一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥物分析領域，具體涉及一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法。色譜條件為：C18(4.6×250mm?5μm)，以乙腈-水梯度洗脫，洗脫體積比為70％：30％(0min)，70％：30％(25min)，85％：15％(35min)，70％：30％(45min)，使用DAD檢測器，檢測波長為216nm。該檢測方法準確可靠、分離效果好，專屬性強，能高效測定蒿乙醚中有關物質和含量。
【專利說明】一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定蒿乙醚含量及有關物質的高效液相色譜法，屬于藥物分析領域。

【背景技術】
[0002]蒿乙醚(結構式見附圖1)是一種衍生自黃花蒿的抗瘧化合物。分子式=C17H28O5,白色結晶或結晶性粉末。蒿乙醚為二氫青蒿素的乙醚衍生物，其已經進行了廣泛的臨床前、動物和毒理學研究以及為藥物調控，目前已被證實具有前景的活性，并且蒿乙醚可治療無并發(fā)癥的瘧疾，有嚴重并發(fā)癥的瘧疾、腦瘧疾和多藥性瘧疾。而且蒿乙醚比青蒿素更有效，其表現出清除率更快的殺裂繁體作用、沒有副作用的短的發(fā)熱清除時間和低的復發(fā)率，對瘧原蟲無性體有較強的殺滅作用，能迅速控制癥狀。世界衛(wèi)生組織(WHO)也已經將蒿乙醚作為治療生命的抗瘧藥物。但是對于蒿乙醚原料藥中蒿乙醚含量及有關物質的測定目前卻少有研究，《國際藥典》2011版對蒿乙醚的含量和相關物質的測定是采用高效液相色譜法，色譜條件里的波長為210nm，流動相選用乙腈-水(62:38)等度洗脫。就國際藥典檢測蒿乙醚含量和相關雜質的方法中，等度洗脫不能完全分離蒿乙醚原料中的有關物質，對于蒿乙醚純度和有關物質的含量檢測存在誤差，并且該檢測方法使蒿乙醚樣品的色譜峰存在拖尾現象，拖尾因子T = 1.2不符合中國藥典2010版規(guī)定的T = 0.95?1.05。為了解決上述問題本發(fā)明提供的檢測方法是采用乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，建立一種新的蒿乙醚原料藥中蒿乙醚含量和有關物質的檢測方法，該檢測方法使色譜峰分離效果很好，分離度大于1.5符合中國藥典2010版標準，并且色譜峰無拖尾現象，拖尾因子T = 0.98符合中國藥典2010版的規(guī)定。所以該檢測方法對蒿乙醚原料藥的質量控制和雜質分析具有重要的應用價值。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明經多次精密試驗提供一種更準確、高效的測定蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，用于蒿乙醚原料藥的質量控制。為達到目的，本發(fā)明采用了如下技術方案:
[0004]本發(fā)明的一個具體的實施例中，本發(fā)明采用Agilent高效液相色譜儀測定蒿乙醚含量和有關物質，其選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫。
[0005]本發(fā)明又一個具體的實施例中，十八烷基鍵合硅膠色譜填料顆粒度為3-5 μ m,優(yōu)選4.6 μ m,色譜柱的長度為150mm或250mm,優(yōu)選250mm。
[0006]本發(fā)明再一個具體的實施例中，所述乙腈-水梯度洗脫的體積比為70%:30%(Omin) ,70%:30% (25min) ,85%:15% (35min) ,70%:30% (45min)。
[0007]本發(fā)明再一個具體的實施例中，利用DAD檢測器進行190nm—400nm全波長掃描(圖譜見圖5)，結果蒿乙醚在190-250nm范圍處有較大吸收，最大吸收波長為216nm，此波長下蒿乙醚的相關物質也有較好的吸收，因此選擇216nm作為蒿乙醚含量和有關物質測定的檢測波長。
[0008]本發(fā)明再一個具體的實施例中，利用標準品溶液多次進樣來確定進樣量，進樣精密度試驗次數為6次，所得最佳進樣量為20 μ I。
[0009]本發(fā)明還一個具體的實施例中，所述流動相的流速為0.5-1.2ml/min,優(yōu)選Iml/min，其特點在于選用上述流速所得蒿乙醚樣品有很好分離，樣品分離度均大于1.5，符合中國藥典2010版的規(guī)定。
[0010]本發(fā)明提供的一種HPLC法測定蒿乙醚有關物質的方法，其包括以下步驟:
[0011]標準品溶液配制:取蒿乙醚標準品適量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚濃度為5mg/ml的標準品溶液。
[0012]供試品溶液配制:取蒿乙醚原料藥適量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚濃度為5mg/ml的供試品溶液。
[0013]對照品溶液配制:取上述蒿乙醚標準品溶液Iml置于200ml容量瓶，用乙腈稀釋至定容，配制成蒿乙醚濃度為0.025mg/ml對照品溶液。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為蒿乙醚結構式
[0015]圖2為蒿乙醚供試品液相色譜圖
[0016]圖3為蒿乙醚標準品液相色譜圖
[0017]圖4為蒿乙醚對照品液相色譜圖
[0018]圖5為蒿乙醚檢測波長掃描圖譜

