一種血中tnni3k的濃度的檢測試劑盒及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒及其制備方法和應(yīng)用，所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括濃度為0.01～0.3μg/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液、濃度為0.1～2μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗體水溶液、濃度為1～5mg/mL的稀土鹽溶液、納米銀-納米稀土-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液、甘油的PBS緩沖液、帶有深度和直徑分別為0.5mm和6mm的小圈的載體。該血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒可以用于對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測，能檢出0.008ngTNNI3K/點，并且耗時短，耗樣量少。
【專利說明】—種血中TNN13K的濃度的檢測試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血中ΤΝΝΙ3Κ的濃度的檢測試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]缺血性心臟病多由包括粥樣硬化病變引致的冠狀動脈梗阻或狹窄所致。由于缺血性心臟病有發(fā)病突然,死亡率高的特點,發(fā)病開始后數(shù)小時到24小時，3天到一周內(nèi)的時間里的早期診斷和對應(yīng)治療是決定其救命率高低的主要因素。一般來說，雖然根據(jù)心電圖S-T段的缺血性抬高和CPK，心肌肌鈣蛋白I，T(cTnI, cTnT)，肌紅蛋白(MB)升高等指標(biāo)可以確診，但依然有很多的病例難以很快就下以診斷。
[0003]特別是測定血清肌紅蛋白(MB)雖可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標(biāo)，但特異性差，骨骼肌損傷、創(chuàng)傷、腎功能衰竭等疾病，都可導(dǎo)致其升高；心肌肌鈣蛋白I，T(cTnI, cTnT)，有相對高的特異性，但在一些骨骼肌疾病血中同樣也會增高。cTnl不但在急性心肌梗死病人血中增高,在急性腎衰血樣標(biāo)本也有升高。
[0004]由于心肌缺血，心肌梗死導(dǎo)致的不同程度的心肌細(xì)胞壞死而泄漏到血管中導(dǎo)致血中不同程度的TNNI3K濃度增高。目前血中TNNI3K濃度的檢測主要采用酶標(biāo)法測定，但該檢測方法耗時較長、需要較多的血樣及特殊的儀器等技術(shù)問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的之一為了解決上述的血中TNNI3K濃度的檢測耗時較長、需要較多的血樣及特殊的儀器等技術(shù)問題，而提供一種檢測耗時短、需要血樣量少，不需要特殊的儀器的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒。
[0006]本發(fā)明的目的之二在于提供上述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的之三在于利用上述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括:
(1)、濃度為0.01 -0.3 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、濃度為0.1?2 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
(3)、濃度為I?5mg/mL的稀土鹽溶液；
其中稀土為鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、欽、鉺、銩、鐿、镥、釔、鈧氧化物中的一種或一種以上的稀土混合物；
(3)、納米銀-納米稀土 -羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液
所述的納米銀-納米稀土-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米稀土:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為6.4?1.2:1?1.6:0.2?0.24 ; (4)、甘油的PBS緩沖液
所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(5)、帶有的小圈的載體
所述的載體為孔徑< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纖維素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纖維素膜；
所述的小圈的直徑為6mm、深度為0.5mm。
[0009]上述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法，具體步驟如下:
(1)、用蒸餾水將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶解，配成濃度為0.01?0.3 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、用蒸餾水將羊抗鼠lgG(H+L)抗體溶解，配成濃度為0.1?2yg/mL羊抗鼠lgG(H+L)抗體水溶液；
(3)、稀土鹽溶液的配制
將稀土氧化物溶于濃硝酸水溶液或質(zhì)量百分比濃度為37%的鹽酸水溶液中進(jìn)行反應(yīng)，得到濃度為I?5mg/mL的稀土鹽溶液；
其中稀土氧化物為鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、欽、鉺、銩、鐿、镥、釔、鈧氧化物中的一種或兩種以上的稀土氧化物；
(4)、納米銀-納米稀土-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液的制備
①、納米銀溶液的制備
用質(zhì)量百分比濃度為1%的單寧酸溶液與質(zhì)量百分比濃度為0.04%硝酸銀水溶液按體積比計算，即1%單寧酸溶液:0.04%硝酸銀溶液為16.5mL:50mL的比例混合進(jìn)行反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05?0.lmol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5?8.0，即得納米銀溶液；
②、納米稀土溶液的制備
