化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法
【專利摘要】化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法，檢測步驟如下：配制甲醇-水醋酸銨溶液和醋酸銨溶液；配制用于標準曲線繪制的標準溶液；液相色譜分析；質(zhì)譜確證；樣品溶液的制備；定性分析；定量測定；用標準曲線外標法確定樣品溶液中目標物的含量，。本方法具有簡便易行、成本低、精準度高、14種禁用著色劑可同時檢測的優(yōu)點。
【專利說明】化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測方法，特別是一種化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 著色劑(也稱色素）作為化妝品原料之一，在化妝品中廣泛使用。普通化妝品中使 用著色劑的目的是用來使產(chǎn)品著色，還可以調(diào)整某些原料對產(chǎn)品色調(diào)的影響，用以區(qū)分不 同的產(chǎn)品品種。在彩妝化妝品中使用則主要起到美化、修飾的作用。
[0003] 著色劑按照性能和著色方式可分為染料和顏料兩大類，染料又分為天然染料和合 成染料，顏料則分為無機顏料和有機顏料。按照來源方式，可分為天然著色劑和合成著色 劑兩大類。其中天然染料和無機顏料一般屬于天然著色劑，合成著色劑則包括合成染料及 有機顏料。大多數(shù)的合成著色劑多來自煤焦油產(chǎn)物，往往會對人體造成不同程度的危害，例 如，導致生育能力下降、畸胎，甚至誘發(fā)癌癥，一些合成色素可引起光敏反應。目前，化妝品 對于一些人而言已成為生活必需品，為安全起見，世界上許多國家均對化妝品用著色劑作 了相關(guān)規(guī)定。我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007)參照《歐盟化妝品規(guī)程》并結(jié)合中國的特點， 對化妝品用著色劑的品種、使用范圍和限制條件都做出了明確的規(guī)定。
[0004] 衛(wèi)生部《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版)禁用物質(zhì)列表中明確涉及的著色劑包括聯(lián)苯 胺基偶氮染料(第270條)，鄰-聯(lián)茴香胺基偶氮染料(第926條)，鄰-聯(lián)甲苯胺基染料(第 931條)外，還包括第369-378條共10條(涉及13種著色劑)，第310條(蘇丹I)和第451條 (分散黃3)。根據(jù)毒理學實驗數(shù)據(jù)給出評估的結(jié)果表明，在化妝品中使用禁用著色劑能引起 皮膚過敏、毒性反應、甚至誘發(fā)癌癥。
[0005] 《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）雖然給出了禁用的著色劑原料表，但同時并未給出 化妝品諸多著色劑檢測相應的標準檢測方法，這就給生產(chǎn)監(jiān)管和產(chǎn)品品質(zhì)保證造成了技術(shù) 上的困難。因此，有必要研制快速、準確、靈敏的檢測方法，為化妝品的質(zhì)量監(jiān)管提供有效的 技術(shù)支持和有力保障。
[0006] 目前，對化妝品中著色劑的檢測，國內(nèi)外有文獻報道的方法包括：薄層色譜法、膠 束電動色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS)、高效液相色譜-紫外可見檢測法 (HPLC- UV)及高效液相色譜-二極管陣列檢測法（HPLC-DAD)。所查文獻中共涉及禁用著色 劑 11 種（蘇丹紅 IV(C.I. 26105)、酸性紫 49(C.I. 42640)、蘇丹藍 2(C.I. 61554)、溶劑 紅 49 (C.I. 45170:1)、堿性紫 1(C.I. 42535)、顏料橙 5 (C.I. 12075)、酸性黃 36 (C.I. 13065)、顏料紅 53:1 (C.I. 15585:1)、蘇丹紅 II(C.I. 12140)及羅丹明B(C.I. 45170)， 單種方法最多涉及禁用著色劑7種（蘇丹紅IV (C.I. 26105)、酸性紫49 (C.I. 42640)、蘇 丹藍 2 (C.I. 61554)、溶劑紅 49 (C.I. 45170:1)、堿性紫 1(C.L 42535)、顏料橙 5(C.I. 12075)、顏料紅 53 (C.I. 15585))。
