一種不同提取方法的普洱茶gc指紋圖譜試驗(yàn)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，樣品準(zhǔn)備，將市場(chǎng)上所購(gòu)買(mǎi)的普通茶葉和大益牌7542系列普洱茶分別在研缽中研細(xì)，分別儲(chǔ)存在2個(gè)密封性好的廣口瓶中；樣品前處理；不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較；普洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較；普通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較；不同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較。本發(fā)明采用氣相色譜法對(duì)不同提取方法和不同溶劑提取的普洱茶提取液進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)所得的氣相指紋圖譜進(jìn)行整體性比較，最終建立一種得到方法簡(jiǎn)捷、整體性強(qiáng)、靈敏度高、分析時(shí)間短的普洱茶GC色譜指紋圖譜方法，為普洱茶GC指紋圖譜技術(shù)研究提供參考。
【專利說(shuō)明】一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于普洱茶研究領(lǐng)域，尤其涉及一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜 試驗(yàn)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)茶葉的研究主要是集中在茶葉加工過(guò)程以及終端產(chǎn)品中呈香、呈 味物質(zhì)的組成、含量、轉(zhuǎn)變規(guī)律和協(xié)調(diào)性、相關(guān)性等方面。自1893年Μ · K · Bamber就開(kāi)始 研究茶葉香氣成分；1896年P(guān) ?Van ·Κοπ?ΒΓ8η用蒸饋法提取茶葉中的香精油；1920年荷蘭 學(xué)者從茶葉中發(fā)現(xiàn)青葉醛（反-2-己烯醛）；1933年日本京都大學(xué)和臺(tái)灣臺(tái)北大學(xué)開(kāi)始對(duì) 煎茶和紅茶香氣進(jìn)行研究，已做了大量工作，因?yàn)榧夹g(shù)落后，每次研究必須消耗1噸茶葉來(lái) 抽提香氣，且對(duì)香氣組成的研究還很膚淺。從此以后，在日本、美國(guó)掀起了研究茶葉高潮，特 別是日本的山西貞博士和田中協(xié)和博士，他們不但研究鮮茶葉中的青葉醛和青葉醛的形成 機(jī)制，還研究了其他香氣物質(zhì)及其形成機(jī)制和綜合利用等。在國(guó)內(nèi)，對(duì)茶葉方面指紋圖譜研 究的報(bào)道相對(duì)很多。如：宋冠群等利用膠束電動(dòng)色譜法建立了茶葉的指紋圖譜并用于分析 10種中國(guó)名茶，實(shí)現(xiàn)了圖譜的數(shù)據(jù)化；成浩等人利用多元化學(xué)指紋圖譜和逐步判別技術(shù)對(duì) 茶葉進(jìn)行判別，使不同產(chǎn)地屬性的扁形茶得到了有效的分離；寧井銘等人采用高效液相色 譜技術(shù)對(duì)云南普洱茶曬青毛茶的主要化學(xué)成分的指紋圖譜進(jìn)行了研究，為普洱毛茶鑒別和 質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)；顧睿等人利用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對(duì)普洱茶香氣成分的分析， 研究普洱茶香氣成分對(duì)普洱茶品質(zhì)的影響。
[0003] 就揮發(fā)性成分研究而言，以往的學(xué)者們所采用的提取分離方法主要有：常壓水蒸 氣蒸餾萃取法（SDE法）、減壓蒸餾萃取法（VDE)、頂空吸附法（HAS法）、超臨界二氧化碳萃 取法（SFE)等。而在運(yùn)用不同提取方式和不同溶劑提取的氣相指紋圖譜研究方面的報(bào)道相 對(duì)較少。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，旨在 對(duì)不同提取方法和不同溶劑提取的普洱茶提取液進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)所得的氣相指紋圖譜進(jìn)行整 體性比較，為普洱茶GC指紋圖譜技術(shù)研究提供參考。
[0005] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法包括：
[0006] 步驟一、樣品準(zhǔn)備，將市場(chǎng)上所購(gòu)買(mǎi)的普通茶葉和大益牌7542系列普洱茶分別在 研缽中研細(xì)，分別儲(chǔ)存在2個(gè)密封性好的廣口瓶中；
[0007] 步驟二、樣品前處理；
[0008] 步驟三、不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較；
[0009] 步驟四、普洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較；
