抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體及其用途，尤其是一種可特異性識別聯(lián)苯菊酯的單克隆抗體，產(chǎn)生所述單克隆抗體的雜交瘤，以及所述單克隆抗體的用途，屬于生物學領(lǐng)域。將其人工抗原免疫BALB/c雌性小鼠，將骨髓瘤細胞SP2/0與小鼠脾臟細胞進行細胞融合，制備得到雜交瘤細胞；通過系列篩選和亞克隆得到能穩(wěn)定分泌抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的雜交瘤細胞株；再將該雜交瘤細胞株注射小鼠腹內(nèi)制得腹水；采用辛酸-硫酸銨法純化小鼠腹水，得到所述的單克隆抗體。制得聯(lián)苯菊酯的特異性單克隆抗體。這種抗體與其他化合物不發(fā)生交叉反應。用該抗體建立的酶聯(lián)免疫層析分析方法可用于快速、靈敏、方便和廉價檢測環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品中聯(lián)苯菊酯殘留。
CCTCC No.C2014135
2014.07.11
【專利說明】抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體，尤其是一種可特異性識別聯(lián)苯菊酯的單 克隆抗體，產(chǎn)生所述單克隆抗體的雜交瘤，以及該單克隆抗體的用途，屬于生物學技術(shù)領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] 擬除蟲菊酯類（Pyrethroids)殺蟲劑是根據(jù)天然除蟲菊素的化學結(jié)構(gòu)而仿制成 的一類超高效殺蟲劑，由于其殺蟲譜廣，效果好、低殘留，無蓄積作用等優(yōu)點，近30年來應 用日益普遍。擬除蟲菊酯類殺蟲藥主要用于殺滅棉花、蔬菜、果樹、茶葉等農(nóng)作物上的害蟲， 是一種廣譜商效的殺蟲劑。聯(lián)苯菊酯酯化學名稱為（1R，S)-順式-(Z)-3-(2-氯-3,3,3-二 氟_1_丙烯基） _2, 2-二甲基-環(huán)丙燒羧酸-2-甲基_3_苯基節(jié)酯，聯(lián)苯菊酯（Bifenthrin) 作為一種強烈的驅(qū)白蟻藥劑，具有預防、滅治雙重效果，于2001年被中國物協(xié)白蟻防治專 業(yè)委員會列為城市房屋預防白蟻的5種藥劑之一。在保證作為土壤化學屏障的聯(lián)苯菊酯施 藥量的同時，也要預防其應用存在的潛在風險，因此需要建立一種針對聯(lián)苯菊酯的靈敏、快 速、選擇性的殘留檢測方法。
[0003]目前聯(lián)苯菊酯的殘留檢測方法大多采用儀器分析方法，如氣相色譜分析法。這些 儀器分析方法靈敏準確，但檢測儀器昂貴、樣品前處理較繁瑣、檢測費時費力、難以滿足大 量樣品快速簡便檢測的需要。
[0004] 免疫檢測方法具有快速、廉價、簡便、靈敏、特異的優(yōu)點，在大量樣品快速篩選和現(xiàn) 場監(jiān)測中顯示出獨特優(yōu)勢。酶聯(lián)免疫分析（ELISA)是一種將酶催化反應和免疫反應相結(jié)合 的免疫標記測定技術(shù)，有酶催化反應的高靈敏度和抗原抗體反應的高特異性，在靈敏度方 面有很大的優(yōu)勢。ELISA作為一種快速靈敏的檢測方法，在許多小分子免疫分析中已得到較 成熟的應用。通過制備針對聯(lián)苯菊酯的特異性抗體，建立聯(lián)苯菊酯免疫學檢測方法。該發(fā) 明方法的完成，將解決聯(lián)苯菊酯抗體制備關(guān)鍵技術(shù)，建立聯(lián)苯菊酯的ELISA快速檢測技術(shù)。 該發(fā)明為建立防治白蟻的土壤化學屏障提供有效的技術(shù)手段和檢測方法，具有重要的現(xiàn)實 意義和重要的社會、經(jīng)濟價值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體及 其對環(huán)境或農(nóng)產(chǎn)品中的聯(lián)苯菊酯進行免疫檢測的用途。
[0006] 按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，所述抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體，由保藏編號為CCTCC No.C2014135的雜交瘤細胞株3D4產(chǎn)生，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址為中國 武漢武漢大學，保藏日期為2014年7月11日。
[0007] 所述雜交瘤細胞株3D4,其保藏編號為CCTCCNo.C2014135。
[0008] 所述抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征是，包括以下步驟：
[0009] (1)將式（I)所示的免疫半抗原偶聯(lián)BSA制備得到免疫原；
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體，由保藏編號為CCTCC No. C2014135的雜交瘤細胞株產(chǎn) 生。
2. -種雜交瘤細胞株，其保藏編號為CCTCC NO.C2014135。
3. -種抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征是，包括以下步驟： (1) 將式（I )所示的免疫半抗原偶聯(lián)BSA制備得到免疫原；
(2) 用免疫原免疫BALB/c小鼠，免疫劑量為IOOii L免疫原/只，共免疫五次；首次免 疫由等體積的免疫原和弗氏完全佐劑乳化，腹腔注射，之后用等體積免疫抗原和弗氏不完 全佐劑乳化；從第三次免疫開始，每次免疫后尾靜脈采血，測定效價； (3) 待效價穩(wěn)定后，將骨髓瘤細胞SP2/0與上述效價最好的小鼠脾臟細胞進行細胞融 合，脾臟細胞與骨髓瘤細胞SP2/0的比例為10 :1，制備得到雜交瘤細胞； (4) 通過系列篩選和亞克隆得到能穩(wěn)定分泌抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的雜交瘤細胞株； 再將該雜交瘤細胞株注射小鼠腹內(nèi)制得腹水； (5) 采用辛酸-硫酸銨法純化小鼠腹水，得到所述的單克隆抗體。
4. 如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備用于檢測聯(lián)苯菊酯的檢測工具中的應用。
5. 如權(quán)利要求4所述的應用研究，所述檢測工具為試劑盒、芯片或試紙。
【文檔編號】G01N33/577GK104327186SQ201410359926
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】陸藝文, 王鳴華, 夏亞中, 華修德, 周秋君, 李偉 申請人:無錫市白蟻防治中心, 南京農(nóng)業(yè)大學