一種外消旋托品酸的手性拆分方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種外消旋托品酸的手性拆分方法：(1)將有機(jī)溶劑A、有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-β-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體積比0～10∶1～10∶10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；(2)將外消旋托品酸用有機(jī)相溶解，制成樣品；(3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋托品酸；(4)從收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收，分別得到右旋托品酸單體和左旋托品酸單體；本發(fā)明首次采用逆流色譜拆分外消旋托品酸，所述方法適用于各種型號(hào)的制備型逆流色譜儀，分離得到的單體純度大于96％、回收率大于91％。
【專利說(shuō)明】一種外消旋托品酸的手性拆分方法
(—)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種外消旋體的拆分方法，具體涉及一種從外消旋托品酸中拆分出左旋托品酸和右旋托品酸的方法。
(二)

【背景技術(shù)】
[0002]含有手性中心的化合物，其對(duì)映體通常具有極為相近的理化性質(zhì)，但藥理和毒理作用卻存在很大差異，往往一種立體異構(gòu)體有藥效而它的鏡像分子卻很小，甚至完全沒有藥效或具有副作用。美國(guó)食品和藥物管理局早在1992年就規(guī)定，今后凡開發(fā)具有不對(duì)稱中心的藥物，必須給出手性拆分的結(jié)果。
[0003]托品酸是一種重要的藥物中間體，可用于合成抗膽堿藥山莨菪堿和托吡卡胺等。獲得光學(xué)純的托品酸也是藥物合成的必然要求。因此，對(duì)外消旋托品酸進(jìn)行手性拆分研究，建立快速、有效的拆分方法是一個(gè)具有理論及實(shí)際意義的課題。目前，外消旋托品酸的拆分方法主要有高效液相色譜固定相法、毛細(xì)管色譜法、離子對(duì)色譜法和酶催化拆分等。
[0004]高速逆流色譜技術(shù)(highspeed countercurrent chromatography, HSCCC)作為一種新興的液-液分配色譜技術(shù)，得益于其兩相均為液體的性質(zhì)，可避免樣品的不可逆吸附、失活和變性等問題，還具有一次性分離制備量大、儀器簡(jiǎn)單易維修且運(yùn)行成本低等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于手性分離來(lái)說(shuō)是一種理想的制備色譜技術(shù)，因此逆流色譜技術(shù)近年來(lái)已逐步發(fā)展成為一種備受關(guān)注的制備色譜分離技術(shù)。
(三)


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的是提供一種采用高速逆流色譜技術(shù)拆分外消旋托品酸的方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明以外消旋托品酸為拆分對(duì)象，以磺丁基醚-β -環(huán)糊精作為手性試劑，將其添加到水相中，采用液-液分配手性萃取拆分的方法篩選溶劑體系，并用高速逆流色譜法得到左旋托品酸和右旋托品酸。
[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0008]一種外消旋托品酸的手性拆分方法，所述方法按如下步驟進(jìn)行:
[0009](I)將有機(jī)溶劑Α、有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體積比O?10:1?10:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述磺丁基醚-β -環(huán)糊精的取代度為4.5?8.0 ;所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的PH值為1.0?8.0 ;所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-β -環(huán)糊精的濃度為0.02?0.40mol/L ;所述有機(jī)溶劑A為Cl?C8的烷烴；所述有機(jī)溶劑B為C2?C8的醚或C3?C8的酯類；
[0010](2)將外消旋托品酸用步驟⑴所得的有機(jī)相溶解，制成樣品；
[0011](3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋托品酸:以步驟(I)得到的有機(jī)相為固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為2?35°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為200?2000rpm，以0.1?3.0mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟(2)制得的樣品由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器分別收集40min到ISOmin之間梯度時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液；所述前峰是指對(duì)映體雙峰中先出來(lái)的主峰，所述后峰是指對(duì)映體雙峰中后出來(lái)的主峰；
[0012](4)從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋托品酸單體；從步驟
(3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋托品酸單體。
[0013]本發(fā)明所述外消旋托品酸的手性拆分方法步驟(I)中，所述的溶劑體系由有機(jī)溶劑A、有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體積比O?10:1?10:10組成，其中所述有機(jī)溶劑A在所述溶劑體系中的體積含量可以為0，即所述溶劑體系可以由有機(jī)溶劑Α、有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液組成，或者僅由有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液組成。
[0014]本發(fā)明所述步驟(I)中，優(yōu)選所述有機(jī)溶劑A為正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷或石油醚；優(yōu)選所述有機(jī)溶劑B為乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯；優(yōu)選所述的含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的PH值為1.5?4.5 ;優(yōu)選所述的含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-β -環(huán)糊精的濃度為0.05?0.30mol/L ;優(yōu)選所述磺丁基醚-環(huán)糊精的取代度為5.5?8.0。
[0015]本發(fā)明所述步驟(I)中，優(yōu)選所述溶劑體系為乙酸乙酯與pH值為2.7的含磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液以體積比1:1混合制成，其中所述含磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-β -環(huán)糊精的濃度為0.lmol/L0
[0016]本發(fā)明所述步驟(2)中，優(yōu)選所述樣品中外消旋托品酸的濃度為I?10mg/mL。
[0017]本發(fā)明所述步驟(3)中，推薦所述梯度時(shí)間間隔為每0.5?5min收集一次，優(yōu)選為每2min時(shí)間間隔收集一次洗脫液。
[0018]本發(fā)明所述步驟(3)中，優(yōu)選所述柱溫為5?30°C ;所述轉(zhuǎn)速為800?1800rpm ；所述流動(dòng)相泵入柱內(nèi)的流速為0.5?2.5mL/min。
[0019]本發(fā)明所述步驟(4)中，所述的回收方法可以為:將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至I?2，再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右旋托品酸單體和左旋托品酸單體。
[0020]具體的，最優(yōu)的，推薦本發(fā)明所述拆分方法按照如下步驟進(jìn)行:
[0021](I)將乙酸乙酯與pH值為2.7的含有磺丁基醚-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體積比1:1組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述磺丁基醚-β -環(huán)糊精的取代度為5.5?8.0 ;所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-β -環(huán)糊精的濃度為0.lmol/L ；
[0022](2)將外消旋托品酸用步驟⑴所得的有機(jī)相溶解，制成外消旋托品酸濃度為I?10mg/mL的樣品；
[0023](3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋托品酸:以步驟(I)得到的有機(jī)相為固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5?25°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為800?1800rpm，以0.5?2.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟(2)制得的樣品由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器分別收集40min到180min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液,并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液；