[0010] 步驟五、普通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較；
[0011] 步驟六、不同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較。
[0012] 進(jìn)一步，樣品前處理包括普通茶葉樣品的制備和大益普洱茶樣品的制備，具體方 法為：
[0013] 普通茶葉樣品的制備過(guò)程為：
[0014] 步驟一、準(zhǔn)確稱取四份茶葉，每份1. 000g，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用索氏提取法回流提取30min ;
[0015] 步驟二、準(zhǔn)確稱取四份茶葉，每份1. 〇〇〇g，分別取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用超聲提取法提取30min ;
[0016] 步驟三、確稱取四份茶葉，每份1. 000g，分別取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè) 酒精、蒸餾水，用新儀微波在提取溫度（T) :50°C;攪拌轉(zhuǎn)速（r) :800轉(zhuǎn)/min ;功率（W) :3KW ; 提取時(shí)間（t) :30min條件下提?。?br> [0017] 步驟四、確稱取四份茶葉，每份l.OOOg，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用可調(diào)高速勻漿機(jī)在轉(zhuǎn)速（r) :1萬(wàn)轉(zhuǎn)/min;提取時(shí)間（t) :5min條件下提 取；
[0018] 將丙酮、乙酸乙酯、石油醚經(jīng)不同提取方法得到的提取液常壓濾后，用有機(jī)相濾膜 過(guò)濾至進(jìn)樣瓶；用工業(yè)酒精提取的提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮干，用2ml無(wú)水 乙醇定容后用濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶；水提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后，分別用乙酸乙酯、石油醚、正己 烷萃取，萃取液用有機(jī)相濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶于GC上檢測(cè)；
[0019] 大益普洱茶樣品的制備：準(zhǔn)確稱取普洱茶，每份l.OOOg，分別采用與普通茶葉樣 品制備過(guò)程一樣的提取方法與條件進(jìn)行提取、制備樣品，并與GC上檢測(cè)。
[0020] 進(jìn)一步，不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較包括不同提 取溶劑的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較和不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較 具體方法為：
[0021] 不同提取溶劑的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為：
[0022] 步驟一、以普洱茶為原料，采用索氏提取法，按照樣品前處理步驟中的步驟一的方 法進(jìn)行樣品的制備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在索氏提取法下 各溶劑的GC指紋圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0023] 步驟二、以普洱茶為原料，采用超聲提取法，按照樣品前處理步驟二進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在超聲提取法下各溶劑的GC指紋 圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0024] 步驟三、以普洱茶為原料，采用微波提取法，按照樣品前處理步驟三進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品在一定條件下下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在微波提取法下各溶劑的GC指 紋圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0025] 步驟四、以普洱茶為原料，采用勻漿提取法，按照樣品前處理步驟四進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在勻漿提取法下各溶劑的GC指紋 圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0026] 步驟五、通過(guò)在同種提取方法下，對(duì)不同溶劑進(jìn)行提取之后所檢測(cè)的GC指紋圖譜 的峰數(shù)情況進(jìn)行比較；
[0027] 不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為：