用質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與濃度為I?5mg/mL的稀土硝酸鹽溶液或濃度為I?5mg/mL的稀土氯酸鹽水溶液按體積比計算，即I %單寧酸溶液:I?5mg/mL的稀土硝酸鹽溶液或I?5mg/mL的稀土氯酸鹽水溶液為1mL:1?0.2mL的比例進(jìn)行還原反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05?0.lmol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5?8.0，即得納米稀土溶液；
③、將步驟①所得的納米銀溶液與步驟②所得的納米稀土溶液按體積比的比例混合，得到納米銀和納米稀土的混合溶液；
④、在步驟③所得的納米銀和納米稀土的混合溶液中加入步驟(2)所得的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，得到納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液；
納米銀-納米稀土-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米稀土:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為6.4?1.2:1?1.6:0.2?0.24 ;
(5)、甘油的PBS緩沖液的制備
將甘油加入到PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻即得甘油的PBS緩沖液，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(6)、帶有的小圈的載體的制備； 用打孔器在載體上壓印出小圈；
所述的載體為孔徑< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纖維素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纖維素膜；
所述的小圈的直徑為6mm、深度為0.5mm。
[0010]利用上述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法，具體步驟如下:
(1)、將甘油的PBS緩沖液從載體的正面滴加到載體的小圈中；
(2)、待步驟(I)的甘油的PBS緩沖液滲入到載體后，再將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液從載體的正面滴加到載體的小圈中；
待鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液滲入到載體后，將阻斷劑從載體的正面加入到載體的小圈中；
待阻斷劑滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次；
所述的阻斷劑為質(zhì)量百分比濃度為0.2-1%的牛血清白蛋白、明膠或牛奶的水溶液；所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
(3)、在兩邊有開口的塑料支撐體的上面放上吸水材料，然后再將步驟(2)洗滌后的載體的正面朝上，放在吸水材料上；
所述的吸水材料為濾紙、脫脂棉、海綿、吸水纖維中的一種或兩種以上的混合物；
(4)、用蒸餾水將待測的血樣稀釋60倍，將稀釋后的血樣從步驟(3)所得的載體的正面緩慢滴加于到載體的小圈中；
待血樣滲入到載體后，將與稀釋后的血樣等體積的納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液從載體的正面緩慢加入到載體的小圈中；
待納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG (H+L)抗體的混合液滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次，然后將為稀釋后的血樣5倍體積的銀染劑從載體的正面迅速加入到載體的小圈中，避光反應(yīng)lmin，然后用蒸餾水洗去銀染劑；
所述的銀染劑為含有硝酸銀和對苯二酚的水溶液，其中硝酸銀的濃度為0.015mol/L和對苯二酚的濃度為0.075mol/L ；
根據(jù)載體的小圈中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度，用比色法可得出血中TNNI3K的濃度。
[0011]本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，由于采用了對鼠抗人TNNI3K單克隆抗體吸附能力強的載體、銀標(biāo)銀染技術(shù)、用動態(tài)吸附取代靜態(tài)吸附，研究發(fā)現(xiàn)納米稀土可大幅度提高銀標(biāo)銀染方法的靈敏度，從而解決了目前采用酶標(biāo)法測定血中TNNI3K濃度的檢測方法耗時較長、需要較多的血樣及特殊的儀器等技術(shù)問題。
[0012]利用本發(fā)明的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血液中的TNNI3K進(jìn)行檢測，其耗時較短，從固定鼠抗人TNNI3K單克隆抗體開始，到出結(jié)果僅需三分鐘；需用的血樣較少，僅需0.033 μ L ;不需要檢測的儀器；能檢出0.008ngTNNI3K/點。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖la、帶有的小圈的載體的結(jié)構(gòu)示意圖，其中I為載體，2為載體上的小圈；
圖lb、帶有的小圈的載體的A-A向的示意圖；
圖2、載體I的正面示意圖；
圖3、塑料支撐體4、吸水材料3和載體I的放置關(guān)系示意圖，自下而上依次為塑料支撐體4、吸水材料3和載體I ;
圖4、兩邊有開口的塑料支撐體的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實施方式】
[0014]下面通過具體實施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明。
[0015]實施例1
一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括:
(1)、濃度為0.01 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、濃度為0.1 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
(3)、釹濃度為lmg/mL的硝酸釹溶液；
(4)、納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液
