基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法及用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法及用途，涉及蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域。基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否妊娠的方法包括以下步驟：分別采集待檢測奶牛人工授精0天、人工授精18天的血液樣本；測定奶牛人工授精0天、人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、C2，判定C2大于等于1.6C1，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。BRCA2蛋白的用途，用于診斷奶牛是否妊娠。本發(fā)明能夠在奶牛人工授精后18天進(jìn)行妊娠診斷，只需要采集少量的奶牛血液就可以進(jìn)行診斷，能夠減少對奶牛生殖系統(tǒng)的損傷，節(jié)約勞動力，能夠有效降低飼養(yǎng)管理的成本，提高奶牛場的經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說明】基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法及用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否 妊娠的方法及用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 快速診斷奶牛是否妊娠是改善牛場飼養(yǎng)管理、提高奶牛繁殖率的有效途徑。現(xiàn)有 的奶牛妊娠診斷方法包括直腸觸診法、直腸超聲波法、孕酮測定診斷法、妊娠相關(guān)蛋白測定 法和乳膠凝集實(shí)驗(yàn)法。
[0003] 現(xiàn)有的奶牛妊娠診斷方法存在以下缺陷：
[0004] (1)直腸觸診法是通過實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)豐富的工作人員觸摸奶牛直腸、檢測奶牛的胚胎， 能夠判斷妊娠時(shí)間為40?50天的奶牛是否妊娠，直腸超聲波法是通過專職技術(shù)人員操作 B超儀，對待檢測奶牛進(jìn)行檢測，能夠判斷妊娠時(shí)間為27天的奶牛是否妊娠。
[0005] 直腸觸診法和直腸超聲波法的勞動強(qiáng)度較大，不僅工作效率較低，而且難以在奶 牛妊娠早期進(jìn)行診斷，容易造成奶牛的產(chǎn)犢間隔延長、繁殖率降低、產(chǎn)奶量減少，增加了飼 養(yǎng)管理的成本，降低了奶牛養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。
[0006] 采用直腸觸診法進(jìn)行診斷時(shí)，容易觸及子宮和胎膜，對早期胚胎造成傷害，甚至導(dǎo) 致母牛直腸組織破壞。
[0007] (2)孕酮測定診斷法是通過采集配種21?24天后的奶牛的奶樣，通過測定奶樣中 孕酮的含量判斷對應(yīng)的奶牛是否妊娠。
[0008] 孕酮測定診斷法包括放射免疫測定法和酶免疫測定法，放射免疫法的標(biāo)記物具有 放射性，檢測設(shè)備價(jià)格較高，檢測周期較長；酶免疫測定法時(shí)，存在假陽性問題，難以判斷奶 牛是否妊娠。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種基于BRCA2蛋白、mRNA 診斷奶牛是否妊娠的方法及用途，能夠降低勞動強(qiáng)度強(qiáng)度，提高工作效率，能夠在奶牛妊娠 早期進(jìn)行診斷，不僅成本較低，而且比較準(zhǔn)確。
[0010] 為達(dá)到以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否 妊娠的方法，包括以下步驟：
[0011] 分別采集待檢測奶牛人工授精〇天、人工授精18天的血液樣本；測定奶牛人工授 精0天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的 含量C2,判定C2大于等于1.6C1時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
[0012] 在上述方案的基礎(chǔ)上，所述測定奶牛人工授精0天的血液樣本中BRCA2蛋白的含 量C1、奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C2之后，還包括以下步驟：判定 C2小于1. 6C1時(shí)，重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
[0013] 在上述方案的基礎(chǔ)上，采用蛋白質(zhì)印跡法測定奶牛人工授精0天的血液樣本中 BRCA2蛋白的含量Cl、奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C2。
[0014] 一種BRCA2蛋白的用途，用于診斷奶牛是否妊娠：分別采集待檢測奶牛人工授精0 天、人工授精18天的血液樣本；測定奶牛人工授精0天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、 奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C2,判定C2大于等于1. 6C1時(shí)，確定待 檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
