出不同的實(shí)施例來(lái)檢測(cè)麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di。具體的實(shí)施例僅作為對(duì)本發(fā)明具體實(shí)現(xiàn)方式的示例性說(shuō)明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。下面將以本發(fā)明提供的冬皂苷D和麥冬皂苷Di的檢測(cè)方法為實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。
[0040]實(shí)施例1
[0041]根據(jù)本發(fā)明的生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di的檢測(cè)方法，首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。缓喜⒂袡C(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑為正丁醇，萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:1，萃取次數(shù)為2次。之后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為45:55，高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0042]實(shí)施例2
[0043]根據(jù)圖1不出的本發(fā)明一種實(shí)施方式的生脈注射液中麥冬阜苷D和麥冬阜苷D'的檢測(cè)方法，首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。缓喜⒂袡C(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:4，萃取次數(shù)為5次。在前處理步驟結(jié)束后進(jìn)入固相萃取步驟S1200:將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；上樣后用水沖洗，然后用45%的甲醇水溶液沖洗；收集甲醇的水溶液，蒸干得到固體；將固體用甲醇轉(zhuǎn)移定容。其中在上樣和洗脫時(shí)其流速為1.0ml/min;上樣后用IO毫升水進(jìn)行沖洗，用45%的甲醇溶液25毫升。最后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為55:45 ;高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0044]實(shí)施例3
[0045]本發(fā)明提供了一種生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的檢測(cè)方法，首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。缓喜⒂袡C(jī)相，將有機(jī)相蒸干；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑為水飽和正丁醇，萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:2，萃取次數(shù)為4次。其中所述水飽和正丁醇是通過(guò)將正丁醇和蒸餾水混合(混合比例為1:1)，振搖混勻后放置過(guò)夜或超聲處理lOmin，得到的混合液進(jìn)行分層后，上層為水飽和的正丁醇溶液，用于藥物有效成分提取時(shí)增加了正丁醇的溶解度，適用于深度萃取。在前處理步驟結(jié)束后進(jìn)入固相萃取步驟S1200:將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；上樣后用水沖洗,然后用60%的乙腈水溶液沖洗；收集乙腈的水溶液，蒸干得到固體；將固體用水溶解，乙腈轉(zhuǎn)移定容。其中在上樣和洗脫時(shí)其流速為0.5ml/min ;上樣后用20毫升水進(jìn)行沖洗，用45毫升60%的乙腈水溶液進(jìn)行沖洗。最后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為50:50 ;高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0046]實(shí)施例4
[0047]本發(fā)明提供了一種生脈注射液中麥冬阜苷D和麥冬阜苷D'的檢測(cè)方法,首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃?。缓喜⒂袡C(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑為水飽和正丁醇，萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:3，萃取次數(shù)為3次。其中所述水飽和正丁醇是通過(guò)將正丁醇和蒸餾水混合(混合比例為1:1)，振搖混勻后放置過(guò)夜或超聲處理lOmin，得到的混合液進(jìn)行分層后，上層為水飽和的正丁醇溶液，用于藥物有效成分提取時(shí)增加了正丁醇的溶解度，適用于深度萃取。在前處理步驟結(jié)束后進(jìn)入固相萃取步驟S1200:將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；上樣后用水沖洗，然后用50%的乙腈水溶液沖洗；收集乙腈的水溶液，蒸干得到固體；將固體用乙腈轉(zhuǎn)移定容。其中在上樣和洗脫時(shí)其流速為0.8ml/min ;上樣后用25毫升水進(jìn)行沖洗。最后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為52:48 ;高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0048]實(shí)施例5
[0049]本發(fā)明提供了一種生脈注射液中麥冬阜苷D和麥冬阜苷D'的檢測(cè)方法,首先進(jìn)入前處理步驟SllOO:將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取；合并有機(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體；將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。其中有機(jī)溶劑為水飽和正丁醇，萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為1:3，萃取次數(shù)為5次。其中所述水飽和正丁醇是通過(guò)將正丁醇和蒸餾水混合(混合比例為1:1)，振搖混勻后放置過(guò)夜或超聲處理lOmin，得到的混合液進(jìn)行分層后，上層為水飽和的正丁醇溶液，用于藥物有效成分提取時(shí)增加了正丁醇的溶解度，適用于深度萃取。在前處理步驟結(jié)束后進(jìn)入固相萃取步驟S1200:將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱；上樣后用水沖洗，然后用50%的甲醇水溶液沖洗；收集甲醇的水溶液，蒸干得到固體；將固體用甲醇轉(zhuǎn)移定容。其中在上樣和洗脫時(shí)其流速為0.5ml/min ;上樣后用28毫升水進(jìn)行沖洗,用40毫升50%的甲醇水溶液沖洗。最后進(jìn)入高效液相檢測(cè)步驟S1300:將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為50:50 ;高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
