一種靈芝皇制劑hplc標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其構(gòu)建方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，該構(gòu)建方法，包括供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備，采用線性梯度洗脫，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05~0.15%(v/v)磷酸水溶液，檢測(cè)波長為252nm，柱溫為25~35℃，流速為1.0mL/min，以高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，得靈芝皇制劑指紋圖譜，以至少14批指紋圖譜的共有特征峰作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的特征峰；標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有40個(gè)特征峰，歸屬于靈芝、白術(shù)、黃精、菟絲子、五味子、甘草、枸杞子的特征峰分別有20、3、3、5、1、5、2個(gè)。本發(fā)明方法及標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能全面、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)靈芝制劑的整體質(zhì)量，有利于保證靈芝制劑的質(zhì)量及藥效。
【專利說明】一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其構(gòu)建方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種靈芝皇制劑的分析檢測(cè)方法，具體涉及一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]藥物指紋圖譜系指中藥原料藥材、飲片、中間品、成品等經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其特征的共有峰的圖譜。藥物指紋圖譜能客觀地揭示和反映藥物內(nèi)在質(zhì)量的整體性和特征性，用以評(píng)價(jià)藥物的真實(shí)性、有效性、穩(wěn)定性和一致性。藥物的臨床療效并非由單一活性成分的作用或多種活性成分作用的簡(jiǎn)單相加，復(fù)方制劑更是如此。用已知某一個(gè)或幾個(gè)活性成分或有效成分為質(zhì)量指標(biāo)，通過定性和定量分析來判斷藥品質(zhì)量的優(yōu)劣，顯然是不全面的。藥物質(zhì)量的評(píng)價(jià)需要綜合的、宏觀的、非線性的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，藥物指紋圖譜就是能較好地適應(yīng)這一特點(diǎn)的一種質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制模式。在國際上，如日本、德國、美國、加拿大、印度等許多國家，對(duì)一些傳統(tǒng)藥、天然藥和草藥，都把指紋圖譜作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容之一。歐共體對(duì)草藥質(zhì)量的指南中也稱，單靠測(cè)定某有效成分考察質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因?yàn)椴菟幖捌渲苿┦且哉w為活性物質(zhì)。世界衛(wèi)生組織(WHO)在1996年草藥評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則中規(guī)定:如果草藥的活性成分不明，可以提供特征色譜圖譜，以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致。因此指紋圖譜是藥物現(xiàn)代化和國際化的關(guān)鍵技術(shù)之一。
[0003]靈芝皇膠囊是根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，用現(xiàn)代研究成果及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，以靈芝為主要原料，輔與白術(shù)、黃精、枸杞子、獲茶、麥冬、菟絲子、五味子、薏苡仁、甘草精制而成的保健品，經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證明，本品具有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老和輔助抑制腫瘤的保健作用。靈芝皇制劑具有增強(qiáng)免疫力的藥理作用，不是直接作用于癌癥，但能輔助抑制腫瘤。它是通過運(yùn)用現(xiàn)代高新技術(shù)，提取赤靈芝抗腫瘤的有效成分，并根據(jù)中醫(yī)復(fù)方理論，選取多種傳統(tǒng)中草藥科學(xué)配伍制成，可以輔助抑制腫瘤，減低癌癥高危人群的患癌機(jī)會(huì)。
[0004]目前靈芝皇制劑尚缺乏全面有效的質(zhì)量控制方法，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，難以全面監(jiān)控成品、中間品的質(zhì)量及生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。凌遠(yuǎn)育等在文獻(xiàn)“靈芝皇膠囊中多糖的含量測(cè)定”基層中藥雜志，1997，11(3):40報(bào)道了蒽酮法測(cè)定靈芝皇膠囊多糖的含量，但僅局限于個(gè)別成分的檢測(cè)，不能全面反映該產(chǎn)品的特性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明建立了一種合理、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)靈芝皇制劑整體性質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以及該指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0007]本發(fā)明的另一目的在于提供靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0008]本發(fā)明的再一目的在于提供靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
[0010]一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，該指紋圖譜中有40個(gè)共有特征峰，分別編號(hào)為I至40，以編號(hào)16特征峰為參照峰，編號(hào)為I至40的特征峰相對(duì)保留時(shí)間依次分別為:0.095 ?0.099min、0.109 ?0.113min、0.121 ?0.125min、0.165 ?0.169min、0.199 ?0.205min、0.245 ?0.247min、0.368 ?0.372min、0.387 ?0.393min、0.434 ?0.438min、0.549 ?0.551min、0.603 ?0.605min、0.873 ?0.875min、0.889 ?0.891min、0.897 ?
0.899min、0.915 ?0.917min、l.000min、l.065 ?1.067min、l.121 ?1.123min、l.155 ?