[0028] 步驟一、按照樣品前處理的方法以丙酮為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普洱 茶進(jìn)行考察，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析。
[0029] 步驟二、按照樣品前處理的方法以工業(yè)酒精為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì) 普洱茶進(jìn)行提取，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析。
[0030] 步驟三、按照樣品前處理的方法以乙酸乙酯為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì) 普洱茶進(jìn)行考察，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析。
[0031] 步驟四、按照樣品前處理的方法以石油醚為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普 洱茶進(jìn)行考察，將所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析。
[0032] 進(jìn)一步、普洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較的方法為：
[0033] 步驟一、按照樣品前處理的方法對(duì)普洱茶進(jìn)行提取，并將所得提取液于GC上檢測(cè) 分析。
[0034] 步驟二、以勻漿法為提取方法，用乙酸乙酯直接提取與用水提取之后用乙酸乙酯 萃取對(duì)普洱茶進(jìn)行考察，并于GC上檢測(cè)，對(duì)所得GC指紋圖譜比較分析。
[0035] 步驟三、以索氏為提取方法，用石油醚直接提取和用水提取后用石油醚萃取所得 樣品與GC上檢測(cè)，并對(duì)所得指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0036] 進(jìn)一步、普通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較的方法為：
[0037] 步驟一、按照樣品前處理的方法中的方法對(duì)普通茶葉和普洱茶進(jìn)行考察，所得的 各提取液與GC上檢測(cè)，并對(duì)所得的GC指紋圖譜進(jìn)行分析比較。步驟二、在普通茶葉與 普洱茶的索氏法丙酮提取的GC指紋圖譜比較中，普通茶葉的GC指紋圖譜在保留時(shí)間為 8. 670min-32. 308min范圍內(nèi)具有較多較大的峰，而普洱茶的GC指紋圖譜則在保留時(shí)間為 38. 455min和59. 249min上具有普通茶葉所沒(méi)有的兩個(gè)特征峰；
[0038] 步驟三、在普通茶葉與普洱茶的勻漿法乙酸乙酯提取的氣相指紋圖譜比較中，整 體上看普通茶葉所具有的特征峰相對(duì)較多；
[0039] 進(jìn)一步，不同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為：
[0040] 以丙酮為溶劑，用索氏提取法對(duì)普洱茶進(jìn)行提取，將所提取到的樣品采用ECD和 FID檢測(cè)器的GC上進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)所得的指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
[0041] 進(jìn)一步，GC檢測(cè)條件為：
[0042] 進(jìn)樣口溫度：250 °C ;檢測(cè)器溫度：250 °C ;不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1μ 1 ;柱流 量：1. 52ml/min ;總流量：50. Oml/min ;吹掃流量：3. Oml/min ;載氣：高純氮；毛細(xì)管柱： ZB-multiResidue-2,30. OmXO. 25μπιΧ0· 2mm ;配制 ECD 和 FID，助燃?xì)猓℉2) :35ml/min ;空 氣：160ml/min ;載氣（N2) :35ml/min ;
[0043] 程序升溫：柱起始溫度50°C，保持1分鐘；以3°C /min升到80°C，保持2分鐘；再以 5°C /min升到130°C，保持3分鐘；再以3°C /min升到150°C，保持3分鐘；然后再以3°C / min升到180°C，保持2分鐘；最后以8°C /min升到250°C，保持12分鐘；總運(yùn)行時(shí)間：75分 鐘。
[0044] 效果匯總
[0045] 本發(fā)明采用氣相色譜法對(duì)不同提取方法和不同溶劑提取的普洱茶提取液進(jìn)行檢 測(cè)，對(duì)所得的氣相指紋圖譜進(jìn)行整體性比較，最終建立一種得到方法簡(jiǎn)捷、整體性強(qiáng)、靈敏 度高、分析時(shí)間短的普洱茶GC色譜指紋圖譜方法，為普洱茶GC指紋圖譜技術(shù)研究提供參 考。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0046] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的用不同提取溶劑以索氏提取為提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0047] 圖中：1、索氏法乙酸乙酯提??；2、索氏法石油醚提取；3、索氏法乙醇提取；4、索氏 法丙酮提取；