所述的納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釹:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為6.4:1:0.2 ；
(4)、甘油的PBS緩沖液
所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(5)、帶有的小圈的載體
所述的帶有的小圈的載體的結(jié)構(gòu)示意圖如圖1a所示，其中I為載體，2為載體上的小圈；其A-A向的示意圖如圖1b所示；
所述的載體I為孔徑為0.25 μ m的多孔聚偏氟乙烯膜；
所述的小圈2的深度和直徑分別為0.5mm和6mm。
[0016]上述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法，具體步驟如下:
(1)、用蒸餾水將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶解，配成濃度為0.01 μ g/mL鼠抗人 TNNI3K單克隆抗體水溶液，步驟如下:
將Img的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體于50mL小燒杯中，加蒸餾水使其溶解，移至10mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
取25 μ L的濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶液于25mL容量瓶中，用蒸餾水定容至25ml，得濃度為0.01 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶液；
(2)、用蒸餾水將羊抗鼠IgG(H+L)抗體溶解，配成濃度為0.1 μ g/mL羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，步驟如下:
將Img的羊抗鼠IgG (H+L)抗體于50mL小燒杯中，加蒸懼水使其溶解,移至10mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為10 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
取1.0OmL的濃度為10 μ g/mL羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液于10mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為0.1 μ g/mL的羊抗鼠IgG (H+L)抗體水溶液； (3)、將0.2333g氧化釹溶于3mL濃硝酸中，加熱,使其溶解,用蒸餾水定容至100ml，即得到釹濃度為lmg/mL的硝酸釹溶液；
(4)、納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液的制備
①、納米銀溶液的制備
用16.5mL的質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與50ml的質(zhì)量百分比濃度為0.04%硝酸銀水溶液進(jìn)行混合后，攪拌條件下進(jìn)行反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)PH值為6.5，然后用蒸餾水定容至100ml，即得納米銀溶液；
②、納米釹溶液的制備
用1ml質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與1.0ml釹濃度為lmg/mL的硝酸釹溶液混合后進(jìn)行還原反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5，用蒸餾水定容至50ml，即得納米釹溶液；
③、將步驟①所得的62.5 μ L納米銀溶液與步驟②所得的62.5 μ L納米釹溶液按納米銀:納米稀土釹的質(zhì)量比為6.4:1的比例進(jìn)行混合，得到納米銀和納米釹的混合溶液；
④、在步驟③所得的納米銀和納米釹的混合溶液中加入2.5mL步驟(2)所得的濃度為0.1 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，然后用濃度為0.01mol/L的磷酸氫二鈉水溶液定容至25ml，得到納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液；
納米銀-納米釹-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米稀土釹:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為6.4:1:0.2 ；
(5)、甘油的PBS緩沖液的制備
將甘油加入到PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻即得甘油的PBS緩沖液，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(6)、帶有的小圈2的載體I的制備
用打孔器在載體I上壓印出小圈2 ;
其中載體I為孔徑為0.25 μ m的多孔聚偏氟乙烯膜；
所述的小圈2,其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
[0017]利用上述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法，具體步驟如下:
(1)、將10μ L甘油的PBS緩沖液從載體I的正面滴加到載體I的小圈2中；
(2)、待步驟(I)的甘油的PBS緩沖液滲入到載體I后，再將2μ L濃度為0.01 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液從載體I的正面滴加到載體I的小圈2中，所述的載體I的正面見圖2所示；
待濃度為0.01 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液滲入到載體I后，將2 μ L阻斷劑從載體I的正面加入到載體I的小圈2中；
待阻斷劑滲入到載體I后，將載體I依次用洗液、蒸餾水洗滌3次；
所述的阻斷劑為質(zhì)量百分比濃度為0.2%的牛血清白蛋白的水溶液；
所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
(3)、在兩邊有開口的塑料支撐體4的上面放上吸水材料3，然后再將步驟(2)洗滌后的載體I的正面朝上，放在吸水材料3上，具體的放置示意圖如圖3所示，即自下而上依次為塑料支撐體4、吸水材料3和載體I ;
所述的兩邊有開口的塑料支撐體4的結(jié)構(gòu)示意圖如圖4所示；
所述的吸水材料3為濾紙；
(4)、用蒸餾水將待測的血樣稀釋60倍，將2 μ L稀釋后的血樣從步驟(3)所得的載體I的正面緩慢滴加到載體I的小圈2中；