[0015] 一種基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法，包括以下步驟：采集 待檢測奶牛人工授精〇天的血液樣本，作為第一血液樣本；采集待檢測奶牛人工授精18天 的血液樣本，作為第二血液樣本；分別檢測第一血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對 表達(dá)量D1、第二血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2,判定D2大于等于2D1 時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
[0016] 在上述方案的基礎(chǔ)上，所述分別檢測第二血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相 對表達(dá)量D1、第一血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2之后，還包括以下步 驟：判定D2小于2D1時(shí)，重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
[0017] 在上述方案的基礎(chǔ)上，所述提取第一血液樣本中的RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA包括以下 步驟：提取第一血液樣本中的RNA，將第一血液樣本中的RNA反轉(zhuǎn)錄成對應(yīng)的cDNA。
[0018] 在上述方案的基礎(chǔ)上，所述提取第二血液樣本中的RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA包括以下 步驟：提取第二血液樣本中的RNA，將第二血液樣本中的RNA反轉(zhuǎn)錄成對應(yīng)的cDNA。
[0019] 一種BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的用途，用于診斷奶牛是否妊娠：采集待檢測奶牛人 工授精〇天的血液樣本，作為第一血液樣本；采集待檢測奶牛人工授精18天的血液樣本，作 為第二血液樣本；分別檢測第一血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D1、第二 血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2,判定D2大于等于2D1時(shí)，確定待檢測 奶牛已經(jīng)妊娠。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0021] (1)本發(fā)明提供的基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法及用途，能夠在 人工授精后18天，通過檢測奶牛血液樣本中的BRCA2蛋白、mRNA的相對表達(dá)量，診斷該奶 牛是否妊娠，與現(xiàn)有的直腸觸診法相比，不僅能夠減少對奶牛生殖系統(tǒng)的損傷，而且能夠在 奶牛妊娠早期進(jìn)行診斷，有效降低飼養(yǎng)管理的成本，提高奶牛養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。
[0022] (2)本發(fā)明提供的基于BRCA2蛋白、mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法及用途，能夠通 過測定奶牛血液樣本中的BRCA2蛋白和mRNA的相對表達(dá)量，判斷待測奶牛妊娠18天BRCA2 蛋白的含量是否高于奶牛人工授精后〇天BRCA2蛋白的含量的1. 6倍以上；或者判斷奶牛 妊娠18天后BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的表達(dá)量，是否高于2倍的奶牛人工授精0天BRCA2 蛋白對應(yīng)的mRNA的表達(dá)量。與現(xiàn)在生產(chǎn)中常見的妊娠診斷技術(shù)相比，不僅操作比較簡單， 而且準(zhǔn)確度較高。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1為本發(fā)明中不同妊娠時(shí)間下奶牛血清中BRCA2蛋白的含量示意圖；
[0024] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例中不同妊娠時(shí)間下奶牛的血清中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA在 妊娠牛外周血中的表達(dá)規(guī)律示意圖；
[0025] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例中通過灰度法檢測奶牛血清中BRCA2蛋白的表達(dá)結(jié)果示意 圖。

【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0027] 本發(fā)明實(shí)施例提供一種基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否妊娠的方法，包括以下步 驟：
[0028] 分別采集待檢測奶牛人工授精后0天、18天的尾靜脈血，在轉(zhuǎn)速為5000r/min的 條件下離心15min，得到對應(yīng)的血清樣本，將血清樣本放置于體積為1. 5ml的離心管中，將0 天對應(yīng)的血清樣本記錄為第一樣本，將18天對應(yīng)的血清樣本記錄為第二樣本，將第一樣本 和第二樣本放置于溫度為-20°C的條件下保存；