[0007] 樣品前處理大多采用溶劑萃取、固相萃取、液液萃取等方法。色譜分離均采用常用 的C18色譜柱，流動相則多用甲醇或乙腈與磷酸鹽或醋酸銨緩沖液的梯度洗脫程序，也有 用四丁基氫氧化銨做離子對試劑來增強水溶性目標物的色譜保留。檢測波長則多采用240 nm，480 nm，520 nm等波長。液質(zhì)聯(lián)用在著色劑檢測領(lǐng)域的應用目前還不十分普遍。
[0008] 在檢測標準領(lǐng)域，目前化妝品著色劑檢測尚無任何現(xiàn)行的國家標準。國標計劃 20090914-T-607《化妝品中羅丹明B等4種禁用著色劑的測定高效液相色譜法》，涉及4種 禁用著色劑，目前處于標準報批階段，尚未正式發(fā)布。國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布化妝品 檢測方法中，國食藥監(jiān)保化[2012] 13號附件15方法，涉及5種禁用著色劑(酸性黃36(C. I. 13065)、顏料橙 5 (C.I. 12075)、顏料紅 53:1 (C.I. 15585:1)、蘇丹紅 II(C.I. 12140)和 蘇丹紅IV(C. I. 26105))。通過文獻研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有檢測方法和手段很難滿足目前化妝品領(lǐng) 域?qū)弥珓┦褂冒踩馁|(zhì)量監(jiān)管要求?；瘖y品中禁用著色劑多組分檢測尚存在很大的 研究空白。這使得化妝品尤其是彩妝類化妝品的質(zhì)量安全引發(fā)社會的廣泛關(guān)注。為此，力口 快化妝品中禁用著色劑的檢測方法開發(fā)，滿足日益增長的化妝品安全監(jiān)管需要，意義尤為 重大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種簡便易行、14種禁用著色劑可同時檢測、提高工作效率、 降低檢測成本的化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0010] 本發(fā)明的化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法，所述的著色劑為：吖啶黃、 溶劑藍35、溶劑紅49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、顏料橙5、顏料紅53、氯化五甲基 副玫瑰苯胺、蘇丹紅II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅IV、羅丹明B、分散黃3、蘇丹I ;其 特征在于：檢測步驟如下： (1) 鹽溶液的配制 將醋酸銨加入到甲醇和水的混合溶液中，甲醇與水的體積比為1 : 1，醋酸銨充分溶解 后得甲醇-水醋酸銨溶液，醋酸銨濃度為50 ~250 mmol/L ; 將醋酸銨加入到水中充分溶解，制得濃度為10?50 mmol/L的醋酸銨溶液； (2) 標準溶液的配制 分別等量稱取吖啶黃、溶劑藍35、溶劑紅49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、顏料 橙5、顏料紅53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅IV、羅 丹明B、分散黃3、蘇丹I并置于同一容量瓶中，用體積比為1 : 1的甲醇和四氫呋喃溶液充 分溶解并定容至刻線，配制成各目標物濃度均為20 μ g/mL的混合標準溶液，再用體積比 為1 : 1的甲醇和四氫呋喃溶液逐級稀釋配制一系列各目標物濃度分別為5、2、1、0.5、0.2 μ g/mL的混合標準溶液，用于標準曲線的繪制； (3) 樣品溶液的制備： 稱取待測化妝品樣品置于離心管中，向離心管內(nèi)加入四氫呋喃，待測化妝品與四氫呋 喃的用量比為0.2 g : 6 