待血樣滲入到載體I后，將2 μ L納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液從載體I的正面緩慢加入到載體I的小圈2中；
待納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液滲入到載體I后，將載體I依次用洗液、蒸餾水洗滌3次，然后將10 μ L銀染劑從載體I的正面迅速加入到載體I的小圈2中，避光反應(yīng)lmin，然后用100 μ L蒸餾水洗去銀染劑；
所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
所述的銀染劑為含有硝酸銀和對苯二酚的水溶液，其中硝酸銀的濃度為0.015mol/L和對苯二酚的濃度為0.075mol/L ；
根據(jù)載體I的小圈2中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度，用比色法得出每點TNNI3K 的量為 0.085ngTNNI3K/ 點，血中 TNNI3K 的濃度 2550ng/mL。
[0018]實施例2
一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括:
(1)、濃度為0.3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、濃度為2μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
(3)、釔濃度為5mg/mL的氯化釔溶液；
(4)、納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液
所述的納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釔:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為1.2:1.6:0.24；
(5)、甘油的PBS緩沖液
所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(6)、帶有的小圈的載體
所述的載體為孔徑為0.22 μ m的多孔的硝酸纖維素膜；
所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
[0019]上述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法，具體步驟如下:
(1)、用蒸餾水將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶解，配成濃度為0.Syg/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液，步驟如下:
將Img的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體于50mL小燒杯中，加蒸餾水使其溶解，移至10mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
取0.75mL濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液于25mL容量瓶中，用蒸餾水定容至25ml，得濃度為0.3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、用蒸餾水將羊抗鼠IgG(H+L)抗體溶解，配成濃度為2μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，步驟如下:
將Img的羊抗鼠IgG(H+L)抗體于50mL小燒杯中，加蒸懼水使其溶解,移至50mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至50ml，得濃度為20 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
取10.0OmL濃度為20 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液于10mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為2 μ g/mL的羊抗鼠IgG (H+L)抗體水溶液；
(3)、將0.6350g氧化釔與3mL的質(zhì)量百分比濃度為37%的鹽酸水溶液混合，加熱使其溶解，然后用蒸餾水定容至10mL,得到釔濃度為5mg/mL的氯化釔溶液；
(4)、納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液的制備
①、納米銀溶液的制備
用16.5mL的質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與50ml的質(zhì)量百分比濃度為0.04%硝酸銀水溶液進(jìn)行混合后，攪拌條件下進(jìn)行反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)PH值為8.0，然后用蒸餾水定容至100ml，即得納米銀溶液；
②、納米釔溶液的制備
用1ml質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與0.20ml釔濃度為5mg/mL的氯化釔溶液混合后進(jìn)行還原反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為8，用蒸餾水定容至50ml，即得納米釔溶液；
③、將步驟①所得的11，SyL納米銀溶液與步驟②所得的100μ L納米釔溶液按納米銀:納米釔的質(zhì)量比為1.2:1.6的比例進(jìn)行混合，得到納米銀和納米釔的混合溶液；
④、在步驟③所得的納米銀和納米釔的混合溶液中加入0.15mL步驟(2)所得的濃度為2 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，然后用濃度為0.01mol/L的磷酸氫二鈉水溶液定容至25ml，得到納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液；
納米銀-納米釔-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釔:羊抗鼠 IgG(H+L)抗體為 1.2:1.6:0.24 ；
(5)、甘油的PBS緩沖液的制備
將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻即得甘油的PBS緩沖液，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(6)、帶有的小圈的載體的制備
用打孔器在載體上壓印出小圈；
所述的載體為孔徑為0.22 μ m的多孔的硝酸纖維素膜；
