一種檢測(cè)畜禽毛發(fā)中抗病毒藥物殘留量的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及以超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)畜禽毛發(fā)中金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留量的方法。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)畜禽毛發(fā)中抗病毒藥物殘留量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物殘留檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種定性和定量檢測(cè)畜禽毛發(fā)中金剛烷 胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留量的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 金剛烷胺是由人工合成飽和三環(huán)癸烷的氨基衍生物，用于亞洲A型流感病毒的預(yù) 防和早期治療，也用于治療帕金森病引起的神經(jīng)障礙和預(yù)防動(dòng)物常見(jiàn)的病毒類疾病如禽流 感等。金剛乙胺是金剛烷胺類似物，也用于預(yù)防和治療A型流感病毒感染，臨床療效優(yōu)于金 剛烷胺，且不良反應(yīng)小于金剛烷胺。病毒靈，通用名：?jiǎn)徇遥瑔徇覍?duì)多種病毒（包括甲型 H1N1流感、流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒等）有抑制作用。用于流感、流 行性腮腺炎、水痘、皰疹、濾泡性結(jié)膜炎等的防治。2012年12月我國(guó)爆發(fā)"速生雞"事件，曝 光雞在飼養(yǎng)過(guò)程中被違規(guī)喂食利巴韋林、金剛烷胺等抗病毒藥物。違禁抗病毒藥物的濫用 不僅造成雞肉風(fēng)味和品質(zhì)的下降，更會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性的發(fā)生和藥物殘留，并通過(guò)食物鏈 影響人類健康和破壞生態(tài)平衡，造成嚴(yán)重不良后果。美國(guó)食品藥物管理局（FDA)早于2005 年就禁止將人類抗病毒藥物用于畜禽類；我國(guó)于2005年12月發(fā)布《關(guān)于清查金剛烷胺等 抗病毒藥物的緊急通知》，禁止金剛烷胺等抗病毒藥作為獸用藥，但由于其價(jià)格低廉、效果 良好，仍有不法分子大量使用金剛烷胺等抗病毒藥物用于動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療。濫用抗 病毒藥物會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物中毒，使病毒產(chǎn)生不同程度的耐藥性，并誘發(fā)病毒產(chǎn)生變異，嚴(yán)重影響 了國(guó)家動(dòng)物疫病防控工作。
[0003] 藥物殘留監(jiān)測(cè)通常檢測(cè)活體動(dòng)物的尿液或血液樣本，或者檢測(cè)宰殺后動(dòng)物的組織 樣本，如肌肉、肝臟等。由于獸藥殘留檢測(cè)的時(shí)滯性，同時(shí)獸藥在生物組織中受到酶類等生 物大分子的作用，通常易于代謝而具有較高的清除率，因此有時(shí)追溯一些非正常的或非法 使用的獸藥則變得困難。建立快速靈敏的檢測(cè)方法和尋找可活體取樣的檢材一直是獸藥殘 留分析研究的兩個(gè)重要方向。在過(guò)去的十幾年間，人們從法醫(yī)學(xué)檢測(cè)人體頭發(fā)中興奮劑等 違禁藥物得到啟發(fā)，探討并研究了動(dòng)物毛發(fā)作為檢材的可行性。由于動(dòng)物毛發(fā)易采集、運(yùn) 輸，保存，更重要的是可以在宰前做出安全性評(píng)價(jià)的特點(diǎn)，毛發(fā)中缺少血液循環(huán)，缺少降解 藥物的各種活性物質(zhì)和快速的排泄途徑，使得藥物代謝緩慢而可在毛發(fā)中的保留時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn) 長(zhǎng)于其他組織。與一般的組織樣品（肌肉、肝臟、腎臟、脂肪和肺臟等）相比，毛發(fā)不需要將 動(dòng)物屠宰就可獲得，較之前者簡(jiǎn)單、方便。另外，由于毛發(fā)的結(jié)構(gòu)和成分特點(diǎn)以及較低的代 謝活性，決定了藥物進(jìn)入毛發(fā)后在其中保留時(shí)間久，可作為長(zhǎng)期檢測(cè)樣本，這是尿液或血液 無(wú)法比擬的，尤其對(duì)于半衰期較短的藥物，如金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍等，在經(jīng)過(guò)一定 時(shí)間的休藥期后，從食用組織或血、尿中已無(wú)法檢出藥物殘留證明是否使用過(guò)此禁用藥物， 而毛發(fā)因藥物在其中代謝緩慢，在較長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)仍可作為檢測(cè)樣本，提供違禁藥物使用 證明依據(jù)。檢測(cè)畜禽毛發(fā)中是否含有抗病毒類藥物殘留，從而達(dá)到從養(yǎng)殖源頭控制禁用藥 物使用的目的。因此，研究建立畜禽毛發(fā)中金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍藥物殘留的檢測(cè)方 法，對(duì)于有效監(jiān)控該類藥物的使用、保障我國(guó)動(dòng)物性食品安全具有重要的意義。