[0050]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1-5,在生脈注射液中麥冬阜苷D和麥冬阜苷D'的色譜峰與相鄰色譜峰能得到很好的分離，麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的含量能夠更準(zhǔn)確的測(cè)定，提高了生脈注射液的有效性和可控性。本發(fā)明技術(shù)方案還具有:準(zhǔn)備工作簡(jiǎn)單、使用設(shè)備較少、成本低廉，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性高、精密度強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)本發(fā)明方法測(cè)定過(guò)麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'含量的生脈注射液可以保證在臨床醫(yī)學(xué)上的量化使用，醫(yī)生可以準(zhǔn)確把握對(duì)患者使用生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'的量，并對(duì)不同患者調(diào)整生脈注射液的用量。
[0051] 申請(qǐng)人:對(duì)本發(fā)明方法的效果和可行性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究和論證。
[0052]1.為驗(yàn)證本發(fā)明檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性，結(jié)合供試品溶液最佳的測(cè)定方法對(duì)測(cè)試方法和效果進(jìn)行如下描述:
[0053]1.1試劑、儀器和藥品
[0054]Agilentl260型高效液相色譜儀；配置四元泵；自動(dòng)進(jìn)樣器；檢測(cè)器(AltechELSD2000ES);柱溫箱；生脈注射液(大理藥業(yè)股份有限公司提供)；麥冬皂苷D對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司提供，批號(hào):SM0521KA13，純度98.2% );麥冬皂苷IV對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司提供，批號(hào):WJ0719KB13，純度99.4% ) ；0DS小柱(VARIAN，BONDELUT C18);甲醇(分析純，天津化學(xué)試劑二廠)；乙腈(色譜純，F(xiàn)isher公司)；注射用水。
[0055]1.2色譜條件
[0056]Ultimate XB-C18 色譜柱(4.6mmX250mm ;5_Micron);柱溫 30 °C,流速 1.0ml/11^11，進(jìn)樣量2(^1 ;檢測(cè)器:檢測(cè)器(Altech ELSD2000ES)，氣體流量2.5L/min，漂逸管溫度(900C );流動(dòng)相，水:乙腈50:50。
[0057]1.3對(duì)照品溶液的制備
[0058]分別精密稱(chēng)取麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成濃度為麥冬皂苷D19.8 μ g/ml，麥冬皂苷D' 20.2 μ g/ml對(duì)照品溶液。
[0059]I.4本發(fā)明供試品溶液的制備
[0060]精密量取生脈注射液16ml置于分液漏斗中，加水飽和正丁醇萃取4次，每次32ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，得到的固體加水溶解，上處理好的ODS小柱，控制上樣和洗脫過(guò)程流速為0.5ml/分鐘，先用20ml水沖洗，再用50%甲醇水溶液30ml沖洗，收集50%甲醇水溶液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至Iml容量瓶，定容至刻度，搖勻即得。
[0061]1.5對(duì)比供試品溶液的制備
[0062](I)精密量取生脈注射液16ml，水浴蒸干，固體用甲醇轉(zhuǎn)移至Iml容量瓶，定容至刻度，搖勻即得。
[0063](2)精密量取生脈注射液16ml置于分液漏斗中，加水飽和正丁醇萃取4次，每次32ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至Iml容量瓶，定容至刻度，搖勻即得。
[0064]1.6測(cè)定法[0065]分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μ 1、20 μ I與供試品20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0066]1.7 結(jié)果
[0067]見(jiàn)表1和2，生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷D'含量測(cè)定峰面積、分離度及對(duì)稱(chēng)因子。
[0068]表1生脈注射液中麥冬皂苷D含量測(cè)定峰面積、分離度及對(duì)稱(chēng)因子
[0069]
【權(quán)利要求】
1.一種生脈注射液中麥冬皂苷D和麥冬皂苷Di的檢測(cè)方法，該方法包括前處理步驟(SllOO): 將生脈注射液用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃??； 合并有機(jī)相，將有機(jī)相蒸干得到固體； 將蒸干后的固體加少量水至固體完全溶解為止。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中，所述有機(jī)溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中，所述正丁醇為水飽和正丁醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中，在萃取時(shí)，生脈注射液與有機(jī)溶劑的體積比為 1:1 ?1:4。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其中，在萃取時(shí)萃取次數(shù)為2?5次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，該方法進(jìn)一步包括固相萃取步驟(S1200): 將蒸干后的固體加水完全溶解后的液體，上處理好的ODS柱； 上樣后用水沖洗，然后用45-65%的甲醇或乙腈水溶液沖洗； 收集甲醇或乙腈的水溶液，蒸干得到固體； 將固體用甲醇或乙腈轉(zhuǎn)移定容。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其中，上樣和洗脫流速小于等于l.0ml/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其中，上樣后用10-30毫升水進(jìn)行沖洗，用25-45毫升甲醇或乙腈水溶液沖洗。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，該方法進(jìn)一步包括高效液相檢測(cè)步驟(S1300):將定容溶液在高效液相色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為水:乙腈，比例為45:55-55:45。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)方法，其中高效液相檢測(cè)時(shí)的色譜柱為反相柱，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。
【文檔編號(hào)】G01N30/89GK103926365SQ201410181650
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】黃照昌 申請(qǐng)人:大理藥業(yè)股份有限公司