環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料及其制法和用途
【專利摘要】一種制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的方法，它是將油酸包裹的上轉(zhuǎn)換納米粒子(OA-UCNPs)逐滴加入HCl溶液，能得到無(wú)油酸配體的UCNPs。把檸檬酸改性的β-環(huán)糊精(CD-Cit)與無(wú)油酸配體的UCNPs在高溫下反應(yīng)得到CD-Cit包裹的UCNPs(CD-Cit-UCNPs)，CD-Cit-UCNPs與RB組裝后得到環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。本發(fā)明的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料是基于一種FRET過程，以UCNPs作為能量給體，羅丹明B(RB)作為能量受體，利用了主客體間的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。加入膽固醇后，膽固醇誘導(dǎo)RB游離出β-環(huán)糊精的空腔，致使FRET減弱，上轉(zhuǎn)換熒光增強(qiáng)，以此來檢測(cè)膽固醇的含量。本發(fā)明公開了其制法。
【專利說明】環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料及其制法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料及其制法和其用于血清中膽固 醇的檢測(cè)。

【背景技術(shù)】
[0002] 膽固醇在許多疾病的演變過程中起著重要的作用，血清中膽固醇的檢測(cè)是生物化 學(xué)中應(yīng)用最多的一項(xiàng)分析指標(biāo)。人體內(nèi)均衡的膽固醇含量能夠保證細(xì)胞結(jié)構(gòu)的耐久性和 完整性，血清中總膽固醇含量的高低是醫(yī)學(xué)診斷治療的一項(xiàng)重要指標(biāo)。（參見：S. R. Cao, L. Zhang, Y. Q. Chai and R. Yuan, Biosens. Bioelectron. , 2013, 42, 532-538.)
[0003] 關(guān)于膽固醇檢測(cè)，已經(jīng)發(fā)展了許多方法，像熒光分析、電化學(xué)分析以及分子印記技 術(shù)等。但是，這些方法的局限性在于耗時(shí)、缺乏合適的內(nèi)標(biāo)，許多方法的選擇性依賴于膽固 醇選擇性酶和抗體的使用，而這些酶和抗體價(jià)格昂貴且容易變性。因此，特別需要有可以替 代的，簡(jiǎn)單、廉價(jià)且高效的檢測(cè)方法用于膽固醇檢測(cè)（參見：A. Mondal and N. R. Jana，Chem. Commun.，2012, 48, 7316-7318.)。
[0004] 近來已經(jīng)發(fā)展了基于熒光染料分子的膽固醇檢測(cè)方法，用的是β-環(huán)糊精 (CD)同染料分子以及膽固醇之間競(jìng)爭(zhēng)性的主客體相互作用（參見：（a)A.Mondal and N. R. Jana, Chem. Commun. , 2012, 48, 7316-7318. (b)N. Zhang, Y. Liu, L. Tong, K. Xu, L. Zhuo and B. Tang, Analyst, 2008, 133, 1176-1181.)。但是，染料分子的光學(xué)性質(zhì)對(duì)許多條件都很 敏感，像pH值、離子力以及樣品溶液的有機(jī)效應(yīng)，在測(cè)試過程中，應(yīng)該保證這些條件絕對(duì)一 致。此外，生物大分子的吸收主要集中在紫外-可見區(qū)，在該能量激發(fā)下，將產(chǎn)生自主熒光， 降低信噪比，致使檢測(cè)的靈敏度降低。
