水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，將目標(biāo)水樣用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，加入萃取劑密封、振蕩、超聲波萃取；用有機(jī)濾膜過濾萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中；加入脫水干燥劑到萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮；將濃縮后的液體用氮?dú)獯祾咧馏w積為1ml以下；將濃縮液萃取過濾液定容至1mL后轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中；采用內(nèi)標(biāo)法，用高效液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器進(jìn)行檢測；對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。本方法補(bǔ)充了水環(huán)境中懸浮顆粒物上吸附的諾氟沙星的含量，補(bǔ)充了抗生素檢測的空白。
【專利說明】水中懸淳顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于環(huán)境監(jiān)測【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種水環(huán)境中諾氟沙星的檢測方法，具體涉 及一種水中顆粒物上諾氟沙星萃取富集的定量方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 諾氟沙星是廣泛用于家畜的第三代氟喹諾酮類抗生素藥物，它具有光譜抗菌性， 對革蘭氏陰性菌和陽性菌都有明顯的抗菌作用。因此，被廣泛的應(yīng)用到家畜養(yǎng)殖和水廠養(yǎng) 殖中。但是，諾氟沙星的代謝產(chǎn)物之一環(huán)丙沙星，仍具有強(qiáng)大抗菌作用，幾乎對水生生物所 有病原菌的抗菌活性均較強(qiáng)。
[0003] 有報(bào)道說，諾氟沙星在動(dòng)物體內(nèi)沒有完全代謝，排泄物中仍然有諾氟沙星的殘留， 通過排泄物流入水環(huán)境中。近些年，國內(nèi)外水環(huán)境中痕量諾氟沙星的報(bào)道很多，濃度由ng/ L到μ g/L的量級(jí)，這些水環(huán)境中的諾氟沙星，最終通過取水進(jìn)入到飲用水系統(tǒng)中，有效降 解水中諾氟沙星的技術(shù)需要開發(fā)。因此，為了確保飲用水安全，準(zhǔn)確檢測出水環(huán)境中、水處 理系統(tǒng)內(nèi)痕量諾氟沙星的方法是必備的前提。
[0004] 目前，國內(nèi)外在萃取富集和定量檢測水中痕量諾氟沙星的技術(shù)上也不斷發(fā)展，常 見的報(bào)道有固相萃取協(xié)同高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法，在進(jìn)行固相萃取之前，所有水樣 品需要經(jīng)過0.45 μπι的濾膜過濾，溶解態(tài)的諾氟沙星經(jīng)過固相萃取后，富集之后，檢測。這 些方法局限在溶解態(tài)諾氟沙星的定量上。有研究報(bào)道，諾氟沙星屬于羧基酸物質(zhì)，很容易吸 附在顆粒物表面，因此，顆粒物表面的諾氟沙星很有必要萃取下來，進(jìn)行定量，這樣，可以全 方位的掌握水中諾氟沙星的污染現(xiàn)狀，為解析諾氟沙星在水環(huán)境中的遷移規(guī)律，在水處理 系統(tǒng)中的衰減規(guī)律，都有重要的支撐作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方 法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過以下將數(shù)據(jù)方案實(shí)現(xiàn)的： (1)取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜及表面截留的懸 浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中；用 封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為4-KTC，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為 100-200次/min，振蕩8-12h后，將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20-35min，得到 萃取液。
[0007] (2)用有機(jī)濾膜過濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃 縮瓶中。
[0008] (3)加入脫水干燥劑到步驟二K-D濃縮瓶中的萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃 縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10_20min，濃縮后體積為l-2ml 為宜。
[0009] (4)將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為1ml以下，停止氮?dú)獯祾摺?br> [0010] (5)將步驟四得到的濃縮液萃取過濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn)移到安捷倫 專用瓶中。
[0011] (6)在步驟五得到的待測液中加入0.5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián) 三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測，檢測參數(shù)如下： 液相條件：a)流動(dòng)相成分：A. 0. 2vol. %甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量：10 μ L ;c)流速：0. 2 mL/min ;d)柱溫：30°C;e)運(yùn)行時(shí)間：8min ;f)色譜柱：Acquity UPLC BEH ;g)梯度：如表 1所示。
[0012] 質(zhì)譜條件：a)脫溶劑氣溫度：350°C ;b)源溫度：150°C ;c)毛細(xì)管電壓：3000V ;d) 脫溶劑氣流速：650L/h;e)錐氣流速：50L/h。設(shè)置定性和定量離子見表2。
[0013] (7)對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。
[0014] 上述方法中，步驟（1)所述的微孔纖維膜的孔徑為0. 45 μ m。
[0015] 上述方法中，步驟（1)所述的懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為lg: 15-20ml〇