[0048] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的用不同提取溶劑以超聲提取為提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0049] 圖中：1、超聲乙酸乙酯；2、超聲石油醚；3、超聲乙醇；4、超聲丙酮；
[0050] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例提供的用不同提取溶劑以微波提取為提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0051] 圖中：1、微波乙酸乙酯；2、微波石油醚；3、微波乙醇；4、微波丙酮；
[0052] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例提供的用不同提取溶劑以勻漿提取為提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0053] 圖中：1、勻漿乙酸乙酯；2、勻漿石油醚；3、勻漿乙醇；4、勻漿丙酮；
[0054] 圖5是本發(fā)明實(shí)施例提供的以丙酮為提取溶劑用不同提取方法的GC指紋圖譜的 對(duì)比圖；
[0055] 圖中：1、微波法丙酮提?。?、超聲法丙酮提取；3、勻漿法丙酮提??；4、索氏法丙酮 提?。?br> [0056] 圖6是本發(fā)明實(shí)施例提供的以工業(yè)酒精為提取溶劑用不同提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0057] 圖中：1、微波乙醇；2、超聲乙醇；3、勻漿乙醇；4、索氏乙醇；
[0058] 圖7是本發(fā)明實(shí)施例提供的以乙酸乙酯為提取溶劑用不同提取方法的GC指紋圖 譜的對(duì)比圖；
[0059] 圖中：1、微波法乙酸乙酯提??；2、超聲法乙酸乙酯提??；3、勻漿法乙酸乙酯提?。?4、索氏法乙酸乙酯提?。?br> [0060] 圖8是本發(fā)明實(shí)施例提供的以石油醚為提取溶劑用不同提取方法的GC指紋圖譜 的對(duì)比圖；
[0061] 圖中：1、微波石油醚；2、超聲石油醚；3、勻漿石油醚；4、索氏石油醚；
[0062] 圖9是本發(fā)明實(shí)施例提供的以勻漿提取法乙酸乙酯提取液與乙酸乙酯萃取液的 GC指紋圖譜的對(duì)比圖；
[0063] 圖中：1、勻漿法乙酸乙酯提?。?、勻漿法水提取、乙酸乙酯萃??；
[0064] 圖10是本發(fā)明實(shí)施例提供的以索氏提取法石油醚提取液與石油醚萃取液的GC指 紋圖譜的對(duì)比圖；
[0065] 圖中：1、索氏法石油醚提??；2、索氏法水提一石油醚萃??；
[0066] 圖11是本發(fā)明實(shí)施例提供的普通茶葉與普洱茶索氏法丙酮提取的GC指紋圖譜比 較圖；
[0067] 圖中：1、普洱茶索氏法丙酮提??；2、普通茶葉索氏法丙酮提??；
[0068] 圖12是本發(fā)明實(shí)施例提供的普通茶葉與普洱茶勻漿法乙酸乙酯提取的GC指紋圖 譜對(duì)比圖；
[0069] 圖中：1、普洱茶勻漿法乙酸乙酯提取；2、普通茶葉勻漿法乙酸乙酯提取；
[0070] 圖13是本發(fā)明實(shí)施例提供的索氏法丙酮提取用ECD和FID檢測(cè)的GC指紋圖譜的 對(duì)比圖；注：1-索氏法丙酮提取EDC檢測(cè)2-索氏法丙酮提取FID檢測(cè)。
[0071] 圖14是本發(fā)明實(shí)施例提供的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法流程 圖。

【具體實(shí)施方式】
[0072] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì) 本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并 不用于限定本發(fā)明。
[0073] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的工作原理做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明：
[0074] 1儀器與試劑
[0075] 1. 1主要儀器
[0076] 可調(diào)高速勻漿器（FSH-2,江蘇大地自動(dòng)化儀器廠），超聲波清洗器（HS-3120,環(huán)保 儀器廠），循環(huán)水式多用真空泵（SHZ-D (III)，天津華鑫儀器廠），微波合成萃取儀（MAS- II， 新儀微波化學(xué)科技有限公司），磁力攪拌器（CL-2,鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），便攜式 微型玻璃實(shí)驗(yàn)儀器（揚(yáng)州市邗江公道玻璃儀器廠），數(shù)顯電子天平（梅特勒-托利多儀器 (上海）有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA0SB-2100)，島津GC-2010氣相色譜儀。