[0024](4)從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋托品酸單體；從步驟
(3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋托品酸單體；所述回收的方法為:將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至I?2，再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右旋托品酸單體和左旋托品酸單體。
[0025]本發(fā)明可采用分析型、半制備和制備型逆流色譜儀(分析型分離柱柱體積為20ml，半制備型分離柱柱體積為300ml，制備型分離柱柱體積為1000ml)，逆流色譜儀由恒流泵、主機(jī)(分離柱)、紫外檢測(cè)器、記錄儀等組成。
[0026]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:本發(fā)明首次采用逆流色譜拆分外消旋托品酸，本方法可以基本達(dá)到分離目的，并且該方法適用于各種型號(hào)的制備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋托品酸和右旋托品酸的單體，其純度均大于96%、回收率大于91%。
(四)

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0027]圖1:實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0028]圖2:實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0029]圖3:實(shí)施例3實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0030]圖4:實(shí)施例4實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0031]圖5:實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0032]圖6:實(shí)施例6實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0033]圖7:實(shí)施例7實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0034]圖8:實(shí)施例8實(shí)驗(yàn)條件下的半制備型高速逆流色譜圖；
[0035]圖9:圖8中A部分(IlOmin?145min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即右旋托品Ife ；
[0036]圖10:圖8中B部分(155min?180min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即左旋托品酸。
(五)

【具體實(shí)施方式】
[0037]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此:
[0038]實(shí)施例1
[0039](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2.7，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0040](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0041](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集55min到82min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即55?67min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即68?82min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖1所示)，計(jì)算分離度為1.10。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于99%。高效液相色譜法檢測(cè)條件為:BostonGreen ODS (5 μ m, 150mmX4.6mm)色譜柱；柱溫:25°C;流動(dòng)相:pH4.0水(0.5%乙酸-三乙胺調(diào)節(jié)，含25mmol噸―1羥丙基-β-環(huán)糊精):甲醇(95:5，v/v)等度洗脫；流速0.5mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm ;進(jìn)樣量:20 μ L。
[0042]實(shí)施例2
[0043](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，PH = 2.7，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0044](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0045](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為25 °C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集60min到10min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即60?79min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即80?10min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖2所示)，計(jì)算分離度為0.85。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于98%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0046]實(shí)施例3
[0047](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，PH = 2.7，含有0.20mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0048](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0049](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集44min到65min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即44?52min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即53?65min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖3所示)，計(jì)算分離度為0.76。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0050]實(shí)施例4
[0051](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，PH = 2.0，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0052](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0053](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集55min到85min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即55?67min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即68?85min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖4所示)，計(jì)算分離度為0.98。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于99%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0054]實(shí)施例5
[0055](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 4.0，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0056](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0057](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集54min到90min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即54?66min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即67?90min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖5所示)，計(jì)算分離度為0.83。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于98%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0058]實(shí)施例6