[0005] 上轉(zhuǎn)換納米粒子（UCNPs)是一類摻雜稀土離子的熒光團(tuán)，通過多光子吸收過程， 能夠把低能量光轉(zhuǎn)變成高能量發(fā)射光，進(jìn)而發(fā)射可見或者近紅外光。它們擁有強(qiáng)烈的熒光 強(qiáng)度、高的量子產(chǎn)率、窄的發(fā)射區(qū)、好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性。使用低能量近紅外光（通 常是980nm)激發(fā)，可以避免來自生物大分子的自主熒光干擾（參見：Y.H.Wang，Z. J.Wu and Z. H. Liu, Anal. Chem.，2013, 85, 258-264.)。所有這些優(yōu)點(diǎn)表明，UCNPs在生物和環(huán)境樣品 分析中具有巨大的潛力。在各種各樣鑭系摻雜的上轉(zhuǎn)換材料中，六方相的NaYF 4:Yb，Er被公 認(rèn)為是最有效的上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料，其中摻雜的Yb3+負(fù)責(zé)吸收多個(gè)近紅外光子，而Er 3+負(fù)責(zé)發(fā) 射可見光。事實(shí)上，UCNPs在基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET)分析中，一直被認(rèn)為是最理想的 給體。直到現(xiàn)在，用UCNPs已經(jīng)發(fā)展了一些光化學(xué)傳感器，分別用來檢測(cè)CN'Hg 2+和溫度等 等（SM:(a)R.Chen，V.D.Ta，F(xiàn).Xiao，Q.Y.ZhangandH.D.Sun，Small，2013,9，1052-1057. L. Yao, J. Zhou, J. Liu, ff. Feng and F. Li, Adv. Funct. Mater. , 2012, 22, 2667-2672. (b) Q. Liu, J.J. Peng, L.N. Sun and F.Y. Li, ACS Nano, 2011,5, 8040-8048. (c)N.N.Tu and L. Y. Wang, Chem. Commun. , 2013, 49, 6319-6321. (d) C. L. Zhang, Y. X. Yuan, S. M. Zhang, Y. H. Wang and Z. H. Liu, Angew. Chem. Int. Edit. , 2011, 50, 6851-6854.)。遺憾的是，據(jù)我們所 知，關(guān)于UCNPs的膽固醇選擇性熒光探針一直無(wú)人報(bào)道。因此，我們發(fā)展了一種基于FRET 的膽固醇傳感器，用于檢測(cè)人體血清中膽固醇的含量。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料及其制法和檢測(cè) 膽固醇的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0008] -種制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的方法，它由下列步驟組成：
[0009] 步驟 1.以 lmmol REC13(0. 78mmol YC13, 0· 2mmol YbCl3, 0· 02mmol ErCl3)為反應(yīng) 單體，加入7. 5mL油酸和17. 5mLl-十八碳烯，攪拌均勻，溶液加熱到160°C，保持30min。冷 卻到室溫，分別加入1. 6-4. Ommol順/和2. 5mmol NaOH的甲醇溶液加入其中，攪拌30min， 蒸發(fā)掉甲醇，溶液在氬氣保護(hù)下加熱到280-300°C，反應(yīng)lh，冷卻到室溫，反應(yīng)溶液加入乙 醇沉淀，離心，用水和乙醇洗滌，得到OA-UCNPs ;
[0010] 步驟2.將100mg OA-UCNPs分散在10mL水溶液中，逐滴加入0. 1M的鹽酸溶液，直 至pH = 3-5,常溫?cái)嚢?h，離心，用乙醇水溶液洗滌，得到無(wú)配體的UCNPs ;
[0011] 步驟3.將3.0ge-環(huán)糊精（⑶）加入到含有1.02g檸檬酸（Cit)的1.8mL水溶液 中，然后，把混合物溶液倒入一個(gè)小燒杯內(nèi)，置于烘箱中，l〇5°C，反應(yīng)3h，得到的產(chǎn)品用異丙 醇重結(jié)晶，產(chǎn)物在60°C的烘箱中干燥24h，得CD-Cit ;
[0012] 步驟4.將15mL二甘醇（DEG)和2mL CD-Cit (3. 0g)的水溶液混合，把分散在5mL 水溶液中的UCNPs (10mg)加入其中，混合物在氬氣保護(hù)下加熱到100°C，反應(yīng)30min，然后蒸 發(fā)除去水，溶液在160°C下，反應(yīng)l_12h，冷卻到室溫，離心（16000rpm，10min)，用乙醇水溶 液洗滌，真空干燥，得到⑶-Cit-UCNPs待用；