[0077] 1. 2主要試劑
[0078] 石油醚（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）、無(wú)水乙醇（AR，天津市風(fēng)船化學(xué) 試劑科技有限公司）、丙酮（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）、乙酸乙酯（AR，廣東光 華科技股份有限公司）、正己烷（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）、工業(yè)酒精。
[0079] 1. 3 材料
[0080] 普通茶葉（蒙自五里沖茶廠）、普洱茶（大益牌7542系列）、2. 5ml -次性針筒、抽 濾瓶、化學(xué)分析濾紙、0. 45 μ m有機(jī)相濾膜、0. 45 μ m水相濾膜、2ml進(jìn)樣瓶、研缽。
[0081] 2儀器條件
[0082] 2.1GC檢測(cè)條件
[0083] 進(jìn)樣口溫度：250 °C ;檢測(cè)器溫度：250 °C ;不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1μ 1 ;柱流 量：1. 52ml/min ;總流量：50. Oml/min ;吹掃流量：3. Oml/min ;載氣：高純氮；毛細(xì)管柱： ZB-multiResidue-2,30. OmXO. 25μπιΧ0· 2mm ;配制 ECD 和 FID，助燃?xì)猓℉2) :35ml/min ;空 氣：160ml/min ;載氣（N2) :35ml/min〇
[0084] 程序升溫：柱起始溫度50°C，保持1分鐘；以3°C /min升到80°C，保持2分鐘；再以 5°C /min升到130°C，保持3分鐘；再以3°C /min升到150°C，保持3分鐘；然后再以3°C / min升到180°C，保持2分鐘；最后以8°C /min升到250°C，保持12分鐘；總運(yùn)行時(shí)間：75分 鐘。
[0085] 2. 2微波提取條件
[0086] 提取溫度（T) :50°C ;攪拌轉(zhuǎn)速（r) :800轉(zhuǎn)/min ;功率（W) :3KW ;提取時(shí)間⑴： 30min〇
[0087] 2. 3勻漿提取條件
[0088] 轉(zhuǎn)速（r) :1 萬(wàn)轉(zhuǎn)/min ;提取時(shí)間（t) :5min。
[0089] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法包括： [0090] S101 :樣品準(zhǔn)備，將市場(chǎng)上所購(gòu)買(mǎi)的普通茶葉和大益牌7542系列普洱茶分別在研 缽中研細(xì)，分別儲(chǔ)存在2個(gè)密封性好的廣口瓶中；
[0091] S102 :樣品前處理；
[0092] S103 :不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較；
[0093] S104 :普洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較；
[0094] S105 :普通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較；
[0095] S106 :不同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較。
[0096] 進(jìn)一步，樣品前處理包括普通茶葉樣品的制備和大益普洱茶樣品的制備，具體方 法為：
[0097] 普通茶葉樣品的制備過(guò)程為：
[0098] 步驟一、準(zhǔn)確稱取四份茶葉，每份1. 000g，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用索氏提取法回流提取30min ;
[0099] 步驟二、準(zhǔn)確稱取四份茶葉，每份1. 000g，分別取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用超聲提取法提取30min ;
[0100] 步驟三、確稱取四份茶葉，每份1. OOOg，分別取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè) 酒精、蒸餾水，用新儀微波在提取溫度（T) :50°C;攪拌轉(zhuǎn)速（r) :800轉(zhuǎn)/min ;功率（W) :3KW ; 提取時(shí)間（t) :30min條件下提?。?br> [0101] 步驟四、確稱取四份茶葉，每份1. 〇〇〇g，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工 業(yè)酒精、蒸餾水，用可調(diào)高速勻漿機(jī)在轉(zhuǎn)速（r) :1萬(wàn)轉(zhuǎn)/min;提取時(shí)間（t) :5min條件下提 ?。?br> [0102] 將丙酮、乙酸乙酯、石油醚經(jīng)不同提取方法得到的提取液常壓濾后，用有機(jī)相濾膜 過(guò)濾至進(jìn)樣瓶；用工業(yè)酒精提取的提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮干，用2ml無(wú)水 乙醇定容后用濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶；水提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后，分別用乙酸乙酯、石油醚、正己 烷萃取，萃取液用有機(jī)相濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶于GC上檢測(cè)；
