一種翼首草的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種翼首草的檢測方法。本發(fā)明的方法可以同時(shí)對翼首草中馬錢苷、熊果酸和/或齊墩果酸進(jìn)行檢測，并通過簡單的流動(dòng)相梯度變化，即能實(shí)現(xiàn)極性差別較大的馬錢苷和熊果酸、齊墩果酸的分離和含量測定，進(jìn)一步滿足實(shí)際檢測需求。
【專利說明】-種翼首草的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種翼首草的檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 翼首草為川續(xù)斷科翼首花屬植物匙花葉翼首草Pteroc巧halus hookeri (Clarke) 化eck，W根或帶根全草入藥，是藏族習(xí)用藥材。現(xiàn)代研究表明；翼首草主要含皂巧、環(huán)帰 離聰?shù)然瘜W(xué)成分，并且認(rèn)為齊域果酸、熊果酸是翼首草中主要的活性成分，近幾年的研究表 明，具有顯著抗炎效果的馬錢巧也是翼首草的主要有效成分之一。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中對翼首草的檢測方法研究較多，中國專利CN103792303A翼首草藥材 的檢測方法，提供了翼首草藥材的檢測方法，它是通過超快速液相色譜法UFLC進(jìn)行測定 的，流動(dòng)相；流動(dòng)相A為0. 2 %磯酸水溶液，流動(dòng)相B為己膳，其梯度程序如下；0 - lOmin， 10 % 一 19 % B ;10 一 17min，19 % 一 30 % B ;17 一 25min，30 % 一 100 % B。中國專利 CN102645507A提供一種清肺止咳制劑的檢測方法，所述清肺止咳劑的原料藥包含余甘子、 木香和翼首草，其特征在于，該方法通過薄層色譜法鑒別所述清肺止咳制劑中的余甘子、木 香和/或翼首草，其中對翼首草的展開劑為環(huán)己焼-己醇。但上述文獻(xiàn)均為針對齊域果酸 和熊果酸的薄層或含量檢測方法，未發(fā)現(xiàn)能夠同時(shí)檢測馬錢巧、熊果酸和/或齊域果酸的 檢測方法，造成翼首草檢測結(jié)果與實(shí)際需求偏差較大，無法對其藥效成分做出較為全面的 評價(jià)，且檢測方法復(fù)雜，操作困難。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種翼首草的檢測方法。該方法能夠 同時(shí)對馬錢巧、熊果酸和/或齊域果酸進(jìn)行檢測。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0006] 一種翼首草的檢測方法，包括如下鑒別和/或含量檢測方法：
[0007] 鑒別：
[0008] 取翼首草粉末0. 2-lg，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇20-80ml，密塞，回流或超聲 處理0. 5-1.化，放冷，濾過，濾液濃縮至2-lOml，作為供試品溶液；另取馬錢巧、齊域果酸對 照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg馬錢巧和0. 1-0. 3mg齊域果酸的混合溶液，作為對照 品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2-10 y 1，分別點(diǎn)于同一 娃膠G薄層色譜板上，W體積份數(shù)比為4-7 ;1-3 ;1-3的環(huán)己焼-氯仿-甲醇為展開劑，展 開，取出，瞭干，噴W體積百分比為1%的香草酵硫酸己醇溶液，105C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰， 日光下檢視；供試品圖譜中，在與對照溶液相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[000引含量檢測：
[0010] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；梯 度洗脫，甲醇-己膳-體積份數(shù)比0.05 %磯酸水溶液為流動(dòng)相，梯度變化如下： Omin - 15min - 20min - 60min，甲醇的體積百分比變化為 28%- 28%- 28%- 28%,己 膳的體積百分比變化為0% - 0% - 62% - 62%，體積份數(shù)比0. 05%磯酸水溶液的體積百 分比變化為72 % - 72 % - 10 % - 10 %，檢測波長為210-230nm ;理論板數(shù)按馬錢巧峰計(jì)算 不低于2000 ;
[0011] 對照品溶液的制備；取馬錢巧對照品、齊域果酸對照品、熊果酸對照品，加甲醇制 成每Iml含馬錢巧0. Img、齊域果酸0. Img、熊果酸0. 2mg的混合溶液，即得對照品溶液；
[0012] 供試品溶液的制備；取翼首草粉末2-8g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加入 20-70ml甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取0. 5-化或回流提取1-化，放冷，再稱定重量，用甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10-30ml，濃縮至2-7ml，即得；
[0013] 測定法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各5-20 y 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
[0014] 本發(fā)明優(yōu)選的，上述翼首草的檢測方法，其中含量檢測方法中的供試品溶液的制 備為：取翼首草粉末5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加入50ml甲醇，密塞，稱定重量，超 聲處理比，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml， 濃縮至5ml，即得；