mL，渦旋并超聲10 min，使樣品分散或用80 °C水浴并適當加熱 1~2 min，提取目標物，向離心管中加入第（1)步所得的甲醇-水醋酸銨溶液，四氫呋喃與甲 醇-水醋酸銨溶液的用量比為6 mL : 4 mL，使提取溶液定容至四氫呋喃與甲醇-水醋酸銨 溶液之和，渦旋混勻后超聲10 min，然后于5000 r/min離心10 min;取澄清提取液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后待測； (4) 液相色譜分析，參考條件如下： 色譜柱：P〇roshell 120 EC-C18,2.7ym，3.0 mmXlOO mm 或者相當者；柱溫：35 °C ; 流速：0· 5 mL/min ;進樣量：2 μ L ;用DAD檢測器檢測波長：416 nm、514 nm、590 nm ;流動 相：A為第（1)步制得的10?50 mmol/L醋酸銨溶液，B乙腈，梯度洗脫； (5) 質(zhì)譜確證，參考條件如下： 液相色譜條件：色譜柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7 μηι，3·0 mmXlOO mm或者相當者； 流速：0. 5 μ L/min ;進樣量：2 μ L ;流動相：A水相溶液，負模式為10mm〇l/L醋酸銨溶 液；正模式為〇. 33%。甲酸溶液，B有機相溶液，負模式為乙腈和甲醇，乙腈和甲醇的體積比 為6 : 4;正模式為乙腈，梯度洗脫； 質(zhì)譜參考條件：離子源：電噴霧電離源（ESI源）;檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM);霧化氣： 氮氣，35 Psi ;干燥氣：氮氣，流速10 L/min，溫度：350 °C ;碰撞氣：氮氣；碰撞電壓：380V ; 毛細管電壓：4000 V ;其他質(zhì)譜參數(shù)如下： 目標物的質(zhì)譜分析參考參數(shù)

【權(quán)利要求】
1. 一種化妝品中14種禁用著色劑同時檢測的方法，所述的著色劑為：吖啶黃、溶劑藍 35、溶劑紅49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、顏料橙5、顏料紅53、氯化五甲基副玫瑰 苯胺、蘇丹紅II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅IV、羅丹明B、分散黃3、蘇丹I ;其特征在 于：檢測步驟如下： (1) 鹽溶液的配制 將醋酸銨加入到甲醇和水的混合溶液中，甲醇與水的體積比為1 : 1，醋酸銨充分溶解 后得甲醇-水醋酸銨溶液，醋酸銨濃度為50 ~250 mmol/L ; 將醋酸銨加入到水中充分溶解，制得濃度為10?50 mmol/L的醋酸銨溶液； (2) 標準溶液的配制 分別等量稱取吖啶黃、溶劑藍35、溶劑紅49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、顏料 橙5、顏料紅53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、蘇丹紅IV、羅 丹明B、分散黃3、蘇丹I并置于同一容量瓶中，用體積比為1 : 1的甲醇和四氫呋喃溶液充 分溶解并定容至刻線，配制成各目標物濃度均為20 μ g/mL的混合標準溶液，再用體積比 為1 : 1的甲醇和四氫呋喃溶液逐級稀釋配制一系列各目標物濃度分別為5、2、1、0. 5、0. 2 μ g/mL的混合標準溶液，用于標準曲線的繪制； (3) 樣品溶液的制備： 稱取待測化妝品樣品置于離心管中，向離心管內(nèi)加入四氫呋喃，待測化妝品與四氫呋 喃的用量比為0.2 g : 6 mL，渦旋并超聲10 min，使樣品分散或用80 °C水浴并適當加熱 1~2 min，提取目標物，向離心管中加入第（1)步所得的甲醇-水醋酸銨溶液，四氫呋喃與甲 醇-水醋酸銨溶液的用量比為6 mL : 4 mL，使提取溶液定容至四氫呋喃與甲醇-水醋酸銨 溶液之和，渦旋混勻后超聲10 min，然后于5000 r/min離心10 min;取澄清提取液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后待測； (4) 