[0004] 我國(guó)對(duì)金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留的檢測(cè)方法研究相對(duì)較少，也未曾制 定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，僅有一個(gè)地方標(biāo)準(zhǔn)"DB32/T1163-2007.雞肝中金剛烷胺殘留檢 測(cè)--液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法"，文獻(xiàn)方法有氣相色譜法（GC)、液相色譜法（LC)及液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)。這些方法多應(yīng)用于血液、醫(yī)藥和動(dòng)物組織中金剛烷胺類藥物 的測(cè)定，而畜禽毛發(fā)中抗病毒類藥物殘留量的檢測(cè)方法未見(jiàn)報(bào)道。
[0005] 本發(fā)明與已有文獻(xiàn)和專利相比，具有更高的回收率和更低的檢測(cè)限及定量限，表 現(xiàn)為如下幾點(diǎn) ：
[0006] 1、首次對(duì)畜禽毛發(fā)中抗病毒類藥物進(jìn)行檢測(cè)。
[0007] 2、空白豬毛和雞毛添加濃度為2. 0、10. 0、100. 0 μ g/kg時(shí)，金剛烷胺方法的平 均回收率為89. 5%?108%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.58%?3. 46%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 為3. 85%?7. 48% ;金剛乙胺方法的平均回收率為86. 6%?107%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 為2. 11 %?4. 51%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3. 27%?7. 67% ;嗎啉胍方法的平均回收率為 85. 3%?102%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2. 94%?3. 74%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3. 95%? 7. 80%。
[0008] 3、采用內(nèi)標(biāo)法定量，金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍的檢出限（L0D)均達(dá)0. 5 μ g/ kg，定量限（L0Q)均達(dá) 2. 0 μ g/kg。
[0009] 超高效液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography\UPLC)是分離科 學(xué)中的一個(gè)全新類別，UPLC借助于HPLC(高效液相色法）的理論及原理，涵蓋了小顆粒填 料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容 量。目前，超高效液相色譜儀已經(jīng)開(kāi)始逐漸地投入液相實(shí)驗(yàn)中。
[0010] 超高效液相色譜儀優(yōu)點(diǎn)：
[0011] 超高效液相色譜法的原理與高效液相色譜法基本相同，所改變的地方有以下幾 占·
[0012] (1)小顆粒、高性能微粒固定相的出現(xiàn)。高效液相色譜的色譜柱，例如常見(jiàn)的十八 燒基娃膠鍵合柱，它的粒徑是5um，而超高效液相色譜的色譜柱，會(huì)達(dá)到3. 5um，甚至1. 7um。 這樣的孔徑更加利于物質(zhì)分離。
[0013] (2)超高壓輸液泵的使用。由于使用的色譜柱粒徑減小，使用時(shí)所產(chǎn)生的壓力也自 然成倍增大。故液相色譜的輸液泵也相應(yīng)改變成超高壓的輸液泵。
[0014] (3)高速采樣速度的靈敏檢測(cè)器。
[0015] (4)使用低擴(kuò)散、低交叉污染自動(dòng)進(jìn)樣器。配備了針內(nèi)進(jìn)樣探頭和壓力輔助進(jìn)樣技 術(shù)；
[0016] (5)儀器整體系統(tǒng)優(yōu)化設(shè)計(jì)。色譜工作站配備了多種軟件平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)超高效液相分 析方法與高效液相分析方法的自動(dòng)轉(zhuǎn)換。
[0017] 與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1. 7 倍，它縮短了分析時(shí)間，同時(shí)減少了溶劑用量降低了分析成本。
[0018] 如今，超高效液相色譜儀主要應(yīng)用于
[0019] (1)藥物分析如天然產(chǎn)物中復(fù)雜組分的分析
[0020] (2)生化分析如蛋白質(zhì)、多肽、代謝組學(xué)等生化樣品
[0021] (3)食品分析如食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)
[0022] (4)環(huán)境分析如水中微囊藻毒素的檢測(cè)
[0023] (5)其他如化妝品中違禁品的檢測(cè)
[0024] 超高效液相色譜方法的突出優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在節(jié)省分析時(shí)間和溶劑用量上，尤其對(duì)基 質(zhì)復(fù)雜的痕量組分測(cè)定采用該方法以提高分析通量是今后發(fā)展的必然趨勢(shì)。