[0013] 步驟 5 將 30mg CD-Cit-UCNPs 分散在 5mL 二次水中，10mg 羅丹明 B(RB)的 2mL 水溶液緩慢加入上述二次水中，室溫下攪拌24h，離心（18000rpm，10min)，用水洗滌，得到 RB-⑶-Cit-UCNPs復(fù)合材料，即環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。
[0014] 根據(jù)上述復(fù)合材料制法制得的環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。
[0015] 上述的復(fù)合材料在檢測(cè)膽固醇中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的OA-UCNPs經(jīng)X-射線衍射分析（XRD)，結(jié)果表明制備的材料的每個(gè)衍射 峰的晶面都和標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)完全對(duì)應(yīng)，沒有雜峰出現(xiàn)，是純的六方相的NaYF 4納米材料（見附圖 1)。
[0017] 本發(fā)明的OA-UCNPs分散在環(huán)己烷溶液中，經(jīng)透射電鏡（TEM)和高分辨透射電鏡 (HRTEM)分析，結(jié)果表明制備的材料是均勻的納米粒子，該納米粒子有明顯的晶格條紋，說 明該材料的高度結(jié)晶性（見附圖2a和2b)。去除油酸后的UCNPs分散在水溶液中，經(jīng)TEM 和HRTEM分析，可以看到納米粒子的大小和形貌均沒有明顯變化，在水溶液中有良好的分 散性，說明油酸分子已經(jīng)基本去除干凈（見附圖2c)，在（110)面仍能看到清晰的晶格條紋， 說明其高結(jié)晶本性未被改變（見附圖2d)。
[0018] 本發(fā)明的CD-Cit經(jīng)質(zhì)譜（MS)分析，結(jié)果表明存在檸檬酸上的端羧基與環(huán)糊精上 的羥基形成酯后化合物的峰，說明β_環(huán)糊精、檸檬酸改性成功（見附圖3)。
[0019] 本發(fā)明的OA-UCNPs、UCNPs、CD-Cit和CD-Cit-UCNPs經(jīng)傅里葉變換紅外光譜 (FT-IR)分析，結(jié)果表明在OA-UCNPs光譜中，兩個(gè)在2921CHT 1和2854CHT1的峰可以分別歸 屬于亞甲基的不對(duì)稱和對(duì)稱伸縮振動(dòng)，在1554cm 1和1462cm 1處的峰分別歸屬于羧基的不 對(duì)稱和對(duì)稱伸縮振動(dòng)，由此可以證明上轉(zhuǎn)換材料外面包裹了一層油酸分子。UCNPs的紅外 光譜可以看出，亞甲基和羧基的峰幾乎消失，只存在1640CHT 1水的峰，說明油酸的去除比較 徹底，所以它的水溶液在TEM圖中具有良好的分散性。⑶-Cit的紅外光譜圖中，1732CHT 1和 1202CHT1兩個(gè)峰的存在，說明環(huán)糊精和檸檬酸之間已經(jīng)形成酯類化合物。而⑶-Cit-UCNPs 在經(jīng)過水和乙醇深度洗滌后，在1726CHT1和1202CHT1處也分別出現(xiàn)了⑶-Cit中的特征峰， 說明⑶-Cit已經(jīng)成功地包裹到上轉(zhuǎn)換材料上（見附圖4)。
[0020] 本發(fā)明的RB-⑶-Cit-UCNPs復(fù)合材料經(jīng)X-射線光電子能譜（XPS)分析，結(jié)果表明 能同時(shí)觀察到隊(duì)似、￥、？、￥1 331'、(：和0，說明1?和此即8已經(jīng)結(jié)合在了一起（見附圖5)。
[0021] 本發(fā)明合成的復(fù)合材料應(yīng)用于檢測(cè)膽固醇，加入膽固醇后，膽固醇誘導(dǎo)羅丹明 B(RB)游離出β-環(huán)糊精（⑶）的空腔，致使FRET減弱，上轉(zhuǎn)換熒光增強(qiáng)，以此來檢測(cè)膽固醇 的含量。
[0022] 本發(fā)明合成的復(fù)合材料應(yīng)用于檢測(cè)膽固醇，不需要使用膽固醇選擇性酶或者抗 體，同時(shí)采用980nm光作為激發(fā)光源，消除了來自生物樣品的背景熒光干擾，提高了信噪 t匕，可以大大增加靈敏度。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1為本發(fā)明的固體粉末OA-UCNPs (0A-NaYF4: Yb，Er)的X-射線衍射圖（XRD)，底 部的直線圖是六方相NaYF4的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)圖（JCPDS28-1192)。