[0059](I)將正己烷:乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2.0，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照2:8:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0060](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0061](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集41min到63min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即41?51min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即52?63min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖6所示)，計(jì)算分離度為0.97。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于99%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0062]實(shí)施例7
[0063](I)將正己烷:甲基叔丁基醚:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2.7，含有0.10mol/L磺丁基醚-β -環(huán)糊精，取代度為6.9)按照2:8:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0064](2)稱取2.5mg外消旋托品酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0065](3)采用分析型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-20A)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集45min到75min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即45?60min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即61?75min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖7所示)，計(jì)算分離度為0.53。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于96%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0066]實(shí)施例8
[0067](I)將乙酸乙酯:含有磺丁基醚環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液(用0.lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，PH= 2.7，含有0.lmol/L磺丁基醚-β-環(huán)糊精，取代度為6.9)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0068](2)稱取10mg外消旋托品酸用1mL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液，待用。
[0069](3)采用半制備型高速逆流色譜儀(上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào)TBE-200V)拆分外消旋托品酸:分離柱體積為200mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為10°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí))，由進(jìn)樣閥開始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器(上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集IlOmin到180min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即110?145min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即155?ISOmin內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖(見圖8所示)，計(jì)算分離度為0.64。將含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于96%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0070]從洗脫液中回收樣品:將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)pH至I?2，再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右旋托品酸單體和左旋托品酸單體。右旋托品酸單體，純度為96.2%，回收率為92.8%，左旋托品酸單體，純度為99.6%，回收率為91.4%。
【權(quán)利要求】
1.一種外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于，所述方法按如下步驟進(jìn)行: (1)將有機(jī)溶劑A、有機(jī)溶劑B與含有磺丁基醚-β-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體積比O?10:1?10:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述磺丁基醚-β -環(huán)糊精的取代度為4.5?8.0 ;所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的PH值為1.0?8.0 ;所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-β -環(huán)糊精的濃度為0.02?0.40mol/L ;所述有機(jī)溶劑A為Cl?C8的烷烴；所述有機(jī)溶劑B為C2?C8的醚或C3?C8的酯類； (2)將外消旋托品酸用步驟(I)所得的有機(jī)相溶解，制成樣品； (3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋托品酸:以步驟(I)得到的有機(jī)相為固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為2?35°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為200?2000rpm,以0.1?3.0mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟⑵制得的樣品由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器分別收集40min到ISOmin之間梯度時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋托品酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋托品酸單體的后峰洗脫液；所述前峰是指對(duì)映體雙峰中先出來(lái)的主峰，所述后峰是指對(duì)映體雙峰中后出來(lái)的主峰； (4)從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋托品酸單體；從步驟(3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋托品酸單體。
2.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑A為正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷或石油醚。
3.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑B為乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯。
4.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的pH值為1.5?4.5。
5.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述含有磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-環(huán)糊精的濃度為0.05?0.30mol/L。
6.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述磺丁基醚-β -環(huán)糊精的取代度為5.5?8.0。
7.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(I)中，所述溶劑體系為乙酸乙酯與pH值為2.7的含磺丁基醚-β-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液以體積比1:1混合制成，其中所述含磺丁基醚-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中磺丁基醚-環(huán)糊精的濃度為 0.lmol/Lo
8.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(2)中，所述樣品中外消旋托品酸的濃度為I?10mg/mL。
9.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(3)中，所述梯度時(shí)間間隔為每0.5?5min收集一次。
10.如權(quán)利要求1所述的外消旋托品酸的手性拆分方法，其特征在于步驟(4)中，所述的回收方法為:將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至I?2，再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右旋托品酸單體和左旋托品酸單體。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK104237401SQ201410442446
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月2日
【發(fā)明者】童勝?gòu)?qiáng), 張虎, 沈芒芒, 顏繼忠 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)