[0029] 采用western blot技術(shù)（蛋白質(zhì)印跡法）檢測第一樣本中BRCA2蛋白的含量C1, 檢測第二樣本中BRCA2蛋白的含量C2,判斷C2是否大于等于1. 6C1，若是，確定待檢測奶牛 已經(jīng)妊娠；若否，采集下一頭待檢測奶牛的血液樣本,重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
[0030] 本發(fā)明實(shí)施例還提供一種基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法， 包括以下步驟：
[0031] 采集待檢測奶牛人工授精后0天的尾靜脈血作為第一血液樣本、采集待檢測奶牛 人工授精后18天的尾靜脈血作為第二血液樣本，將第一血液樣本、第二血液樣本放置于 EDTA抗凝管中；
[0032] 采用天根生化科技（北京）有限公司的RNAprep pure (RNA預(yù)純化）血液總 RNA提取試劑盒分別提取第一血液樣本、第二血液樣本中的RNA，分別取500ngRNA，使用 RevertAid TM First-Strand cDNA Synthesis kit反轉(zhuǎn)錄成對應(yīng)的cDNA，將第一血液樣本 對應(yīng)的cDNA作為第一 cDNA，將第二血液樣本對應(yīng)的cDNA作為第二cDNA ;
[0033] 利用定量PCR分別檢測第一 cDNA、第二cDNA中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表 達(dá)量：判斷第一 cDNA中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量是否大于等于第二cDNA中 BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量的2倍，若是，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠；若否，采集 下一頭待檢測奶牛的血液樣本，重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
[0034] 下面對上述2種方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。
[0035] S1 :采集樣本
[0036] S101 :對若干頭奶牛進(jìn)行人工授精，采集每頭奶牛人工授精0天、14天、18天、21 天、28天后的血樣，每次采集血樣后，均將血樣在轉(zhuǎn)速為5000r/min的條件下離心15min，分 離離心后的血樣，得到血清。將血清收集到1. 5ml離心管中并標(biāo)記，放置于-20°C的條件下 保存。
[0037] S102 :采用直腸檢測法判斷人工授精60天的奶牛是否已經(jīng)妊娠，若是，采集9頭妊 娠奶牛的血清作為妊娠奶牛血清；若否，采集12頭未妊娠奶牛的血清作為空懷奶牛血清。
[0038] S103 :等量量取9頭妊娠奶牛人工授精14天的血清樣本，并混合均勻，得到第一待 測樣本A1 ;等量量取9頭妊娠奶牛人工授精18天的血清樣本，并混合均勻，得到第二待測 樣本A2 ;等量量取9頭妊娠奶牛人工授精21天的血清樣本，并混合均勻，得到第三待測樣 本A3 ;等量量取9頭妊娠奶牛人工授精28天的血清樣本，并混合均勻，得到第四待測樣本 A4。
[0039] S104 :等量量取12頭空懷奶牛人工授精14天的血清樣本，并混合均勻，得到第一 對比樣本B1 ;等量量取12頭空懷奶牛人工授精18天的血清樣本，并混合均勻，得到第二對 比樣本B2 ;等量量取12頭空懷奶牛人工授精21天的血清樣本，并混合均勻，得到第三對比 樣本B3 ;等量量取12頭空懷奶牛人工授精28天的血清樣本，并混合均勻，得到第四對比樣 本B4。
[0040] S105 :等量量取9頭妊娠奶牛、12頭空懷奶牛人工授精0天的血清樣本，并混合均 勻，得到第一空白樣本AB1。
[0041] S2 :去除所有血清樣本中的高豐度蛋白，對所有血清樣本的體積進(jìn)行定量。
[0042] 分別量取20 μ 1第一待測樣本Α1、20 μ 1第二待測樣本Α2、20 μ 1第三待測樣本 Α3、20 μ 1第四待測樣本Α4、20 μ 1第一對比樣本Β1、20 μ 1第二對比樣本Β2、20 μ 1第三對 比樣本Β3、20μ 1第四對比樣本Μ和20μ 1第一空白樣本ΑΒ1。
[0043] 向上述所有樣本中分別加入450 μ 1 Binding Buffer (結(jié)合緩沖）溶液并混合均 勻，得到對應(yīng)的樣本稀釋液。
[0044] 將850 μ 1 Binding Buffer溶液加入去血清高豐度蛋白柱后，將所有的樣本混合 液依次加入去血清高豐度蛋白柱，并收集對應(yīng)的穿流液，得到對應(yīng)的樣本穿流液。
[0045] 分別將所有的樣本穿流液放入型號為10kD (蛋白質(zhì)分子量單位）的超濾離心管 中離心至100 μ 1，得到對應(yīng)的樣本濃縮液，采用由Bradford(美國伯樂）生產(chǎn)的bio-Rad protein assay kit(蛋白質(zhì)含量測定）試劑盒測定每個(gè)樣本濃縮液的濃度。
[0046] S3 :對每個(gè)所有樣本進(jìn)行SDS-PAGE (十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠）電泳
[0047] 分別取20 μ g所有樣本的樣本濃縮液，向每份樣本濃縮液中加入4μ g上樣緩沖 液，置于沸水中保溫5min后，在離心力為14000g(g為離心力單位）的條件下離心20min， 取上清液，將上清液加入濃度為12. 5 %的SDS-PAGE中，在橫流電流為14mA的條件下電泳 90min后，使用考馬斯亮藍(lán)（一種染料名稱）進(jìn)行染色，得到所有樣本的樣本濃縮液的電泳 圖譜。
