一種用于重癥患者病情評估的elisa試劑盒及其檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及其檢測方法，該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法包括：CHGA單克隆抗體濃度為10ng/ml，酶標(biāo)板微反應(yīng)孔中，每孔加入100ul包被液，4℃過夜，PBST洗滌液洗滌5次；加100ul/孔封閉液，4℃過夜，洗滌液洗滌5次，4℃冰箱保存；應(yīng)用購置CHGA標(biāo)準(zhǔn)品，倍比稀釋，設(shè)置空白對照，與病人血漿分別加入不同孔中，100ul/孔；依次加入酶標(biāo)二抗及HRP酶標(biāo)二抗后，分別加入底物顯色液，終止液終止顯色，應(yīng)用酶標(biāo)儀，測定450nm波長OD值；該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒包括：酶標(biāo)板、封閉液容器、酶標(biāo)二抗容器、底物顯色液容器、終止液容器。本發(fā)明能夠簡單快速地對重癥患者的病情進(jìn)行早期評估，具有良好的特異性和敏感性。
【專利說明】—種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于免疫分析醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及其檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]重癥患者病因復(fù)雜，病情多變，雖有器官功能支持等現(xiàn)代醫(yī)療手段，但其死亡率仍較高。對病情進(jìn)行早期準(zhǔn)確的評估，及時給予有效地預(yù)防和治療是改善重癥患者預(yù)后的重要途徑。如何進(jìn)行早期準(zhǔn)確的病情評估是當(dāng)前臨床醫(yī)生面臨的難題。
[0003]目前，ICU中普遍使用的各種危重病評分，如APACHE和SOFA評分，主要是針對疾病的一些重要癥狀、體征、病史、影像學(xué)和生理參數(shù)進(jìn)行綜合評估，并進(jìn)行量化評定以達(dá)到病情龐端和預(yù)后評估，是一種較為有效的方法。但因其評分過程復(fù)雜，需要一定的時間，不僅對臨床醫(yī)生帶來實(shí)施的困難和工作量的增加，更會延誤病情，未能達(dá)到重癥患者病情評估簡單快速、及時的要求。尋找與重癥患者病理生理過程密切相關(guān)的生化指標(biāo)，作為重癥患者早期病情評估的生物學(xué)標(biāo)志物，是重癥醫(yī)學(xué)發(fā)展的迫切需要。目前，臨床上已用于此的生化指標(biāo)主要有PCT和CRP。盡管PCT是診斷炎癥的良好指標(biāo)，但對多器官功能衰竭和預(yù)后的評估仍存在較多爭議，CRP更是受多種因素的影響，只能對重癥患者的評估起到參考作用，兩者均缺乏特異性和敏感性，臨床價值欠佳，且價格昂貴，沒有特別突出的優(yōu)勢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明實(shí)施例的目的在于提供一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及其檢測方法，旨在解決現(xiàn)有病情評估方法中存在的操作復(fù)雜、準(zhǔn)確性低、周期長的問題。
[0005]本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法，該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法包括以下步驟:
[0006]步驟一，CHGA單克隆抗體濃度為10ng/ml,酶標(biāo)板微反應(yīng)孔中，每孔加入IOOul包被液，4 °C過夜，PBST洗滌液洗滌5次；
[0007]步驟二，加IOOul/孔封閉液，4°C過夜，洗滌液洗滌5次，4°C冰箱保存；
[0008]步驟三，應(yīng)用購置CHGA標(biāo)準(zhǔn)品，倍比稀釋，設(shè)置空白對照，與病人血漿分別加入不同孔中，IOOul/孔；依次加入酶標(biāo)二抗及HRP酶標(biāo)二抗后，分別加入底物顯色液，終止液終止顯色，應(yīng)用酶標(biāo)儀，測定450nm波長OD值。
[0009]進(jìn)一步，在步驟一中，應(yīng)用CHGA單克隆抗體，規(guī)格為IOOul (lmg/ml)，抗體類型為LgGlkappa0