[0025] 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜工作原理：
[0026] 化合物分子在真空條件下受電子流的"轟擊"或強(qiáng)電場(chǎng)等其他方法的作用，電離成 離子，同時(shí)發(fā)生某些化學(xué)鍵有規(guī)律的斷裂，生成具有不同質(zhì)量的帶正電荷的離子，這些離子 按質(zhì)荷比（m/z)的大小被收集并記錄的圖譜。
[0027] 電噴霧電離（ESI):
[0028] 樣品溶液在電場(chǎng)的作用下形成帶高度電荷的霧狀小液滴，在向質(zhì)量分析器移動(dòng)的 過(guò)程中，液滴因溶劑不斷揮發(fā)而縮小，導(dǎo)致表面電荷密度不斷增大，當(dāng)電荷之間的排斥力足 以克服液滴的表面張力時(shí)，液滴發(fā)生裂分，如此反復(fù)進(jìn)行，最后得到帶單電荷或多電荷的離 子。
[0029] 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜優(yōu)點(diǎn)：
[0030] (1)不需進(jìn)行衍生化。
[0031] (2)在單個(gè)分析中實(shí)現(xiàn)確認(rèn)定量。
[0032] (3)在復(fù)雜很臟的基體中的低檢測(cè)限。
[0033] (4)提高實(shí)驗(yàn)室效率/產(chǎn)出率（使用固相萃取技術(shù)）。
[0034] (5)更可靠和可值得信賴的測(cè)試結(jié)果。
[0035] (6)質(zhì)量范圍：5_1200amu
[0036] (7)分辨率：彡 0· 4Da
[0037] ⑶靈敏度高
[0038] (9)定量重現(xiàn)性好


【發(fā)明內(nèi)容】

[0039] 本發(fā)明的目的在于提供了一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確且經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)畜禽毛發(fā)中金 剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留量的方法。
[0040] 本發(fā)明包括下列步驟：
[0041] a.取適量畜禽毛發(fā)試樣，清洗并剪碎；
[0042] b.稱取制備好的試樣；
[0043] c.加入D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，0. 2mol/L HCI溶液消解后用2. 0%三氯乙酸水 溶液+乙腈（1 :2V/V)溶液提取，加入氯化鈉分層；
[0044] d.提取液于60°C下氮?dú)獯蹈?，?%甲酸水溶液定容，待凈化處理；
[0045] e.待凈化液過(guò)MCX柱；
[0046] f.設(shè)定超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜條件；
[0047] g.凈化液供超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定；
[0048] h.數(shù)據(jù)處理與分析。
[0049] 本發(fā)明以超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜作為檢測(cè)的基本原理，現(xiàn)代超高效液 相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)配置有化學(xué)工作站、計(jì)算機(jī)和軟件系統(tǒng)在內(nèi)的數(shù)據(jù)采集與處 理系統(tǒng)，可檢測(cè)畜禽毛發(fā)中金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留量的方法。
[0050] 超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分為兩個(gè)步驟：數(shù)據(jù)采集與數(shù)據(jù)處理。儲(chǔ)液器 中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固 定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng) 時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分 離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀， 數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
[0051] 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：
[0052] 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取適量金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別配制成 1. Omg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18°C下避光儲(chǔ)存。
[0053] 標(biāo)準(zhǔn)中間液：取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各lmL，用甲醇分別稀釋成質(zhì)量濃度為10. Omg/L 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-18°C下避光儲(chǔ)存。
