一種毛蚶多糖的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于使用凝膠色譜柱高效液相色譜法，提供一種毛蚶多糖的專屬性鑒別方法，使毛蚶制劑在生產(chǎn)和使用中有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量，進而保證藥品療效。
【專利說明】一種毛蚶多糖的鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥品檢測方法，具體涉及一種毛蚶多糖的鑒別方法，屬藥品【技術(shù)領(lǐng)域】。【背景技術(shù)】
[0002]毛蚶肉含豐富的蛋白質(zhì)、維生素及人體所必需的氨基酸，自古就有著食用、藥用價值，《醫(yī)林纂要》注“蚶肉補心血、散瘀血、除煩醒酒、破結(jié)消痰”，《日華子本草》注“蚶肉益血色”。近年來，研究報道顯示毛蚶有抗腫瘤作用，具有清除體內(nèi)自由基、提高機體免疫力的功效。毛蚶肉制劑對肺癌、腎癌、胃癌、肝癌等多種癌癥具有較好的治療作用，且安全性良好。
[0003]根據(jù)文獻報道毛蚶多糖是毛蚶的主要生物活性成分之一，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫的功效?，F(xiàn)有文獻動植物多糖的含量測定方法較多，但對動植物多糖的專屬性報道很少，更未見對毛蚶多糖專屬性鑒別方法的研究報道。無法在生產(chǎn)和使用中有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量，進而藥品療效得不到保證。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種毛蚶多糖的專屬性鑒別方法，使毛蚶制劑在生產(chǎn)和使用中有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量，進而保證藥品療效。
[0005]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:
一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于使用凝膠色譜柱高效液相色譜法，具體步驟如
下:
色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性:用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫:30°C -45 °C ;流速:0.5ml-l ml /min ;理論板數(shù)按葡萄糖峰計算應(yīng)不低于3000 ；
制備毛蚶多糖:取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約0.5-5g的樣品，加10-20倍的石油醚:乙醇=1:0.5-2的溶液，于30°C _50°C水浴保溫l_3hr，超聲提取15_45min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水10-30ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.5?8.5，70°C _90°C水浴0.5-4hr,時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水5-50ml，繼續(xù)水浴攪拌0.5_2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水5-50ml，70°C _90°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。
[0006]制備毛蚶多糖供試品溶液:取毛蚶多糖，加流動相使溶解，制成每Iml含2_25mg的溶液，即得。
[0007]測定:取毛蚶多糖供試品溶液10-100μ 1，注入液相色譜儀，測定；
多糖圖毛蚶譜中呈現(xiàn)2個特征峰，以圖譜中的S峰為參照，計算2特征峰與S峰的相對保留時間:峰I為0.56±10%、峰2為0.68±10%、峰S為I。[0008]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，優(yōu)化為色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性:用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.lmol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫:400C ;流速:0.5ml /min ;理論板數(shù)按葡萄糖峰計算應(yīng)不低于5000 ；
上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，制備毛蚶多糖優(yōu)化為:
取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約l_3g的樣品，加15倍的石油醚:乙醇=1:1-1.5的溶液，于35°C _45°C水浴保溫2-3hr，超聲提取20_40min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水15-25ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7?8，80°C水浴l_3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存,濾渣加去離子水10-40ml，繼續(xù)水浴l-2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加2_3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水15-25ml，80°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。
[0009]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，制備毛蚶多糖進一步優(yōu)化為:取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約2g的樣品，加15倍的石油醚:乙醇=1:1的溶液，于40°C水浴保溫3hr,超聲提取30min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水20ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5?8，80°C水浴3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水20ml，繼續(xù)水浴2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心,沉淀加去離子水20ml，80°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。
[0010]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，制備毛蚶多糖供試品溶液優(yōu)化為:取毛蚶多糖，加流動相使溶解，制成每Irnl含IOmg的溶液，即得。
[0011]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，測定優(yōu)化為取毛蚶多糖供試品溶液10-50μ 1，注入液相色譜儀，測定。
[0012]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，測定進一步優(yōu)化為取毛蚶多糖供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定。
[0013]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，可用于毛蚶提取物各種制劑的鑒別。
[0014]上述的一種毛蚶多糖的鑒別方法，可用于魁蚶、泥蚶、花蛤、扇貝提取物及其各種制劑的鑒別。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于:提供一種毛蚶多糖的鑒別方法，能準確的鑒別毛蚶近源物種魁蚶、泥蚶、扇貝、花蛤等來源的多糖。
[0016]下面通過試驗例，進一步說明本發(fā)明的有益效果。
[0017]主要儀器與試藥
Agilent 1100高效液相色譜儀,示差折光檢測器,GPC軟件(Agilent -Addon);色譜柱:TSK GEL G4000 PffXL (7.8mmX300mm);流動相:0.lmol/L 的硫酸鈉溶液，柱溫:35°C，流速0.5?0.7ml/min。理論板數(shù)按葡萄糖峰計算為5500 ；
2試驗方法及結(jié)果
2.1方法分別制備毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物膠囊、毛蚶提取物片劑、毛蚶提取物丸劑、毛蚶提取物顆粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇貝肉多糖。