[0010]本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于提供一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒，該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒包括:酶標(biāo)板、封閉液容器、酶標(biāo)二抗容器、底物顯色液容器、終止液容器、樣品稀釋液容器、標(biāo)準(zhǔn)品容器、洗滌液容器；
[0011]酶標(biāo)板、封閉液容器、酶標(biāo)二抗容器、底物顯色液容器、終止液容器、樣品稀釋液容器、標(biāo)準(zhǔn)品容器、洗滌液容器放置在ELISA試劑盒內(nèi)，酶標(biāo)板的微孔內(nèi)包被有CHGA單克隆抗體的包被液。
[0012]進(jìn)一步，包被液中CHGA單克隆抗體的濃度為lug/ml。
[0013]進(jìn)一步，酶標(biāo)二抗的工作稀釋倍數(shù)為1:2000。
[0014]本發(fā)明提供的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及其檢測方法，通過對人血漿中的生物學(xué)標(biāo)志物-CHGA，通過檢測血漿水平，能夠簡單快速地對重癥患者的病情進(jìn)行早期評估，并具有良好的特異性和敏感性。本發(fā)明的試劑盒可以簡單快速、準(zhǔn)確的對入住ICU病人進(jìn)行病情嚴(yán)重程度評估，該試劑盒預(yù)測重癥患者死亡的靈敏度和特異度分別為80.0%和81.6%。應(yīng)用該試劑盒可以有針對性的對疾病的發(fā)展實(shí)施有效的治療措施以及積極的預(yù)防，并可以減輕臨床工作者的工作量以及節(jié)約臨床資源。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0016]圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法流程圖；
[0017]圖3是本發(fā)明實(shí)施例提供的ROC分析入院時CGA、PCT和APACHEII預(yù)測患者生存情況；
[0018]圖中:1、酶標(biāo)板；2、封閉液容器；3、酶標(biāo)二抗容器；4、底物顯色液容器；5、終止液容器；6、樣品稀釋液容器；7、標(biāo)準(zhǔn)品容器；8、洗滌液容器。
【具體實(shí)施方式】
[0019]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0020]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0021]如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒包括:酶標(biāo)板
1、封閉液容器2、酶標(biāo)二抗容器3、底物顯色液容器4、終止液容器5、樣品稀釋液容器6、標(biāo)準(zhǔn)品容器7、洗滌液容器8;
[0022]酶標(biāo)板1、封閉液容器2、酶標(biāo)二抗容器3、底物顯色液容器4、終止液容器5、樣品稀釋液容器6、標(biāo)準(zhǔn)品容器7、洗滌液容器8放置在ELISA試劑盒內(nèi)。酶標(biāo)板I的微孔內(nèi)包被有CHGA單克隆抗體的包被液，包被液中CHGA單克隆抗體的濃度為lug/ml，ELISA試劑盒還包括封閉液、酶標(biāo)二抗、底物顯色液、終止液，酶標(biāo)二抗的工作稀釋倍數(shù)為1:2000。
[0023]如圖2所示，本發(fā)明實(shí)施例的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法包括以下步驟:
[0024]S201 =CHGA單克隆抗體濃度為10ng/ml，酶標(biāo)板微反應(yīng)孔中，每孔加入IOOul包被液，4°C過夜，PBST洗滌液洗滌5次；
[0025]S202:加IOOul/孔封閉液，4°C過夜，洗滌液洗滌5次，4°C冰箱保存；
[0026]S203:應(yīng)用購置CHGA標(biāo)準(zhǔn)品，倍比稀釋，設(shè)置空白對照，與病人血漿分別加入不同孔中，IOOul/孔；依次加入酶標(biāo)二抗及HRP酶標(biāo)二抗后，分別加入底物顯色液，終止液終止顯色，應(yīng)用酶標(biāo)儀，測定450nm波長OD值。
[0027]結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明:
[0028]實(shí)驗(yàn)例1，制備用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒及檢測方法