[0054] 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液：取上述標(biāo)準(zhǔn)中間液各lmL，用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為1. Omg/L的 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液，于-4°C下避光儲(chǔ)存。
[0055] D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液：稱取適量D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成1. Omg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為10. Omg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，再用甲醇-水 (1:1)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為200. 0 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于-4°C下避光儲(chǔ)存。
[0056] 此法根據(jù)選擇離子定性，內(nèi)標(biāo)法定量。配制金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍混合標(biāo)準(zhǔn) 溶液質(zhì)量濃度為〇. 5、2. 0、5. 0、10. 0、20. 0、100. 0 μ g/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入D15-金 剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液10. 〇 μ g/L進(jìn)行測(cè)定，以定量離子峰面積（y)對(duì)濃度（X，μ g/L)做標(biāo)準(zhǔn) 曲線。結(jié)果顯示，金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍在0. 5?100. 0 μ g/L范圍內(nèi)的線性關(guān)系良 好（r2 > 0. 999)。取空白豬毛和雞毛樣品，添加不同質(zhì)量濃度的金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉 胍混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件由高至低的質(zhì)量濃度進(jìn)行檢測(cè)，直至信噪比等于3 (S/N =3)和信噪比等于10(S/N = 10)時(shí)，確定豬毛和雞毛樣品中金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍 的檢出限（L0D)均為0. 5 μ g/kg，定量限（L0Q)均為2. 0 μ g/kg。
[0057] 取空白豬毛和雞毛樣品，添加金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別為 2. 0、10. 0、100. 0 μ g/kg，然后按照本方法進(jìn)行樣品前處理和測(cè)定，每個(gè)添加水平測(cè)定6次， 日內(nèi)精密度通過(guò)Id內(nèi)測(cè)定3個(gè)加標(biāo)水平下的6個(gè)平行樣品得到，日間精密度為連續(xù)6d(每 天測(cè)定1次）測(cè)定3個(gè)加標(biāo)水平下的樣品得到，結(jié)果顯示，金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍添 加濃度為2. 0、10. 0、100. 0 μ g/kg時(shí)，方法的平均回收率為85. 3%?108%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差為2. 81 %?4. 51%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4. 65%?7. 80%。精密度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 見(jiàn)表1和表2。
[0058] 表1空白豬毛中添加金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍日內(nèi)和日間精密度及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差（η = 6)