[0024] 圖2為本發(fā)明的固體粉末OA-UCNPs分散在環(huán)己烷溶液中的TEM(a)和HRTEM(b) 圖以及去油酸的UCNPs水溶液的TEM(c)和HRTEM(d)圖。
[0025] 圖3為本發(fā)明的⑶-Cit水溶液的質(zhì)譜表征圖（MS)。
[0026] 圖4為本發(fā)明的固體粉末OA-UCNPs、UCNPs、CD-Cit-UCNPs和CD-Cit的傅里葉變 換紅外光譜圖（FT-IR)。
[0027] 圖5為本發(fā)明的RB-CD-Cit-UCNPs的X-射線光電子能譜圖（XPS)。
[0028] 圖6為本發(fā)明的RB水溶液的紫外-可見吸收光譜（UV-vis，虛線）以及OA-UCNPs 環(huán)己烷溶液的上轉(zhuǎn)換熒光光譜（UCL，實(shí)線）。
[0029] 圖7為本發(fā)明的固體粉末的Tris-HCl緩沖溶液（濃度0· 5mg/mL，pH = 7. 4)，力口 入0-20(^1膽固醇（〇1〇)后的上轉(zhuǎn)換熒光光譜。插圖是61^(515-56511111的綠光積分強(qiáng)度 與640-685nm的紅光積分強(qiáng)度的比率）隨膽固醇含量變化的曲線圖。
[0030] 圖8為本發(fā)明的固體粉末的Tris-HCl緩沖溶液（濃度0· 5mg/mL，pH = 7. 4)，加入 80 μ Μ膽固醇，以及不加或者加入其它7類4mM的干擾物質(zhì)時(shí)的上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度變化（這7 類干擾物分別是1. NaCl，KC1，MgCl2, CaCl2, ZnCl2 ;2.甘氨酸和葡萄糖；3.谷胱甘肽和蛋黃 素；4.維生素 C ;5.硼酸和蔗糖；6.膽紅素，山梨糖和甘露醇；7.色氨酸）。
[0031] 圖9為本發(fā)明的固體粉末的Tris-HCl緩沖溶液（濃度0· 5mg/mL，pH = 7. 4)，在 不加以及加入80 μ Μ膽固醇或其它7類4mM的干擾物質(zhì)時(shí)的GRR(1.沒有添加物；2.膽固 醇；3.似(：1，1((：1，1%(：12,0 &(：12,211(：12;4.甘氨酸和葡萄糖；5.谷胱甘肽和蛋黃素 ；6.維生素 C ;7.硼酸和蔗糖；8.膽紅素，山梨糖和甘露醇；9.色氨酸）。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 實(shí)施例1.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0033] 步驟 1.以 lmmol REC13(0. 78mmol YC13, 0· 2mmol YbCl3, 0· 02mmol ErCl3)為反應(yīng) 原料，加入7. 5mL油酸和17. 5mLl-十八碳烯，攪拌均勻，溶液加熱到160°C，保持30min。冷 卻到室溫，分別加入4mmol順/和2. 5mmol NaOH的甲醇溶液，攪拌30min。蒸發(fā)掉甲醇，溶 液在氬氣保護(hù)下加熱到300°C，反應(yīng)lh，冷卻到室溫。反應(yīng)溶液加入乙醇沉淀，離心，用水和 乙醇洗幾次，得到白色沉淀，即OA-UCNPs ;
[0034] 步驟2.將100mg OA-UCNPs分散在10mL水溶液中，逐滴加入0. 1M的鹽酸溶液，直 至pH = 4,常溫?cái)嚢?h。離心，用乙醇水溶液洗幾次，得到無(wú)配體的UCNPs ;
[0035] 步驟3.將3. 0g β -環(huán)糊精（CD)加入到含有1. 02g檸檬酸（Cit)的1. 8mL水溶液 中。然后，把混合物溶液倒入一個(gè)小燒杯內(nèi)，置于烘箱中，l〇5°C，反應(yīng)3h。得到的產(chǎn)品用異 丙醇重結(jié)晶，產(chǎn)物在60°C的烘箱中干燥24h，得⑶-Cit ;
[0036] 步驟4.將15mL二甘醇（DEG)和2mL CD-Cit (3. 0g)的水溶液混合，把分散在5mL 水溶液中的UCNPs(lOmg)加入其中?；旌衔镌跉鍤獗Ｗo(hù)下加熱到100°C，反應(yīng)30min，然后 蒸發(fā)除去水，溶液在160°C下，反應(yīng)lh，冷卻到室溫，離心（16000rpm，10min)，用乙醇水溶液 洗3次，真空干燥，待用；