所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
[0020]利用上述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法，具體步驟如下:
(1)、將10μ L甘油的PBS緩沖液從正面滴加于載體的小圈中；
(2)、待步驟(I)的甘油的PBS緩沖液滲入到載體后，再將2μ L濃度為0.3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶液從載體的正面滴加到載體的小圈中；
待濃度為0.3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液滲入到載體后，將2 μ L阻斷劑從載體的正面加入到載體的小圈中；
待阻斷劑滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次；
所述的阻斷劑為質(zhì)量百分比濃度為1%的牛奶的水溶液； 所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
(3)、在兩邊有開口的塑料支撐體的上面放上吸水材料，然后再將步驟(2)洗滌后的載體的正面朝上，放在吸水材料上；
所述的吸水材料為脫脂棉；
(4)、用蒸餾水將待測的血樣稀釋60倍，將2μ L稀釋后的血樣緩慢滴加于步驟(3)小圈中，待血樣滲入到載體后緩慢加納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG (H+L)抗體的混合液，待納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液滲入到載體后依次用洗液、蒸餾水洗滌3次，然后迅速加入10 μ L銀染劑，避光反應(yīng)lmin，然后用100 μ L蒸餾水洗去銀染劑；
所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
所述的銀染劑為含有硝酸銀和對苯二酚的水溶液，其中硝酸銀的濃度為0.015mol/L和對苯二酚的濃度為0.075mol/L ；
根據(jù)小圈中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度，用比色法得出每點TNNI3K的量為 0.008ngTNNI3K/ 點，血中 TNNI3K 的濃度 240ng/mL。
[0021]實施例3
一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括:
(1)、濃度為0.15 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、濃度為Iμ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
(3)、釤濃度為2.5mg/mL的硝酸釤溶液和鉺濃度為2mg/mL的硝酸鉺溶液；
(4)、納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液
所述的納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釤和鉺:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為3.8:1.34:0.22 ；
(4)、甘油的PBS緩沖液
所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(5)、帶有的小圈的載體
所述的載體為孔徑為0.20 μ m的多孔乙酸纖維素膜；
所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
[0022]上述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法，具體步驟如下:
(1)、用蒸餾水將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶解，配成濃度為0.15 μ g/mL鼠抗人 TNNI3K單克隆抗體水溶液，步驟如下:
將Img的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體于50mL小燒杯中，加蒸餾水使其溶解，移至10mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
取375 μ L的濃度為10 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液于25mL容量瓶中，用蒸餾水定容至25ml，得濃度為0.15 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、用蒸餾水將羊抗鼠IgG(H+L)抗體溶解，配成濃度為Iμ g/mL羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，步驟如下: 將Img的羊抗鼠IgG (H+L)抗體于50mL小燒杯中，加蒸懼水使其溶解,移至10mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為10 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液；
取5.0OmL濃度為10 μ g/mL的羊抗鼠IgG (H+L)抗體水溶液于50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至50ml，得濃度為I μ g/mLd羊抗鼠IgG (H+L)抗體水溶液；
(3 )、硝酸鉺和硝酸釤溶液的配制
將0.2287g氧化鉺與5mL濃硝酸混合，加熱使其溶解，待其冷卻后，用蒸餾水定容至10mL,即得鉺濃度為2mg/mL的硝酸鉺溶液；
將0.2899g氧化釤與5mL濃硝酸混合,加熱使其溶解,待其冷卻后，用蒸餾水定容至10mL,即得釤濃度為2.5mg/mL的硝酸釤溶液；
(4)、納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液的制備
①、納米銀溶液的制備
用16.5mL的質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與50.0mL的質(zhì)量百分比濃度為0.04%硝酸銀水溶液進(jìn)行混合后，攪拌條件下進(jìn)行反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5，然后用蒸餾水定容至100ml，即得納米銀溶液；
②、納米釤和鉺溶液的制備