[0103] 大益普洱茶樣品的制備：準(zhǔn)確稱取普洱茶，每份l.OOOg，分別采用與普通茶葉樣 品制備過(guò)程一樣的提取方法與條件進(jìn)行提取、制備樣品，并與GC上檢測(cè)。
[0104] 進(jìn)一步，不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較包括不同提 取溶劑的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較和不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較 具體方法為：
[0105] 不同提取溶劑的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為：
[0106] 步驟一、以普洱茶為原料，采用索氏提取法，按照樣品前處理步驟中的步驟一的方 法進(jìn)行樣品的制備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在索氏提取法下 各溶劑的GC指紋圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析（見(jiàn)圖1)。由此可知，索氏法 丙酮提取在保留時(shí)間為 4. 557min、5. 178min、8. 710min、ll. 064min、38. 478min、39. 102min、 66. 781min上具有特征峰，而其它沒(méi)有。索氏法乙醇提取的在26. 113min上具有一個(gè)比其它 方法要較高較大的峰。所以，在采用索氏法不同溶劑提取中，丙酮的提取效果更佳。
[0107] 步驟二、以普洱茶為原料，采用超聲提取法，按照樣品前處理步驟二進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在超聲提取法下各溶劑的GC指紋圖 譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析（見(jiàn)圖2)。
[0108] 在保留時(shí)間為8. 656min、ll. 310min、38. 473min上具有另外三種所沒(méi)有的特征 峰。所以在超聲提取條件下，以丙酮為提取溶劑的效果要更好。
[0109] 步驟三、以普洱茶為原料，采用微波提取法，按照樣品前處理步驟三進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在微波提取法下各溶劑的GC指紋圖 譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析（見(jiàn)圖3)。
[0110] 在保留時(shí)間：8. 776min、9. 256min、ll. 291min、15. 103min、38. 537min、63. 580min、 66. 841min上，具有區(qū)別于其他的特征峰，所以在微波提取條件下，以丙酮提取的效果要好。
[0111] 步驟四、以普洱茶為原料，采用勻漿提取法，按照樣品前處理步驟四進(jìn)行樣品的制 備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在勻漿提取法下各溶劑的GC指紋 圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析（見(jiàn)圖4)。
[0112] 在保留時(shí)間為：6. 776min、8. 732min、ll. 077min、38. 527min、41. 379min 上具有另 外方法所沒(méi)有的特征峰。因此，在以勻漿提取法的條件下，以丙酮提取的效果佳。
[0113] 步驟五、通過(guò)在同種提取方法下，以不同溶劑進(jìn)行提取之后所檢測(cè)的GC指紋圖譜 的峰數(shù)情況（見(jiàn)表1)。通過(guò)對(duì)表1中四種提取方法和與之對(duì)應(yīng)的四種提取溶劑的檢測(cè)結(jié)果 進(jìn)行分析可以看出，溶劑相同時(shí)各提取方法中指紋圖譜峰數(shù)最多的是索氏提取法，其次是 勻漿提取法。當(dāng)提取方法一定時(shí)，索氏提取法、超聲提取法、微波提取法均以乙醇為提取溶 劑是峰的數(shù)率最多，而在勻漿提取法中以丙酮為提取溶劑時(shí)峰的數(shù)量最多。在提取方法相 同時(shí)對(duì)提取溶劑而言，樣品的指紋圖譜峰的多少與提取溶劑的性質(zhì)有著密切的關(guān)系。隨著 溶劑的極性的減小，對(duì)應(yīng)的圖譜中所含的峰數(shù)有所減少。相對(duì)于提取溶劑相同而提取方法 不同時(shí)，樣品指紋圖譜中的峰數(shù)多少與提取方法的選擇同樣有所關(guān)聯(lián)。
[0114] 表1普洱茶各提取方法與溶劑相對(duì)應(yīng)的GC指紋圖譜的峰數(shù)（保留時(shí)間t > 3min)
[0115]