[0018]分別取干毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇貝肉，粉碎，過60目篩，加8倍量的水，加熱提取2次，每次45分鐘，合并提取液，過濾，取濾液，濃縮至相對密度為1.10?1.15 (60°C)時，80°C以下，減壓干燥，粉碎，分別制得毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇貝提取物。
[0019]分別取毛蚶提取物膠囊內(nèi)容物、毛蚶提取物片劑、毛蚶提取物丸劑、毛蚶提取物顆粒粉碎，分別得毛蚶提取物膠囊、毛蚶提取物片劑、毛蚶提取物丸劑、毛蚶提取物顆粒粉。
[0020]分別制備多糖，分別取毛蚶肉提取物、毛蚶提取物膠囊粉、毛蚶提取物片劑粉、毛蚶提取物丸劑粉、毛蚶提取物顆粒粉、魁蚶肉提取物、泥蚶肉提取物、花蛤肉提取物、扇貝肉提取物2g，加石油醚:乙醇=1:1的溶液30ml，于40°C水浴保溫3hr，超聲提取25min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水30ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，80°C水浴3hr，時時攪拌,過濾,濾液另器保存,濾渣加去離子水40ml，繼續(xù)水浴攪拌2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加乙醇40ml，沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水40ml，80°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入乙醇40ml，沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，分別得毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物膠囊、毛蚶提取物片劑、毛蚶提取物丸劑、毛蚶提取物顆粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇貝肉多糖。
[0021]分別取毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物膠囊、毛蚶提取物片劑、毛蚶提取物丸齊U、毛蚶提取物顆粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇貝肉多糖，加流動相使溶解并稀釋分別制成每Iml中約含IOmg的溶液，注入液相色譜儀，測定。
[0022]結(jié)果
不同多糖的圖譜結(jié)果見表I。
[0023]表I不同多糖的圖譜結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于使用凝膠高效液相色譜法，具體步驟如下: 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性:用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫:30°C -45 °C ;流速:0.5ml-l ml /min ;理論板數(shù)按葡萄糖峰計算應(yīng)不低于3000 ； 制備毛蚶多糖:取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約0.5-5g的樣品，加10-20倍的石油醚:乙醇=1:0.5-2的溶液，于30°C _50°C水浴保溫l_3hr，超聲提取15_45min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水10-30ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.5~8.5，70°C _90°C水浴0.5-4hr,時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水5-50ml，繼續(xù)水浴攪拌0.5_2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水5-50ml，70°C _90°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖； 制備毛蚶多糖供試品溶液:取毛蚶多糖，加流動 相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得； 測定:取毛蚶多糖供試品溶液10-100 μ 1，注入液相色譜儀，測定； 多糖圖毛蚶譜中呈現(xiàn)2個特征峰，以圖譜中的S峰為參照，計算2特征峰與S峰的相對保留時間:峰I為0.56±10%、峰2為0.68±10%、峰S為I。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性:用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.lmol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫:40°C ;流速:0.5ml /min ;理論板數(shù)按葡萄糖峰計算應(yīng)不低于5000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖為:取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約l_3g的樣品，加15倍的石油醚:乙醇=1:1-1.5的溶液，于35°C _45°C水浴保溫2-3hr，超聲提取20_40min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水15-25ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7~8，80°C水浴l_3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水10-40ml，繼續(xù)水浴1-2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加2_3倍量乙醇沉淀6hr以上,棄上清液,下層液離心,沉淀加去離子水15-25ml , 80°C水浴2hr,離心,取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求3的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖為:取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約2g的樣品，加15倍的石油醚:乙醇=1:1的溶液，于40°C水浴保溫3hr，超聲提取30min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水20ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5~8，80°C水浴3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水20ml，繼續(xù)水浴2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水20ml，80°C水浴2hr，離心，取上清液；加1/4體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復(fù)操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80°C以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖供試品溶液為:取毛蚶多糖，加流動相使溶解，制成每1ml含IOmg的溶液，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于取毛蚶多糖供試品溶液10-50 μ 1，注入液相色譜儀，測定。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求6的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于取毛蚶多糖供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2或權(quán)利要求3或權(quán)利要求4或權(quán)利要求5或權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于用于毛蚶提取物及其各種制劑的鑒別。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2或權(quán)利要求3或權(quán)利要求4或權(quán)利要求5或權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的一種毛 蚶多糖的鑒別方法，其特征在于用于魁蚶、泥蚶、花蛤、扇貝提取物及其各種制劑的鑒別。
【文檔編號】G01N30/06GK103954718SQ201410186537
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月6日
【發(fā)明者】盧寧, 王麗, 牛鳳菊, 張晶, 許翠萍 申請人:濟南康眾醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司