[0015] 測定法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 U 1，注入液相色譜儀，測定，即 得。
[0016] 本發(fā)明還優(yōu)選的，上述翼首草的檢測方法，其中鑒別方法為：
[0017] 取翼首草粉末0. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超聲處理比，放冷， 濾過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取馬錢巧、齊域果酸對照品，加甲醇制成每Iml 含馬錢巧0. Img、齊域果酸0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取 上述二種溶液各5 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層色譜板上，W體積份數(shù)比為5:2:2的環(huán)己 焼-氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，瞭干，噴W體積百分比為1%香草酵硫酸己醇溶液， 105C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品圖譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0018] 本發(fā)明的有益效果
[0019] 1、本發(fā)明同時(shí)對翼首草中的馬錢巧、熊果酸和齊域果酸進(jìn)行鑒別或含量檢測，對 其有效成分的檢測更加全面，進(jìn)一步滿足實(shí)際檢測需求。
[0020] 2、齊域果酸、熊果酸的極性較小，而馬錢巧的極性較大，二者的保留時(shí)間相差甚 大，常規(guī)的HPLC條件難W同時(shí)檢測，本發(fā)明通過簡單的梯度變化即能較好的完成檢測，且 操作簡單。
[0021] 3、鑒別實(shí)驗(yàn)中，因?yàn)轳R錢巧和齊域果酸的極性相差甚大，故展開劑中甲醇的比例 對展開效果有很大的影響，本發(fā)明通過大量試驗(yàn)并付出了創(chuàng)造性的勞動(dòng)，優(yōu)選出了展開劑 的最佳比例。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 圖1為翼首草藥材的薄層色譜圖譜；
[002引 圖2為空白溶劑的HPLC圖譜；
[0024] 圖3為混合對照溶液的HPLC圖譜；
[002引圖4為翼首草樣品的HPLC圖譜；
[0026] 其中，圖I中，I為馬錢巧為齊域果酸混合對照；2為翼首草樣品（I) ;3為翼首草樣 品（2) ;4為翼首草樣品（3);
[0027] 圖3中，1為馬錢巧對照峰；2為齊域果酸對照峰；3為熊果酸對照峰；
[002引 圖2-圖4的橫坐標(biāo)是時(shí)間，單位：分鐘（min);縱坐標(biāo)是電壓，單位：毫伏（mv)。

【具體實(shí)施方式】
[0029] 下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
[0030] 實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例所用的翼首草均為金巧藏藥股份有限公司提供，批號20131201、 20131202 和 20131203。
[0031] 實(shí)驗(yàn)例1 ;翼首草鑒別實(shí)驗(yàn)
[0032] 取翼首草粉末0. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超聲處理比，放冷， 濾過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取馬錢巧、齊域果酸對照品適量，加甲醇制成每 Iml含馬錢巧0. Img、齊域果酸0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸 取上述二種溶液各5yl，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層色譜板上，W體積份數(shù)比為5:2:2的環(huán)己 焼-氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，瞭干，噴W體積比1 %香草酵硫酸己醇溶液，105C加 熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品圖譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。
[003引結(jié)果分析；展開劑中甲醇的比例對展開效果有很大的影響，當(dāng)甲醇比例較小，馬錢 巧難W展開甚至未展開，而當(dāng)甲醇比例較大時(shí)，齊域果酸斑點(diǎn)展開過快至溶劑前沿。因此， 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)展開劑比例在環(huán)己焼-氯仿-甲醇（體積比4-7 :1-3-1-3)范圍內(nèi)展開效果較好， 其中環(huán)己焼-氯仿-甲醇（體積比5:2:2)最佳。
[0034] 實(shí)驗(yàn)例2 ;翼首草含量檢測實(shí)驗(yàn) [00巧]1.儀器、試藥和供試樣品
[0036] 儀器；高效液相色譜儀；日立心2100粟，L-2400紫外檢測器；島津AUW220D電子天 平。
[0037] 對照品；馬錢巧對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111640-201005);齊域 果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110709-200505);熊果酸對照品（中國食品 藥品檢定研究院，批號：110742-201220)。
[0038] 2.檢測波長的選擇
[0039] 分別取馬錢巧對照品溶液、齊域果酸對照品溶液、熊果酸對照品溶液及混合對照 溶液，于190-600nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，根據(jù)紫外吸收圖譜，選定210-230、尤其220nm為 檢測波長。