[0037] 步驟5將30mg CD-Cit-UCNPs分散在5mL二次水中，10mg羅丹明B (RB)的2mL水 溶液緩慢加入其中。室溫下攪拌24h，離心（18000rpm，10min)，水洗3次，得到環(huán)糊精衍生 物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。
[0038] 實(shí)施例2.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0039] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，但NH4F的物質(zhì)的量 分別為1. 6和2. 8mmol，其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0040] 實(shí)施例3.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0041] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，但步驟1中溶液在 氬氣保護(hù)下加熱到280°C，其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0042] 實(shí)施例4.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0043] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，但步驟1中溶液在 氬氣保護(hù)下加熱到290°C，其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0044] 實(shí)施例5.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0045] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，但步驟2中鹽酸調(diào) 節(jié)pH = 3,其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0046] 實(shí)施例6.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0047] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，但步驟2中鹽酸調(diào) 節(jié)pH = 5,其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0048] 實(shí)施例7.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0049] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，步驟4中溶液在 160°C下，反應(yīng)6h，其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0050] 實(shí)施例8.環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的制備
[0051] 按實(shí)施例1的步驟制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料，步驟4中溶液在 160°C下，反應(yīng)12h，其他步驟相同。結(jié)果同實(shí)施例1。
[0052] 實(shí)施例9.膽固醇的熒光檢測(cè)
[0053] 制備的 RB-CD-Cit-UCNPs (lmg)溶解在 2mL 水中，并用 Tris-HCl (ρΗ7· 4)稀釋，取 90 μ L該溶液與10 μ L不同濃度膽固醇（終濃度0-200 μ Μ)的乙醇溶液混合，靜置40min后 進(jìn)行上轉(zhuǎn)換熒光測(cè)定，結(jié)果見圖7。
[0054] 實(shí)施例10.血清中膽固醇檢測(cè)的干擾實(shí)驗(yàn)