用1mL質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與0.25mL鉺濃度為2mg/mL的硝酸鉺溶液和0.20mL釤濃度為2.5mg/mL的硝酸釤溶液進(jìn)行混合后，攪拌條件下進(jìn)行還原反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05mol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5，然后用蒸餾水定容至50mL,即得納米釤和鉺的溶液；
③、將步驟①所得的37.4 μ L納米銀溶液與步驟②所得的83.7 μ L納米釤和鉺的溶液按納米銀:納米釤和鉺的質(zhì)量比為3.8:1.34的比例混合，得到納米銀和納米釤和鉺的混合溶液；
④、在步驟③所得的納米銀和納米釤和鉺的混合溶液中加入0.275mL步驟(2)所得的濃度為I μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，然后用濃度為0.01mol/L的磷酸氫二鈉水溶液定容至25ml，即得納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液；
納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釤和鉺:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為3.8:1.34:0.22 ；
(5)、甘油的PBS緩沖液的制備
將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻即得甘油的PBS緩沖液，其中甘油的體積百分比濃度為30% ；
(6)、帶有的小圈的載體的制備
用打孔器在載體上壓印出小圈；
其中載體為孔徑為0.20 μ m的多孔乙酸纖維素膜；
所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
[0023]利用上述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法，具體步驟如下:
(1)、將10μ L甘油的PBS緩沖液從載體的正面滴加到載體的小圈中；
(2)、待步驟(I)的甘油的PBS緩沖液滲入到載體后，再將2μ L濃度為0.15 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液從載體的正面滴加到載體的小圈中；
待濃度為0.15 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液滲入到載體后，將2 μ L阻斷劑從載體的正面加入到載體的小圈中；
待阻斷劑滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次；
所述的阻斷劑為質(zhì)量百分比濃度為0.5%的明膠的水溶液；
所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
(3)、在兩邊有開口的塑料支撐體的上面放上吸水材料，然后再將步驟(2)處理后的載體的正面朝上，放在吸水材料上；
所述的吸水材料為海綿；
(4)、用蒸餾水將待測的血樣稀釋60倍，將2μL稀釋后的血樣從步驟(3)所得的載體的正面緩慢滴加到載體的小圈中；
待血樣滲入到載體后，將2 μ L納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG (H+L)抗體的混合液從載體的正面緩慢加入到載體的小圈中；
待納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次，然后將10 μ L銀染劑從載體的正面迅速加入到載體的小圈中，避光反應(yīng)lmin，然后用100 μ L蒸餾水洗去銀染劑；
所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ；
所述的銀染劑為含有硝酸銀和對苯二酚的水溶液，其中硝酸銀的濃度為0.015mol/L和對苯二酚的濃度為0.075mol/L ；
根據(jù)載體的小圈中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度，用比色法得出每點TNNI3K的量為 0.065ngTNNI3K/ 點，血中 TNNI3K 的濃度 1950ng/mL。
[0024]實施例4
實施例4與實施例3的實驗條件相同，只是將TNNI3K的濃度為1950ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液替代血樣，做3個平行實驗。即用蒸餾水覽TNNI3K的濃度為1950ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋60倍，用2yL稀釋后的TNNI3K的溶液進(jìn)行實驗。根據(jù)小圈中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度用比色法得出每點TNNI3K的量分別為0.064,0.064,0.064ngTNNI3K/點，血中TNNI3K 的濃度 1920、1920、1920ng/mL，TNNI3K 的回收率分別為 98.46%,98.46% 和 98.46%。
[0025]從上述的實驗結(jié)果表明，用本發(fā)明的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法是可靠和穩(wěn)定的。
[0026]對照實施例1 (用酶標(biāo)法測定實施例3血樣中TNNI3K的濃度)
用 Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.的“Protein Detector? ELISA Kit，，進(jìn)行測試，具體步驟如下:
(1)、將25mg的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體于50mL小燒杯中，加蒸餾水使其溶解，移至25mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至25ml，得濃度為lmg/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液；
(2)、用移液器取88μL濃度為lmg/mL的鼠抗人ΤΝΝΙ3Κ單克隆抗體水溶液于96孔板的一孔中，加10yL固定液，放置120min，倒去未固定的溶液，用150 μ L洗液清洗，洗3遍； (3)、加300μ L阻斷劑，放置60min，倒去多余的阻斷劑；
(4)、加2.5μ L血樣，放置120min，用150 μ L洗液清洗，洗4遍；
(5)、加10(^1^二抗溶液，放置6011^11，用100μ L洗液清洗，洗4遍；
(5)、加100μ L酶染劑，放置30min ；
(6)、加100μL停止劑，用MTP-310Lab型酶標(biāo)儀測定出該血樣中TNNI3K的濃度為1947ng/mL。