【具體實施方式】
[0019]色譜條件:
[0020]采用Agilent高效液相色譜儀,用色譜柱C18 (4.6x250mm 5 μ m),以乙腈-水梯度洗脫，洗脫體積比為 70%:30% (Omin) ,70%:30% (25min) ,85%:15% (35min) ,70%:30%(45min)，檢測器為DAD檢測器，檢測波長216nm，流速為lml/min，進樣量為20 μ I。
[0021]分別取供試品溶液和標準品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明色譜條件進行測定，含量按如下公式計算:
[0022]蒿乙醚含量(％) = (A1XC2)/(A2XC1)
[0023]其中Al為待測樣品峰面積
[0024]A2為標準品峰面積
[0025]Cl待測樣品濃度(mg/ml)
[0026]C2標準品濃度(mg/ml)
[0027]分別取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明色譜條件進行測定，供試品如有雜質峰，雜質含量按如下公式計算:
[0028]蒿乙醚有關物質含量(％) = (AX I X 10 XW2)/(BX 10 X 200 Xffl)
[0029]其中，A為供試品溶液中雜質峰的峰面積；
[0030]B為對照品溶液中蒿乙醚的峰面積；
[0031]Wl為配制蒿乙醚供試品溶液時稱量的重量；
[0032]W2為配制蒿乙醚標準品溶液時稱量的重量。
[0033]實施例1
[0034]實驗材料:按照上述色譜條件，對本公司實驗室已標定蒿乙醚供試品含量為99.1 %，單雜為0.26%，總雜為0.41%，0.25%與0.5%質檢的雜質個數為I個。蒿乙醚標準品，購自中國藥品生物制品檢定所，含量為99.3%。
[0035]色譜條件:采用Agilent高效液相色譜儀，DAD檢測器，色譜柱C18(4.6x250mm5 μ m),進樣量為20 μ I,流速為1.0ml/min,檢測波長為216nm,以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，其梯度比如表I。
[0036]表I乙腈-水梯度比
[0037]
時間(min)乙腈(v/v%)水(v/v%)
[0038]
O7030
257030
358515
457030
[0039]實驗步驟:
[0040]取本公司蒿乙醚適量，用乙腈溶解并定容，配制成濃度為5mg/ml的蒿乙醚供試品溶液，供試品溶液同法重復配制3次。
[0041]取蒿乙醚標準品適量，用乙腈溶解并定容，配制成濃度為5mg/ml的蒿乙醚標準品溶液，標準品溶液同法重復配制3次。
[0042]分別取供試品溶液和標準品溶液，注入液相色譜儀，按照本發(fā)明色譜條件進行測定并記錄色譜圖，其中同一標準品重復進樣5次，供試品溶液和標準品溶液所得峰面積按上述含量計算公式計算供試品中蒿乙醚的含量。
[0043]圖2為供試品蒿乙醚色譜圖，蒿乙醚主峰保留時間為15.88min，供試品中分離出兩種雜質，保留時間分別為4.2min和10.5min，兩雜質峰與主峰分離度分別為3.78和
1.51，分離效果良好(均大于1.5)，符合2010版中國藥典的標準。標準品溶液重復進樣5次所得峰面積RSD值為0.27%。供試品和標準品3個樣品峰面積平均值分別為2764.8956和2758.0162，按上述含量計算公式計算本公司蒿乙醚含量為99.2%，計算結果如下表2。
[0044]表2蒿乙醚供試品測定結果如下表
[0045]

【權利要求】
1.一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:采用高效液相色譜法測定蒿乙醚含量及有關物質，選用高效液相色譜儀為美國Agi Ient，十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，DAD檢測器，最佳檢測波長為216nm。
2.根據權利要求1所述的一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:所述十八燒基鍵合娃膠色譜柱填料的顆粒粒徑為3-5 μ m,優(yōu)選4.6 μ m。
3.根據權利要求1所述的一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:選用色譜柱長為150mm或為250mm,流速為1.0ml/min。
4.根據權利要求1所述的一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:乙腈-水梯度洗脫的體積比為70%:30% (Omin), 70%:30% (25min),85%:15%(35min) ,70%:30% (45min)。
5.如權利要求1、2、3所述的一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:所述色譜柱規(guī)格為(4.6 X 250mm 5 μ m)。
6.如權利要求1所述的一種檢測蒿乙醚含量和有關物質的高效液相色譜法，其特征在于:本發(fā)明溶解樣品的有機溶劑為乙腈。
【文檔編號】G01N30/02GK104165941SQ201410356326
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月24日 優(yōu)先權日:2014年7月24日
【發(fā)明者】張梅, 彭學東, 趙金召, 祁法娟 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司