[0048] S4 :酶解、肽段定量和肽段標(biāo)記
[0049] 分別取200 μ g所有樣本的樣本濃縮液，向每份樣本濃縮液中加入30 μ 1 SDT溶 液，SDT溶液由4% SDS (十二烷基硫酸鈉）、100mMTris-HCl (三羥甲基氨基甲烷）、100mM DTT (二硫蘇糖醇）混合后調(diào)節(jié)pH至7. 6而制成，并混合均勻，置于沸水中保溫5min后，冷卻 至室溫并加入200μ1 UA buffer(尿素緩沖溶液）（尿素緩沖溶液由濃度為8M的Urea和濃 度為150mM、pH為8. 0的三羥甲基氨基甲烷鹽酸溶液配置而成）混合均勻，放入型號為30kD 的超濾離心管中，在離心力為14000g的條件下離心30min，去除濾液后，加入100μ 1濃度 為50mM的ΙΑΑ (Indol-yl-3-Acetic Acid，吲哚乙酸）溶液，在轉(zhuǎn)速為600rpm的條件下震蕩 lmin，并于室溫下避光放置30min后，在離心力為14000g的條件下離心20min，加入100 μ 1 UA buffer(sodium hypochlorite buffer,次氯酸鈉緩沖溶液），在離心力為14000g的條 件下離心20min后，再次加入100μ 1 UA buffer,在離心力為14000g的條件下離心20min 后，加入40μ 1 Trypsin buffer(胰酶緩沖溶液，由2μ g的胰酶溶解于40μ 1的分散液中制 成），在震蕩速度為600rpm的條件下振蕩lmin后，在溫度為37°C的條件下靜置16?18h， 在離心力為14000g的條件下離心10min后，得到濾液，濾液為0D280肽段溶液。
[0050] 定量分析所有0D280肽段溶液，測定所有0D280肽段溶液中0D280肽段的濃度。
[0051] 分別取100 μ g所有的0D280肽段溶液，分別加入由ABI公司生產(chǎn)的型號為iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit的試劑盒（一種用于對肽段進(jìn)行同位素相對標(biāo)記與絕對定 量的試劑盒）進(jìn)行標(biāo)記。iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit的試劑盒中的iTRAQ試劑 包括肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán)、8個(gè)報(bào)告基團(tuán)和8個(gè)質(zhì)量平衡基團(tuán)。
[0052] 8個(gè)報(bào)告基團(tuán)的相對分子質(zhì)量分別為113、114、115、116、117、118、119和121，與上 述報(bào)告基團(tuán)對應(yīng)的8個(gè)平衡基團(tuán)的相對分子質(zhì)量分別為32、31、30、29、28、27、26和24，所有 0D280肽段溶液中的多肽通過iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit的試劑盒（下文中簡 稱為試劑盒Kit)標(biāo)記后均能形成8種相對分子質(zhì)量為145的等量異位標(biāo)簽。
[0053] 參見表1、表2所示，第一空白樣本AB1對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相 對分子量為113的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記。
[0054] 第一待測樣本A1對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子量分別為114、 118的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第二待測樣本A2對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子 量分別為115U19的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第三待測樣本A3對應(yīng)的0D280肽段溶液被iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit的試劑盒中相對分子量分別為116、118的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記； 第四待測樣本A4對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子量分別為117、119的報(bào) 告基團(tuán)標(biāo)記。
[0055] 第二待測樣本A2對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子量分別為115、 119的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第一對比樣本B1對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子量 為114的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第二空白樣本B2對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分子 量為115的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第三對比樣本B3對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對分 子量為116的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記；第四對比樣本Μ對應(yīng)的0D280肽段溶液被試劑盒Kit中相對 分子量為117的報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記。