1.157min、l.181 ?1.183min、l.361 ?1.363min、l.395 ?1.397min、l.447 ?1.449min、1.458 ?1.460min、l.489 ?1.493min、l.507 ?1.511min、l.576 ?1.580min、l.612 ?1.615min、l.629 ?1.633min、l.682 ?1.686min、l.696 ?1.700min、l.706 ?1.710min、1.764 ?1.768min、l.803 ?1.805min、l.835 ?1.839min、l.853 ?1.857min、l.866 ?1.868min、l.876 ?1.878min、l.886 ?1.890min、l.930 ?1.932min。
[0011]進(jìn)一步的，上述的編號(hào)為I至40的40個(gè)共有特征峰中:
[0012]歸屬于靈芝的特征峰編號(hào)為1、2、3、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、40 —共20個(gè)，其中31號(hào)峰為靈芝酸A ；
[0013]歸屬于菟絲子的特征峰編號(hào)為9、10、14、15、16 —共5個(gè)，其中14號(hào)峰為金絲桃苷、15號(hào)峰為異槲皮苷、16號(hào)峰為紫云英苷；
[0014]歸屬于甘草的特征峰編號(hào)為12、13、18、19、36 —共5個(gè)，其中12號(hào)峰為甘草苷、36
號(hào)峰為甘草酸；
[0015]歸屬于黃精的共有峰編號(hào)為4、5、6—共3個(gè)；
[0016]歸屬于白術(shù)的特征峰編號(hào)為10、17、24—共3個(gè)；
[0017]歸屬于五味子的特征峰編號(hào)為39 —共I個(gè),39號(hào)峰為五味子醇甲。
[0018]歸屬于枸杞子的特征峰編號(hào)為9、11 一共2個(gè)。
[0019]進(jìn)一步的，上述靈芝皇制劑由靈芝、白術(shù)、薏苡仁、黃精、枸杞子、茯苓、麥冬、菟絲子、五味子、甘草10味藥材制成。
[0020]一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括以下步驟:
[0021 ] I)制備靈之皇制劑供試品溶液；
[0022]2)制備對(duì)照品溶液:精密稱取靈芝酸A、甘草苷、甘草酸銨、金絲桃苷、異槲皮苷、紫云英苷、五味子醇甲，加甲醇溶解，分別制成濃度已知的對(duì)照品溶液；
[0023]3)靈芝皇制劑的HPLC指紋圖譜的建立:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，進(jìn)樣，用高效液相色譜儀測(cè)定，線性梯度洗脫程序如下表:
【權(quán)利要求】
1.一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于:該指紋圖譜中有40個(gè)共有特征峰，分別編號(hào)為I至40，以編號(hào)16特征峰為參照峰，編號(hào)為I至40的特征峰相對(duì)保留時(shí)間依次分別為:0.095~0.099 min、0.109~0.113 min、0.121 ~0.125 min、0.165~0.169 min、0.199~0.205 min,0.245~0.247 min,0.368~0.372 min,0.387~0.393 min,0.434~0.438 min、0.549~0.551 min,0.603~0.605 min,0.873~0.875 min,0.889~0.891 min,0.897~0.899min,0.915~0.917 min、l.000 min、l.065~1.067 min、l.121~.123 min、l.155~1.157 min、1.181 ~1.183 min、1.361 ~1.363 min、1.395~1.397 min、1.447~1.449 min、1.458~1.460 min、1.489~1.493 min、l.507~1.511 min、l.576~1.580 min、l.612~1.615 min、l.629~1.633min、1.682^1.686 min、1.696^1.700 min、1.706^1.710 min、1.764^1.768 min、1.803^1.805min、1.835^1.839 min、1.853^1.857 min、1.866^1.868 min、1.876^1.878 min、1.886^1.890min、1.930~1.932 min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于:所述的編號(hào)分別為I至40的40個(gè)共有特征峰中: 歸屬于靈芝的特征峰編號(hào)為 1、2、3、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37,38,40 一共20個(gè)，其中31號(hào)峰為靈芝酸A ； 歸屬于菟絲子的特征峰編號(hào)為9、10、14、15、16 —共5個(gè)，其中14號(hào)峰為金絲桃苷、15號(hào)峰為異槲皮苷、16號(hào)峰為紫云英苷； 歸屬于甘草的特征峰編號(hào)為12、13、18、19、36 —共5個(gè)，其中12號(hào)峰為甘草苷、36號(hào)峰為甘草酸； 歸屬于黃精的共有峰編號(hào)為4、5、6 —共3個(gè)； 歸屬于白術(shù)的特征峰編號(hào)為10、17、24 —共3個(gè)； 歸屬于五味子的特征峰編號(hào)為39 —共I個(gè),39號(hào)峰為五味子醇甲； 歸屬于枸杞子的特征峰編號(hào)為9、11 一共2個(gè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于:所述的靈芝皇制劑由靈芝、白術(shù)、黃精、枸杞子、茯苓、麥冬、菟絲子、五味子、薏苡仁、甘草10味藥材制成。
4.權(quán)利要求1~3中任一所述一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于:包括以下步驟: O制備靈芝皇制劑供試品溶液； . 2)制備對(duì)照品溶液:精密稱取靈芝酸A、甘草苷、甘草酸銨、金絲桃苷、異槲皮苷、紫云英苷、五味子醇甲，加甲醇溶解，分別制成濃度已知的對(duì)照品溶液； . 3)靈芝皇制劑的HPLC指紋圖譜的建立:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，進(jìn)樣，用高效液相色譜儀測(cè)定，線性梯度洗脫程序如下表:
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于:步驟I)中制備靈芝皇制劑供試品溶液的具體操作為:精密稱取靈芝皇膠囊內(nèi)容物，置于帶塞的錐形瓶中，加入甲醇，使靈芝皇制劑的濃度為0.25^1.0g/mL，密塞，稱定重量，超聲處理4(T60min，靜置放冷，再稱定重量，用甲醇彌補(bǔ)減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，并用I~2 mL容量瓶定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于:步驟3)中所述高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定時(shí)的條件為流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分?jǐn)?shù)為0.05、.15%的磷酸水溶液，柱溫為25~35°C，流速為1.0mL/min,檢測(cè)波長為252nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種靈芝皇制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于:步驟4)中所述各批次靈芝皇制劑樣品的HPLC指紋圖譜與靈芝皇制劑HPLC的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度應(yīng)大于0.9。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104007198SQ201410222356
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】高新開, 程敏, 譚麗容, 吳小莉 申請(qǐng)人:無限極（中國）有限公司