[0055] 0· 5mg/mL RB-CD-Cit-UCNPs 的 Tris-HCl 緩沖溶液（2ml) (pH = 7. 4)中加入 80 μ Μ 膽固醇，不加或者加入其它7類4mM的干擾物質(zhì)，考察上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度變化（這7類干擾物 分別是1.似(：1，1((：1，1%(：1 2,0&(：12,211(：12;2.甘氨酸和葡萄糖 ；3.谷胱甘肽和蛋黃素；4.維 生素 C ;5.硼酸和蔗糖；6.膽紅素，山梨糖和甘露醇；7.色氨酸）（結(jié)果見圖8和9)。
[0056] 實(shí)施例11.血清中膽固醇的檢測(cè)
[0057] 血清中膽固醇的檢測(cè)用的是成人血清（由南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院提供）。0. 5mL血 清與4. 5mL乙醇混合，靜置lOmin，離心（4000rpm，lOmin),不同種類的血清上清液（10 μ L) 與RB-⑶-Cit-UCNPs的Tris-HCl緩沖溶液（pH = 7. 4, 90 μ L)混合，終濃度臨床分析結(jié)果 分別含有17. 2、25. 6、39. 3、58. 7、73. 6和98. 5 μ Μ的膽固醇，40min后，采用本發(fā)明方法測(cè)定 膽固醇的含量（結(jié)果見表1)。
[0058] 表1血清樣品中膽固醇含量的臨床分析和本發(fā)明方法分析結(jié)果對(duì)照表
[0059]

【權(quán)利要求】
1. 一種制備環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的方法，其特征是它包括下列步驟： 步驟 1.以 0.78mmol YCl3,0.2mmol YbCldP0.02mmol ErCl3 組成的 lmmol REC13 為反 應(yīng)單體，加入7. 5mL油酸和17. 5mLl-十八碳烯，攪拌均勻，溶液加熱到160°C，保持30min， 冷卻到室溫，加入1. 6-4. Ommol順/和2. 5mmol NaOH的甲醇溶液加入其中，攪拌30min，蒸 發(fā)除去甲醇，溶液在氬氣保護(hù)下加熱到280-300°C，反應(yīng)lh，冷卻到室溫，反應(yīng)溶液加入乙 醇沉淀，離心，用水和乙醇洗滌，得到OA-UCNPs ; 步驟2.將lOOmg OA-UCNPs分散在10mL水溶液中，逐滴加入0. 1M的鹽酸溶液，直至pH =3-5,常溫?cái)嚢?h，離心，用乙醇水溶液洗滌，得到無(wú)配體的UCNPs ; 步驟3.將3. 0g β -環(huán)糊精（CD)加入到含有1. 02g檸檬酸（Cit)的1. 8mL水溶液中， 然后，把混合物溶液倒入一個(gè)小燒杯內(nèi)，置于烘箱中，l〇5°C，反應(yīng)3h，得到的產(chǎn)品用異丙醇 重結(jié)晶，產(chǎn)物在60°C的烘箱中干燥24h，得CD-Cit ; 步驟4.將15mL二甘醇（DEG)和2mL的3. 0g CD-Cit的水溶液混合，把分散在5mL水 溶液中的UCNPs (10mg)加入其中，混合物在氬氣保護(hù)下加熱到100°C，反應(yīng)30min，然后蒸發(fā) 除去水，溶液在160°C下，反應(yīng)l_12h，冷卻到室溫，離心（16000rpm，lOmin)，用乙醇水溶液 洗滌，真空干燥，得到⑶-Cit-UCNPs待用； 步驟5將30mg CD-Cit-UCNPs分散在5mL二次水中，10mg羅丹明B(RB)的2mL水溶液緩 慢加入上述二次水中，室溫下攪拌24h，離心，用水洗滌，得到RB-⑶-Cit-UCNPs復(fù)合材料， 即環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)合材料制法制得的環(huán)糊精衍生物改性的上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料。
3. 權(quán)利要求2所述的復(fù)合材料在定量檢測(cè)膽固醇中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104231335SQ201410398916
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年8月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月13日
【發(fā)明者】朱俊杰, 丁玉潔, 張曉霞, 朱浩 申請(qǐng)人:南京大學(xué)