【權(quán)利要求】
1. 一種不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，該不同提取方法的 普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法包括： 步驟一、樣品準(zhǔn)備，將普通茶葉和大益牌7542系列普洱茶分別在研缽中研細(xì)，分別儲(chǔ) 存在2個(gè)密封性好的廣口瓶中； 步驟二、樣品前處理； 步驟三、不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較； 步驟四、普洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較； 步驟五、普通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較； 步驟六、不同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較。
2. 如權(quán)利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，樣 品前處理包括普通茶葉樣品的制備和大益普洱茶樣品的制備，具體方法為： 普通茶葉樣品的制備過(guò)程為： 步驟一、稱取四份茶葉，每份l.OOOg，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè)酒精、 蒸餾水，用索氏提取法回流提取30min ; 步驟二、稱取四份茶葉，每份1. 〇〇〇g，分別取20ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè)酒精、 蒸餾水，用超聲提取法提取30min ; 步驟三、取四份茶葉，每份l.OOOg，分別取30ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè)酒精、蒸 餾水，用新儀微波在提取溫度T :50°C ;攪拌轉(zhuǎn)速r :800轉(zhuǎn)/min ;功率W :3KW ;提取時(shí)間t : 30min條件下提??； 步驟四、稱取四份茶葉，每份1. 〇〇〇g，分別取25ml丙酮、石油醚、乙酸乙酯、工業(yè)酒精、 蒸餾水，用可調(diào)高速勻漿機(jī)在轉(zhuǎn)速r :1萬(wàn)轉(zhuǎn)/min ;提取時(shí)間t :5min條件下提??； 將丙酮、乙酸乙酯、石油醚經(jīng)不同提取方法得到的提取液常壓濾后，用有機(jī)相濾膜過(guò)濾 至進(jìn)樣瓶；用工業(yè)酒精提取的提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮干，用2ml無(wú)水乙醇 定容后用濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶；水提取液經(jīng)常壓過(guò)濾后，分別用乙酸乙酯、石油醚、正己烷萃 取，萃取液用有機(jī)相濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶于GC上檢測(cè)； 大益普洱茶樣品的制備：稱取普洱茶，每份l〇〇〇g，分別采用與普通茶葉樣品制備過(guò)程 一樣的提取方法與條件進(jìn)行提取、制備樣品，并與GC上檢測(cè)。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在 于，不同提取溶劑與提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較包括不同提取溶劑的普洱 茶GC指紋圖譜整體性比較和不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較； 不同提取溶劑的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為： 步驟一、以普洱茶為原料，采用索氏提取法，按照樣品前處理步驟中的的方法進(jìn)行樣品 的制備，將各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在索氏提取法下各溶劑的GC 指紋圖譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析； 步驟二、以普洱茶為原料，采用超聲提取法，按照樣品前處理步驟進(jìn)行樣品的制備，將 各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在超聲提取法下各溶劑的GC指紋圖譜， 并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析； 步驟三、以普洱茶為原料，采用微波提取法，按照樣品前處理步驟進(jìn)行樣品的制備，將 各提取液樣品在一定條件下下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在微波提取法下各溶劑的GC指紋圖 譜，并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析； 步驟四、以普洱茶為原料，采用勻漿提取法，按照樣品前處理步驟進(jìn)行樣品的制備，將 各提取液樣品在一定條件下于GC中進(jìn)樣檢測(cè)，得到在勻漿提取法下各溶劑的GC指紋圖譜， 