一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，它包括：1）在免疫光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭上，貼合銀反射層，包被金黃色葡萄糖球菌抗體；2）制備CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物，并制成水溶液；3）將捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中，然后再將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中，用光纖倏逝波生物傳感器檢測；采用530nm的半導(dǎo)體激光器，并在激光器激光發(fā)射端設(shè)有凸透鏡；解決了部分光線在末端入射角小于臨界角時,將有傳播光線透射到溶液中，熒光信號流失的問題，提高了光纖生物傳感器系統(tǒng)的檢測極限和探測靈敏度，將金黃色葡萄球菌的檢測限提高到5ng/mL。
【專利說明】一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬檢驗檢疫【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]光纖倏逝波生物傳感器通過倏逝波場來激發(fā)熒光信號。光在光纖中以全反射傳播時，仍能產(chǎn)生部分穿透界面的波，波振幅隨著與界面距離的增大而指數(shù)衰減，因此只存在于界面附近一薄層內(nèi)，稱為倏逝波?；谫渴挪▓黾ぐl(fā)的熒光免疫光纖生物傳感器是熒光生物傳感器的一種。它主要結(jié)合了光在光纖中傳播時產(chǎn)生倏逝波場以及抗體一抗原免疫反應(yīng)的高特異性和高靈敏度的特點。
[0003]目前探頭形狀主要采用連續(xù)錐型。該光纖探頭有著較好的熒光激發(fā)和耦合的效果。由于光纖本身的內(nèi)徑一般可以達到200 μ m，為在熒光耦合過程中勢必有一部分熒光從光纖中射出，錐長越大，入射角越接近于臨界角，但仍有部分光線在末端入射角小于臨界角，故將有傳播光線透射到溶液中，不能形成一種絕對的倏逝波傳導(dǎo)環(huán)境。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是為了提高檢測金黃色葡萄糖球菌的檢測極限和探測靈敏度，而提供一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法。
[0005]一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，它包括:
1)在免疫光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭上，貼合銀反射層，包被金黃色葡萄糖球菌抗體；
2)制備CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物，并制成水溶液；
3)將捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中，然后再將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中，用光纖倏逝波生物傳感器檢測；
所述的光纖倏逝波生物傳感器中的激光器為530 nm的半導(dǎo)體激光器；
所述的激光器激光發(fā)射端設(shè)有凸透鏡；
所述的捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中和將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中的時間分別為1min。
[0006]本發(fā)明提供了一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，它包括:I)在免疫光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭上，貼合銀反射層，包被金黃色葡萄糖球菌抗體；2)制備CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物，并制成水溶液；3)將捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中，然后再將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中，用光纖倏逝波生物傳感器檢測；采用530 nm的半導(dǎo)體激光器，并在激光器激光發(fā)射端設(shè)有凸透鏡；解決了部分光線在末端入射角小于臨界角時，將有傳播光線透射到溶液中，突光信號流失的問題，提高了光纖生物傳感器系統(tǒng)的檢測極限和探測靈敏度，將金黃色葡萄球菌的檢測限提高到5ng/mL。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1為光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭示意圖；
圖2為發(fā)明一種免疫光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭示意圖；
圖3為本發(fā)明一種免疫光纖倏逝波生物傳感器示意圖。

【具體實施方式】
[0008]實施例1
請參見圖1、2，一種免疫光纖倏逝波生物傳感器探頭，它包括包覆部11和吸附部12，所述的吸附部12的末端截面上設(shè)有銀反射層13 ;所述的銀反射層13，采用焊接或真空鍍膜法與吸附部末端截面貼合；所述的吸附部12為錐形。
[0009]實施例2
請參見圖1-3，一種免疫光纖倏逝波生物傳感器，它包括:光學(xué)系統(tǒng)、光電轉(zhuǎn)換與信號放大系統(tǒng)、數(shù)據(jù)采集與處理裝置；
光學(xué)系統(tǒng)包括:驅(qū)動電路9、激光器2、凸透鏡3、光纖探頭1、濾波片4 ；
光電轉(zhuǎn)換與信號放大系統(tǒng)包括:光電倍增管5和信號放大器6 ；
數(shù)據(jù)采集與處理系統(tǒng)包括:數(shù)據(jù)采集卡7和實驗室虛擬儀器工程平臺(LabVIEW) 8 ；激光器2發(fā)出激光經(jīng)凸透鏡3到光纖探頭，熒光信號返回；熒光信號經(jīng)光電倍增管5信號放大器6轉(zhuǎn)換放大；數(shù)據(jù)采集卡7和實驗室虛擬儀器工程平臺8收集處理、檢測信號強度；
所述的光纖探頭為實施例1所述的光纖探頭I ;
所述的激光器為530 nm的半導(dǎo)體激光器，
實施例3
I)免疫光纖探頭的制備:光纖探頭去皮后用氫氧化鈉浸泡10 min，然后用鹽酸浸泡10min。去離子水沖洗3次后，自然晾干。光纖隨后被置入10%丙酮溶液中作用I h，用丙酮漂洗6次洗去殘余丙酮溶液。利用三氨丙基三乙氧基硅烷和戊二醛等試劑活化光纖纖芯表面。將處理好的光纖插入金黃色葡萄糖球菌單抗的溶液中浸泡24 h，取出用去離子水洗凈，即得到包被有捕獲抗原免疫光纖探頭。
[0010]2)金黃色葡萄球菌的檢測
采用實施例2所述的一種免疫光纖倏逝波生物傳感器系統(tǒng)，將CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成水溶液，將捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中，然后再將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中，用光纖倏逝波生物傳感器檢測。
[0011]3)兩種光纖頭的熒光強度對比
將金黃色葡萄糖球菌菌株在LB液體培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)18 h?24 h。比濁法測定菌液濃度。將裝配有Ag反光層的免疫光纖探頭和未裝配反光層的免疫光纖探頭分別插入濃度為 1X10° ng/mL、I X 11 ng/mLL、I X 12 ng/mL> I X 13 ng/mL> I X 14 ng/mL> I X 15ng/mL和IXlO6 ng/mL的金黃色葡萄糖球菌菌溶液及空白溶液中孵育10 min, PBS清洗三遍后再與量子點標(biāo)記的多抗反應(yīng)lOmin，然后上機進行測量。測試結(jié)果如下表I所示，裝配Ag反光層比未裝配反光層的免疫光纖探頭產(chǎn)生熒光信號增強1.5倍左右，并且將金黃色葡萄球菌的檢測限提高到5 ng/mL。

【權(quán)利要求】
1.一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，它包括: 1)在免疫光纖倏逝波生物傳感器光纖探頭上，貼合銀反射層，包被金黃色葡萄糖球菌抗體； 2)制備CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物，并制成水溶液； 3)將捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中，然后再將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中，用光纖倏逝波生物傳感器檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，其特征在于:所述的光纖倏逝波生物傳感器中的激光器為530 nm的半導(dǎo)體激光器。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，其特征在于:所述的激光器激光發(fā)射端設(shè)有凸透鏡。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種免疫光纖倏逝波生物傳感器檢測金黃色葡萄糖球菌的方法，其特征在于:所述的捕獲抗體光纖探針插入待測溶液中和將捕獲抗體光纖探針放入CdTe-多克隆抗體偶聯(lián)物制成的水溶液中的時間分別為lOmin。
【文檔編號】G01N33/542GK104133061SQ201410393102
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月12日
【發(fā)明者】劉韜, 劉金華, 孟日增, 宋戰(zhàn)昀, 王瑋琳, 聶丹丹, 劉陽 申請人:吉林出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心