[0027]通過上述對照實施例1與實施例3的檢測結(jié)果進(jìn)行對比，可以看出，利用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測，所得的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)的酶標(biāo)法進(jìn)行相比，其檢測結(jié)果準(zhǔn)確，精確度高。進(jìn)一步，可以看出利用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行檢測，其耗時較短，從固定鼠抗人TNNI3K單克隆抗體開始，到出結(jié)果僅需三分鐘，而對照實施例1中傳統(tǒng)的酶標(biāo)法，從固定鼠抗人TNNI3K單克隆抗體開始，到出結(jié)果需390分鐘。并且利用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行檢測，所需的血樣較少，僅需0.033 μ L，而傳統(tǒng)的酶標(biāo)法，需2.5μ L。進(jìn)一步，利用本發(fā)明的試劑盒對血樣進(jìn)行檢測，不需要特殊的檢測儀器，而傳統(tǒng)的酶標(biāo)法需用酶標(biāo)儀。
[0028]以上所述僅是本發(fā)明的實施方式的舉例，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變型，這些改進(jìn)和變型也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，其特征在于所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括: (I)、濃度為0.0l?0.3 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液； (1)、濃度為0.1?2μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液； (2)、濃度為I?5mg/mL的稀土鹽溶液； 其中稀土為鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、欽、鉺、銩、鐿、镥、釔、鈧氧化物中的一種或兩種以上的稀土混合物； (3)、納米銀-納米稀土-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液 所述的納米銀-納米稀土-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米稀土:羊抗鼠lgG(H+L)抗體為6.4?1.2:1?1.6:0.2?0.24 ; (4)、甘油的PBS緩沖液 所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ； (5)、帶有的小圈的載體 所述的載體為孔徑< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纖維素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纖維素膜； 所述的小圈的直徑為6mm、深度為0.5mm。
2.如權(quán)利要求1所述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，其特征在于所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括: (1)、濃度為0.01 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液； (2)、濃度為0.1 μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液； (3)、釹濃度為lmg/mL的硝酸釹溶液； (4)、納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液 所述的納米銀-納米釹-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釹:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為6.4:1:0.2 ； (4)、甘油的PBS緩沖液 所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ； (5)、帶有的小圈的載體 所述的載體為孔徑為0.25 μ m的多孔聚偏氟乙烯膜； 所述的小圈的深度和直徑分別為0.5mm和6mm。
3.如權(quán)利要求1所述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，其特征在于所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括: (1)、濃度為0.3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液； (2)、濃度為2μ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液； (3)、釔濃度為5mg/mL的氯化釔溶液； (4)、納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液 所述的納米銀-納米釔-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釔:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為1.2:1.6:0.24 ； (5)、甘油的PBS緩沖液 所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ； (6)、帶有的小圈的載體 所述的載體為孔徑為0.22 μ m的多孔的硝酸纖維素膜； 所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
4.如權(quán)利要求1所述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，其特征在于所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒，包括: (1)、濃度為0.15 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液； (2)、濃度為Iμ g/mL的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液； (3)、釤濃度為2.5mg/mL的硝酸釤溶液和鉺濃度為2mg/mL的硝酸鉺溶液； (4)、納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液 所述的納米銀-納米釤和鉺-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米釤和鉺:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為3.8:1.34:0.22 ； (4)、甘油的PBS緩沖液 所述的甘油的PBS緩沖液，即將甘油加入到pH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻而得，其中甘油的體積百分比濃度為30% ； (5)、帶有的小圈的載體 所述的載體為孔徑為0.20 μ m的多孔乙酸纖維素膜； 所述的小圈，其深度和直徑分別為0.5mm和6_。