液相色譜分析，參考條件如下： 色譜柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7ym，3.0 mmXlOO mm 或者相當者；柱溫：35 °C ; 流速：0· 5 mL/min ;進樣量：2 μ L ;用DAD檢測器檢測波長：416 nm、514 nm、590 nm ;流動 相：A為第（1)步制得的10?50 mmol/L醋酸銨溶液，B乙腈，梯度洗脫； (5) 質(zhì)譜確證，參考條件如下： 液相色譜條件：色譜柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7 μηι，3·0 mmXlOO mm或者相當者； 流速：0. 5 μ L/min ;進樣量：2 μ L ;流動相：A水相溶液，負模式為10mm〇l/L醋酸銨溶 液；正模式為〇. 33%。甲酸溶液，B有機相溶液，負模式為乙腈和甲醇，乙腈和甲醇的體積比 為6 : 4;正模式為乙腈，梯度洗脫； 質(zhì)譜參考條件：離子源：電噴霧電離源（ESI源）;檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM);霧化氣： 氮氣，35 Psi ;干燥氣：氮氣，流速10 L/min，溫度：350 °C ;碰撞氣：氮氣；碰撞電壓：380V ; 毛細管電壓：4000 V ;其他質(zhì)譜參數(shù)如下： 目標物的質(zhì)譜分析參考參數(shù)
(6) 定性分析 分別將第（2)步取得的標準溶液和第（3)步取得的樣品溶液按照第（4)步所述最優(yōu)液 相分析參考條件進行分析，將在相同的液相色譜條件下獲得的樣品溶液的液相色譜分離譜 圖與標準物質(zhì)的液相色譜分離譜圖進行比較，若樣品譜圖中存在保留時間與某標準物質(zhì)的 保留時間一致的色譜峰，并且其扣除背景后的紫外吸收圖譜與該標準物質(zhì)的紫外吸收圖譜 一致，則可初步認定樣品中存在該物質(zhì)；經(jīng)液相色譜法確定為陽性的樣品，必須經(jīng)第（5)步 所述的質(zhì)譜確證參考條件進行質(zhì)譜分析進一步確證； (7) 定量測定 移取第（2)步系列標準溶液，按照第（4)步色譜條件進行高效液相色譜分析，以系列標 準溶液質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，制作標準曲線；吖啶黃和分散黃3根據(jù)416 nm 下的紫外吸收進行定量計算，顏料紅53、溶劑紅49、顏料橙5、蘇丹I、蘇丹紅II、蘇丹紅IV、 堿性紫10根據(jù)514 nm下的紫外吸收進行定量計算，酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、氯 化五甲基副玫瑰苯胺、氯化六甲基副玫瑰苯胺、溶劑藍35根據(jù)590 nm下的紫外吸收進行定 量計算； 鑒于堿性紫10實為溶劑紅49的鹽酸鹽，在本方法中與溶劑紅49的出峰時間相同，方 法無法分辨是堿性紫10或溶劑紅49。
2.除非已知，否則為統(tǒng)一測試結(jié)果，建議選擇溶劑紅49作為標準物質(zhì)，測試結(jié)果則報 告以溶劑紅49計的含量； 樣品溶液中目標物的含量，用標準曲線外標法確定；化妝品樣品中目標物的含量按"公 式（1)"進行計算；
式中--從標準曲線中計算出的樣品溶液中目標物的質(zhì)量濃度，μ g/mL ; V--按稀釋倍數(shù)折算的被測樣液總體積，mL ; m 稱取樣品的質(zhì)量，g ; 計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字； 若待測溶液中目標物的質(zhì)量濃度超過校準曲線線性范圍的上限，須對待測液進行適當 稀釋后重新測定。
【文檔編號】G01N30/88GK104122359SQ201410362344
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月28日
【發(fā)明者】毛希琴, 任國杰, 李春玲, 張國翠 申請人:大連市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所