并對(duì)所得GC指紋圖譜進(jìn)行比較分析； 步驟五、通過(guò)在同種提取方法下，對(duì)不同溶劑進(jìn)行提取之后所檢測(cè)的GC指紋圖譜的峰 數(shù)情況進(jìn)行比較； 不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為： 步驟一、按照樣品前處理的方法以丙酮為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普洱茶進(jìn) 行考察，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析； 步驟二、按照樣品前處理的方法以工業(yè)酒精為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普洱 茶進(jìn)行提取，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析； 步驟三、按照樣品前處理的方法以乙酸乙酯為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普洱 茶進(jìn)行考察，所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析； 步驟四、按照樣品前處理的方法以石油醚為提取溶劑，采用不同的提取方法對(duì)普洱茶 進(jìn)行考察，將所得提取液經(jīng)處理后于GC中檢測(cè)，建立GC指紋圖譜并進(jìn)行比較分析。
4. 如權(quán)利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，普 洱茶的提取液與萃取液的GC指紋圖譜整體性比較的方法為： 步驟一、按照樣品前處理的方法對(duì)普洱茶進(jìn)行提取，并將所得提取液于GC上檢測(cè)分 析； 步驟二、以勻漿法為提取方法，用乙酸乙酯直接提取與用水提取之后用乙酸乙酯萃取 對(duì)普洱茶進(jìn)行考察，并于GC上檢測(cè)，對(duì)所得GC指紋圖譜比較分析； 步驟三、以索氏為提取方法，用石油醚直接提取和用水提取后用石油醚萃取所得樣品 與GC上檢測(cè)，并對(duì)所得指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
5. 如權(quán)利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，普 通茶葉和大益普洱茶的GC指紋圖譜比較的方法為： 步驟一、按照樣品前處理的方法中的方法對(duì)普通茶葉和普洱茶進(jìn)行考察，所得的各提 取液與GC上檢測(cè)，并對(duì)所得的GC指紋圖譜進(jìn)行分析比較； 步驟二、在普通茶葉與普洱茶的索氏法丙酮提取的GC指紋圖譜比較中，普通茶葉的GC 指紋圖譜在保留時(shí)間為8. 670min?32. 308min范圍內(nèi)具有較多較大的峰，而普洱茶的GC 指紋圖譜則在保留時(shí)間為38. 455min和59. 249min上具有普通茶葉所沒(méi)有的兩個(gè)特征峰； 步驟三、在普通茶葉與普洱茶的勻漿法乙酸乙酯提取的氣相指紋圖譜比較中，整體上 看普通茶葉所具有的特征峰相對(duì)較多。
6. 如權(quán)利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，不 同檢測(cè)器建立的普洱茶GC指紋圖譜整體性比較的方法為： 以丙酮為溶劑，用索氏提取法對(duì)普洱茶進(jìn)行提取，將所提取到的樣品采用ECD和FID檢 測(cè)器的GC上進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)所得的指紋圖譜進(jìn)行比較分析。
7. 如權(quán)利要求1所述的不同提取方法的普洱茶GC指紋圖譜試驗(yàn)方法，其特征在于，GC 檢測(cè)條件為： 進(jìn)樣口溫度：250 °C ;檢測(cè)器溫度：250 °C ;不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1μ 1 ;柱流量： 1. 52ml/min ;總流量：50. Oml/min ;吹掃流量：3. Oml/min ;載氣：高純氮；毛細(xì)管柱： ZB-multiResidue-2,30. OmXO. 25μπιΧ(λ 2mm ;配制ECD和FID，助燃?xì)釮2 :35ml/min ;空氣： 160ml/min ;載氣 N2 :35ml/min ; 程序升溫：柱起始溫度50°C，保持1分鐘；以：TC /min升到80°C，保持2分鐘；再以 5°C /min升到130°C，保持3分鐘；再以3°C /min升到150°C，保持3分鐘；然后再以3°C / min升到180°C，保持2分鐘；最后以8°C /min升到250°C，保持12分鐘；總運(yùn)行時(shí)間：75分 鐘。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104062389SQ201410269561
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月17日
【發(fā)明者】吳娜, 劉衛(wèi), 徐世娟, 周波, 黃篤樹(shù) 申請(qǐng)人:紅河學(xué)院