5.如權(quán)利要求1所述的一種血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟: (1)、用蒸餾水將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體溶解，配成濃度為0.01?0.3 μ g/mL鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液； (2)、用蒸餾水將羊抗鼠lgG(H+L)抗體溶解，配成濃度為0.1?2yg/mL羊抗鼠lgG(H+L)抗體水溶液； (3)、稀土鹽溶液的配制 將稀土氧化物溶于濃硝酸或體積百分比濃度為37%的鹽酸水溶液中，得到濃度為I?5mg/mL的稀土鹽溶液； 其中稀土氧化物為鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、欽、鉺、銩、鐿、镥、乾、鈧氧化物中的一種或兩以上的稀土氧化物； (4)、納米銀-納米稀土-羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液的制備 ①、納米銀溶液的制備 用質(zhì)量百分比濃度為1%的單寧酸溶液與質(zhì)量百分比濃度為0.04%硝酸銀水溶液按體積比計算，即1%單寧酸溶液:0.04%硝酸銀溶液為16.5mL:50mL的比例混合，攪拌條件下進(jìn)行反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05?0.lmol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5?8.0，即得納米銀溶液； ②、納米稀土溶液的制備 用質(zhì)量百分比濃度為I %的單寧酸溶液與濃度為I?5mg/mL的稀土鹽溶液按體積比計算，即1%單寧酸溶液:I?5mg/mL的稀土鹽溶液為1mL:1?0.2mL的比例,攪拌條件下進(jìn)行還原反應(yīng)30min，所得的反應(yīng)液用濃度為0.05?0.lmol/L的碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5?8.0，即得納米稀土溶液； ③、將步驟①所得的納米銀溶液與步驟②所得的納米稀土溶液按體積比混合，得到納米銀和納米稀土的混合溶液； ④、在步驟③所得的納米銀和納米稀土的混合溶液中加入步驟(2)所得的羊抗鼠IgG(H+L)抗體水溶液，得到納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液； 納米銀-納米稀土-羊抗鼠lgG(H+L)抗體的混合液中，按質(zhì)量比計算，即納米銀:納米稀土:羊抗鼠IgG(H+L)抗體為6.4?1.2:1?1.6:0.2?0.24 ; (5)、甘油的PBS緩沖液的制備 將甘油加入到PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中混合均勻即得甘油的PBS緩沖液，其中甘油的體積百分比濃度為30% ； (6)、帶有的小圈的載體的制備 用打孔器在載體上壓印出小圈； 所述的載體為孔徑< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纖維素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纖維素膜； 所述的小圈的直徑為6mm、深度為0.5mm。
6.如權(quán)利要求1-4所述的血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒用于對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測。
7.如權(quán)利要求6所述的利用血中TNNI3K的濃度的檢測試劑盒對血中TNNI3K的濃度進(jìn)行檢測的方法，其特征在于具體包括如下步驟: (1)、將甘油的PBS緩沖液從載體的正面滴加到載體的小圈中； (2)、待步驟(I)的甘油的PBS緩沖液滲入到載體后，再將鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液從載體的正面滴加到載體的小圈中； 待鼠抗人TNNI3K單克隆抗體水溶液滲入到載體后，將阻斷劑從載體的正面加入到載體的小圈中； 待阻斷劑滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次； 所述的阻斷劑為質(zhì)量百分比濃度為0.2-1%的牛血清白蛋白、明膠或牛奶的水溶液中的一種； 所述的洗液為PH值為7.4磷酸氫二鈉水溶液中加入TWeen80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的質(zhì)量百分比濃度為0.5%，NaCl的質(zhì)量百分比濃度為10% ； (3)、在兩邊有開口的塑料支撐體的上面放上吸水材料，然后再將步驟(2)洗滌后的載體的正面朝上，放在吸水材料上； 所述的吸水材料為濾紙、脫脂棉、海綿、吸水纖維中的一種或兩種以上的混合物； (4)、用蒸餾水將待測的血樣稀釋60倍，將稀釋后的血樣從步驟(3)所得的載體的正面緩慢滴加于到載體的小圈中； 待血樣滲入到載體后，將與稀釋后的血樣等體積的納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液從載體的正面緩慢加入到載體的小圈中； 待納米銀-納米稀土 -羊抗鼠IgG(H+L)抗體的混合液滲入到載體后，將載體依次用洗液、蒸餾水洗滌3次，然后將為稀釋后的血樣5倍體積的銀染劑從載體的正面迅速加入到載體的小圈中，避光反應(yīng)lmin，然后用蒸餾水洗去銀染劑； 所述的銀染劑為含有硝酸銀和對苯二酚的水溶液，其中硝酸銀的濃度為0.015mol/L和對苯二酚的濃度為0.075mol/L ； 根據(jù)載體的小圈中出現(xiàn)均勻一致的灰黑色斑點顏色的深度，用比色法得出血中TNNI3K的濃度。
【文檔編號】G01N33/544GK104165993SQ201410391757
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月11日
【發(fā)明者】劉小珍, 任曉輝, 劉小舟, 陳捷 申請人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院