[0059]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)畜禽毛發(fā)中金剛烷胺、金剛乙胺和嗎啉胍殘留量的方法，其特征在于包括 以下步驟： a. 取適量畜禽毛發(fā)試樣，清洗并剪碎； b. 稱取制備好的試樣； c. 加入D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，0. 2mol/L HCI溶液消解后用2. 0%三氯乙酸水溶液 +乙腈（1:2 V/V)溶液提取，加入氯化鈉分層； d. 提取液于60攝氏度下氮?dú)獯蹈?，?%甲酸水溶液定容，待凈化處理； e. 待凈化液過(guò)MCX柱； f. 設(shè)定超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜條件； g. 凈化液供超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定； h. 數(shù)據(jù)處理與分析。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：用自來(lái)水洗出豬毛可見(jiàn)雜質(zhì)，毛發(fā)于 l%SDS+5%吐溫80+純水（1 :1 :1)超聲15分鐘，蒸餾水沖洗干凈，用濾紙吸干；將毛發(fā)50°C 干燥，放干燥器中備用； 用剪刀剪碎成1-2 mm，稱取毛發(fā)0. 5g于50mL離心管中，加入D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作 液50. 〇μ?，0. 2mol / L HCI溶液5 mL，混勻后65°C消解2小時(shí)，取出，加入8mL 2. 0%三氯 乙酸水溶液+乙腈（1:2)，潤(rùn)旋30 s，超聲提取30min后加入2g氯化鈉，潤(rùn)漩混勻2 min, 5000 r/min離心10 min，取上清液于另一管中，60°C下用氮?dú)獯蹈珊螅尤? mL2%甲酸水 溶液溶解，溶解液加載至已依次用3 mL甲醇、3 mL水活化過(guò)的MCX柱中，再依次用3 mL2% 的甲酸水溶液、3 mL甲醇淋洗，減壓抽干，用3 mL5%的氨水甲醇溶液（體積比）洗脫；洗脫 液在60°C下用氮?dú)獯蹈珊螅? mL V(0. 1%甲酸水溶液）：V (甲醇）=90 :10的溶液溶解殘 渣，渦旋30 s，經(jīng)0. 22 mm濾膜過(guò)濾后，上機(jī)測(cè)定； 設(shè)定液相色譜條件為： 色譜柱：Eclipse Plus C18 (RRHD 1.8 Mm，2.1X100 mm);流動(dòng)相 A 為 0.1% 甲酸水溶 液；B為甲醇；梯度洗脫程序：0?3· 0 min，2%?5%Β ;3· 0?5· 0 min，5%?90% Β ;5· 0?5· 1 min， 90%Β?2%Β ; 5· 1 ?7· 0 min，維持 2% Β ;流速(λ 25 mL/min ;柱溫 30°C ;進(jìn)樣體積：5. 0 μ? ; 質(zhì)譜條件：電離模式：電噴霧電離正離子模式（ESI + );檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ MRM);毛細(xì)管電壓：4 000 V;離子源溫度（TEM) :325 °C ;干燥氣溫度：300 °C ;干燥氣流 量：15 L/min ;霧化氣壓力：50 psi ;鞘氣溫度：400 °C ;鞘氣流量：12 L/min ;。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：用自來(lái)水洗出雞毛可見(jiàn)雜質(zhì)，毛發(fā)于 l%SDS+5%吐溫80+純水（1 :1 :1)超聲15分鐘，蒸餾水沖洗干凈，用濾紙吸干；將毛發(fā)50°C 干燥，放干燥器中備用； 用剪刀剪碎成1-2 mm，稱取毛發(fā)0. 5g于50mL離心管中，加入D15-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作 液50. 〇μ?，0. 2mol / L HCI溶液5 mL，混勻后65°C消解2小時(shí)，取出，加入8mL 2. 0%三氯 乙酸水溶液+乙腈（1:2)，潤(rùn)旋30 s，超聲提取40min后加入2g氯化鈉，潤(rùn)漩混勻2 min, 5000 r/min離心10 min，取上清液于另一管中，60°C下用氮?dú)獯蹈珊?，加? mL2%甲酸水 溶液溶解，溶解液加載至已依次用3 mL甲醇、3 mL水活化過(guò)的MCX柱中，再依次用3 mL2% 的甲酸水溶液、3 mL甲醇淋洗，減壓抽干，用3 mL5%的氨水甲醇溶液（體積比）洗脫；洗脫 液在60°C下用氮?dú)獯蹈珊?，? mL V(0. 1%甲酸水溶液）：V (甲醇）=90 :10的溶液溶解殘 渣，渦旋30 s，經(jīng)0. 22 mm濾膜過(guò)濾后，上機(jī)測(cè)定； 設(shè)定液相色譜條件為： 色譜柱：Eclipse Plus C18 (RRHD 1. 8 Mm，2. IX 100 mm);流動(dòng)相 A 為 0· 1% 甲酸水溶 液；B為甲醇；梯度洗脫程序：0?3· 0 min，2%?5%Β ;3· 0?5· 0 min，5%?90% Β ;5· 0?5· 1 min， 90%Β?2%Β ; 5· 1 ?7· 0 min，維持 2% Β ;流速(λ 25 mL/min ;柱溫 30°C ;進(jìn)樣體積：5. 0 μ? ; 質(zhì)譜條件：電離模式：電噴霧電離正離子模式（ESI + );檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ MRM);毛細(xì)管電壓：4 000 V;離子源溫度（TEM) :325 °C ;干燥氣溫度：300 °C ;干燥氣流 量：15 L/min ;霧化氣壓力：50 psi ;鞘氣溫度：400 °C ;鞘氣流量：12 L/min。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104155398SQ201410414448
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月21日
【發(fā)明者】羅林廣, 胡麗芳, 張大文, 廖且根, 霍俊宏 申請(qǐng)人:江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與標(biāo)準(zhǔn)研究所