[0029]1.1單克隆抗體:應(yīng)用antibodiesCHGA單克隆抗體，貨號ABIN933034，規(guī)格IOOul (lmg/ml)，抗體類型 LgGlkappa ；
[0030]1.2包被:包被配方，CHGA單克隆抗體濃度為10ng/ml，酶標(biāo)板微反應(yīng)孔中，每孔加入IOOul包被液，4°C過夜，PBST洗滌液洗滌5次；
[0031]1.3封閉:加IOOul/孔封閉液，4°C過夜，洗滌液洗滌5次，4°C冰箱保存；
[0032]1.4測量:應(yīng)用購置CHGA標(biāo)準(zhǔn)品，倍比稀釋，設(shè)置空白對照，與病人血漿分別加入不同孔中(IOOul/孔)；依次加入二抗及HRP酶標(biāo)二抗后，分別加入底物顯色液，終止液終止顯色，應(yīng)用酶標(biāo)儀，測定450nm波長OD值。
[0033]實(shí)施例2，重癥患者病情嚴(yán)重程度與血漿CHGA濃度相關(guān)性研究。
[0034]2.1方法:應(yīng)用上述ELISA方法對20名健康志愿者和連續(xù)收治的120例重癥患者進(jìn)行入院24小時內(nèi)血漿CHGA測定，并檢測PCT、CRP等指標(biāo)，記錄APACHEII和SOFA評分及28天死亡率。
[0035]2.2結(jié)果:健康對照組血漿CHGA水平:40.91 ±4.63ug/L，膿毒性休克組血漿CHGA水平:213.62±36.90ug/L，死亡患者比生存患者CHGA濃度顯著增高[(190.51 ±19.26ug/L)vs(65.00±16.87ug/L)p < 0.017]，ROC 分析以 139ug/L 為截?cái)嘀?，CHGA 預(yù)測死亡的靈敏度為80.0%，特異度為81.6%。
[0036]如圖3所示，ROC分析結(jié)果表明:CHGA與APACHEII評分具有相當(dāng)?shù)脑u估重癥患者預(yù)后的能力，但更加快速，易于操作；CHGA比PCT有更強(qiáng)的評估重癥患者預(yù)后的能力。
[0037]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法，其特征在于，該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法包括以下步驟: 步驟一,CHGA單克隆抗體濃度為10ng/ml,酶標(biāo)板微反應(yīng)孔中，每孔加入IOOul包被液，4°C過夜，PBST洗滌液洗滌5次； 步驟二，加IOOul/孔封閉液，4°C過夜，洗滌液洗滌5次，4°C冰箱保存； 步驟三，應(yīng)用購置CHGA標(biāo)準(zhǔn)品，倍比稀釋，設(shè)置空白對照，與病人血漿分別加入不同孔中，IOOul/孔；依次加入酶標(biāo)二抗及HRP酶標(biāo)二抗后，分別加入底物顯色液，終止液終止顯色，應(yīng)用酶標(biāo)儀，測定450nm波長OD值。
2.如權(quán)利要求1所述的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒的檢測方法，其特征在于，在步驟一中，應(yīng)用CHGA單克隆抗體，規(guī)格為IOOul (lmg/ml)，抗體類型為LgGlkappa。
3.一種用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒，其特征在于，該用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒包括:酶標(biāo)板、封閉液容器、酶標(biāo)二抗容器、底物顯色液容器、終止液容器、樣品稀釋液容器、標(biāo)準(zhǔn)品容器、洗滌液容器； 酶標(biāo)板、封閉液容器、酶標(biāo)二抗容器、底物顯色液容器、終止液容器、樣品稀釋液容器、標(biāo)準(zhǔn)品容器、洗滌液容器放置在ELISA試劑盒內(nèi)，酶標(biāo)板的微孔內(nèi)包被有CHGA單克隆抗體的包被液。
4.如權(quán)利要求3所述的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒，其特征在于，包被液中CHGA單克隆抗體的濃度為lug/ml。
5.如權(quán)利要求3所述的用于重癥患者病情評估的ELISA試劑盒，其特征在于，酶標(biāo)二抗的工作稀釋倍數(shù)為1:2000。
【文檔編號】G01N33/535GK103983779SQ201410198334
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月12日
【發(fā)明者】張丹, 陳曉迎 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)