[0056] 表1、第一樣本標(biāo)記
[0057]

【權(quán)利要求】
1. 一種基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征在于，包括以下步驟： 分別采集待檢測奶牛人工授精〇天、人工授精18天的血液樣本；測定奶牛人工授精0 天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量 C2,判定C2大于等于1. 6C1時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
2. 如權(quán)利要求1所述的基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征在于：所述 測定奶牛人工授精〇天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、奶牛人工授精18天的血液樣本 中BRCA2蛋白的含量C2之后，還包括以下步驟：判定C2小于1. 6C1時(shí)，重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的基于BRCA2蛋白診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征在于： 采用蛋白質(zhì)印跡法測定奶牛人工授精〇天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C1、奶牛人工授 精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C2。
4. 一種BRCA2蛋白的用途，其特征在于：用于診斷奶牛是否妊娠：分別采集待檢測奶 牛人工授精〇天、人工授精18天的血液樣本；測定奶牛人工授精0天的血液樣本中BRCA2 蛋白的含量C1、奶牛人工授精18天的血液樣本中BRCA2蛋白的含量C2,判定C2大于等于 1. 6C1時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
5. -種基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征在于，包括以下 步驟： 采集待檢測奶牛人工授精〇天的血液樣本，作為第一血液樣本；采集待檢測奶牛人工 授精18天的血液樣本，作為第二血液樣本；分別檢測第一血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的 mRNA的相對表達(dá)量D1、第二血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2,判定D2 大于等于2D1時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
6. 如權(quán)利要求5所述的基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征 在于：所述分別檢測第二血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D1、第一血液樣 本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2之后，還包括以下步驟：判定D2小于2D1時(shí)， 重復(fù)執(zhí)行所有步驟。
7. 如權(quán)利要求5或6所述的基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法，其 特征在于，所述提取第一血液樣本中的RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA包括以下步驟：提取第一血液 樣本中的RNA，將第一血液樣本中的RNA反轉(zhuǎn)錄成對應(yīng)的cDNA。
8. 如權(quán)利要求7所述的基于BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA診斷奶牛是否妊娠的方法，其特征 在于，所述提取第二血液樣本中的RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA包括以下步驟：提取第二血液樣本 中的RNA，將第二血液樣本中的RNA反轉(zhuǎn)錄成對應(yīng)的cDNA。
9. 一種BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的用途，其特征在于：用于診斷奶牛是否妊娠：采集待 檢測奶牛人工授精〇天的血液樣本，作為第一血液樣本；采集待檢測奶牛人工授精18天的 血液樣本，作為第二血液樣本；分別檢測第一血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表 達(dá)量D1、第二血液樣本中BRCA2蛋白對應(yīng)的mRNA的相對表達(dá)量D2,判定D2大于等于2D1 時(shí)，確定待檢測奶牛已經(jīng)妊娠。
【文檔編號】G01N33/68GK104111339SQ201410294733
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月26日
【發(fā)明者】程蕾, 王定發(fā), 劉曉華, 向敏, 凌明湖, 胡修忠, 夏瑜 申請人:武漢市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所