[0016] 上述方法中，步驟（1)所述的萃取劑為甲醇。
[0017] 上述方法中，步驟（1)所述的振蕩器為HDL公司的HZQ-F160型振蕩培養(yǎng)箱，轉(zhuǎn)速 為100-200次/min ;超聲波萃取機(jī)為KQ-100DE型超聲波萃取機(jī)，超聲頻率為23-40kHz。
[0018] 上述方法中，步驟（2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0. 22 μ m。
[0019] 上述方法中，步驟（3)所述的脫水干燥劑為無水硫酸鈉。
[0020] 上述方法中，步驟（5)所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
[0021] 上述方法中，步驟（6)所述的內(nèi)標(biāo)物根據(jù)實(shí)際水體殘留情況選擇，本方法采用沙拉 沙星或洛美沙星，結(jié)構(gòu)和諾氟沙星類似，在目標(biāo)水體未檢出的氟喹諾酮類物質(zhì)。內(nèi)標(biāo)物不僅 僅局限于這兩種，只要是同類物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)相似，且在所檢測的水樣中沒有檢出均可。
[0022] 上述方法中，步驟（6)所述的超高壓液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器為Waters Xevo TQ MS Acquity UPLC System，儀器自帶的超高壓液相色譜柱（Acquity UPLC ΒΕ?)。
[0023] 表1流動(dòng)相梯度洗脫程序

【權(quán)利要求】
1. 一種水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于所述方法 步驟如下： (1) 取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜及表面截留的懸 浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中，控 制懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為lg :15-20ml ;用封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng) 箱中，溫度設(shè)定為4-10°C，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100-200次/min，振蕩8-12h后， 將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20-35min，得到萃取液； (2) 用有機(jī)濾膜過濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶 中； (3) 加入脫水干燥劑到步驟二K-D濃縮瓶中的萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶 放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10_20min ; (4) 將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為lml以下，停止氮?dú)獯祾撸? (5) 加入有機(jī)溶劑，將步驟四得到的濃縮液萃取過濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn) 移到安捷倫專用瓶中； (6) 在步驟五得到的待測液中加入0. 5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián)三級(jí) 質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測； (7) 對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（1)所述的微孔纖維膜的孔徑為0. 45 μ m。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（1)所述的萃取劑為甲醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（1)所述的超聲頻率為23-40kHz。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0. 22 μ m。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（3)所述的脫水干燥劑為無水硫酸鈉。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（3)所述的濃縮后的液體體積為l-2ml。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（5)所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法，其 特征在于步驟（6)所述的內(nèi)標(biāo)物為沙拉沙星或者洛美沙星。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量諾氟沙星萃取富集和定量的方法， 其特征在于步驟（6)所述的超高壓液相色譜串串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器為Waters Xevo TQ MS Acquity UPLC System，檢測參數(shù)如下： 液相條件：a)流動(dòng)相成分：A. 0.2vol. %甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量dOyLr)流速： 0.2 mL/min;d)柱溫：30°C;e)運(yùn)行時(shí)間：8min;f)色譜柱：Acquity UPLC BEH;g)梯 度：0min :V(A)%-80, V(B)%-20,5min :V(A)%-30, V(B)%-70,5. lmin :V(A)%-〇, V(B)%-100， 6. 5min ：V(A)%-〇, V(B)%-100,6. 6min ：V(A)%-80, V(B)%-20,8min ：V(A)%-80, V(B)%-20 ； 質(zhì)譜條件：a)脫溶劑氣溫度：350°C ;b)源溫度：150°C ;c)毛細(xì)管電壓：3000V ;d)脫 溶劑氣流速：650L/h ;e)錐氣流速：50L/h。
【文檔編號(hào)】G01N30/08GK104155382SQ201410416901
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】徐勇鵬, 崔福義 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)