[0040] 3.流動(dòng)相選擇
[0041] 研究發(fā)現(xiàn)，馬錢巧極性較大，齊域果酸與熊果酸為同分異構(gòu)體，極性較小。在反相 色譜系統(tǒng)中，采用等度洗脫，馬錢巧與齊域果酸、熊果酸保留時(shí)間差異很大，因此，需采用梯 度洗脫。研究表明，流動(dòng)相中有機(jī)相（甲醇、己膳）比例越高，齊域果酸與熊果酸分離度越 好，而有機(jī)相比例提高，馬錢巧保留時(shí)間變化較大，難W掌控，因此，本發(fā)明W甲醇（A)-己 膳炬)-體積份數(shù)比0.05%磯酸水溶液（C)為流動(dòng)相，梯度洗脫，梯度變化見
[0042] 表1流動(dòng)相梯度變化
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 一種翼首草的檢測方法，特征在于，包括如下鑒別和/或含量檢測方法： 鑒別： 取翼首草粉末〇. 2-lg，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇20-80ml，密塞，回流或超聲處理 0. 5-1. 5h，放冷，濾過，濾液濃縮至2-10ml，作為供試品溶液；另取馬錢苷、齊墩果酸對照 品，加甲醇制成每lml含0. 1-0. 3mg馬錢苷和0. 1-0. 3mg齊墩果酸的混合溶液，作為對照品 溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2-10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅 膠G薄層色譜板上，以體積份數(shù)比為4-7 :1-3 :1-3的環(huán)己烷-氯仿-甲醇為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以體積百分比為1%的香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日 光下檢視；供試品圖譜中，在與對照溶液相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 含量檢測： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；梯度 洗脫，甲醇-乙腈-體積份數(shù)比〇. 05 %磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度變化如下： Omin - 15min - 20min - 60min，甲醇的體積百分比變化為 28% - 28% - 28% - 28%,乙 腈的體積百分比變化為62%- 62%，體積份數(shù)比0. 05%磷酸水溶液的體積百 分比變化為72% - 72% - 10% - 10%，檢測波長為210-230nm ;理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算 不低于2000 ; 對照品溶液的制備：取馬錢苷對照品、齊墩果酸對照品、熊果酸對照品，加甲醇制成每 lml含馬錢苷0. lmg、齊墩果酸0. lmg、熊果酸0. 2mg的混合溶液，即得對照品溶液； 供試品溶液的制備：取翼首草粉末2-8g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加入20-70ml 甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取0. 5-2h或回流提取l-2h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10_30ml，濃縮至2-7ml，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各5-20μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的翼首草的檢測方法，特征在于，含量檢測方法中的供試品溶 液的制備為：取翼首草粉末5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加入50ml甲醇，密塞，稱定 重量，超聲處理lh，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 25ml，濃縮至5ml，即得； 測定法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的翼首草的檢測方法，特征在于，鑒別方法為： 取翼首草粉末〇. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超聲處理lh，放冷，濾 過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取馬錢苷、齊墩果酸對照品，加甲醇制成每lml含 馬錢苷0. lmg、齊墩果酸0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述 二種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上，以體積份數(shù)比為5:2:2的環(huán)己烷-氯 仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積百分比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，l〇5°C加 熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品圖譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的斑點(diǎn)。
【文檔編號】G01N30/90GK104237446SQ201410403099
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月15日
【發(fā)明者】班瑪才仁, 孫緒丁, 任松鵬, 趙麗麗 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司