一類喹唑啉類熒光探針及其制備和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類喹唑啉類熒光探針及其制備方法，該熒光探針結(jié)構(gòu)為熒光素標(biāo)記的Gefitinib(吉非替尼），它對(duì)EGFR蛋白激酶有較強(qiáng)的抑制活性，具有潛在的癌癥治療功效；共聚焦熒光成像結(jié)果表明該熒光探針與多種細(xì)胞株作用后，均分布在細(xì)胞膜上，可用于癌細(xì)胞成像。流式細(xì)胞儀測定結(jié)果表明細(xì)胞熒光強(qiáng)度增強(qiáng)倍數(shù)與細(xì)胞中EGFR含量呈正相關(guān)性。借助流式細(xì)胞分析技術(shù)，該熒光探針能夠應(yīng)用于細(xì)胞中生物標(biāo)志物EGFR的相對(duì)定量檢測，為癌癥診斷提供更為直接的信息。由于該熒光探針兼具癌癥診斷和治療功能，且可直接檢測活細(xì)胞，分析快速、操作簡便、成本低，具有開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】一類喹唑啉類熒光探針及其制備和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中的癌癥診斷和治療領(lǐng)域，具體涉及一類具有癌癥診斷 和治療功能的喹唑啉類熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤（癌癥）是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，它是多基因參與的多階段 性復(fù)雜疾病。在復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，某些關(guān)鍵蛋白和調(diào)控因子的過表達(dá)，可導(dǎo)致細(xì) 胞失去正常生長調(diào)控，導(dǎo)致過度增殖，形成腫瘤。
[0003] 表皮生長因子受體（EpidermalGrowthFactorReceptor,EGFR)是具有酪氨酸蛋 白激酶活性的一種跨膜糖蛋白。EGFR作為腫瘤形成、發(fā)展過程中重要的調(diào)控因子，已經(jīng)作為 腫瘤標(biāo)志物成為腫瘤靶向治療的主要靶標(biāo)之一。
[0004] 分子祀向藥物Gefitinib(吉非替尼）是一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑（PKI)，已用 于治療表皮生長因子受體EGFR過表達(dá)的癌癥。該藥物可特異性地占據(jù)EGFR在細(xì)胞膜內(nèi)的 ATP結(jié)合域，有效抑制EGFR酪氨酸激酶活性，阻斷EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，遏制腫瘤細(xì)胞的生長 繁殖。EGFR高表達(dá)的腫瘤患者對(duì)Gefitinib(吉非替尼）類靶向藥物敏感，反之，藥效顯著降 低。因此，患者在接受EGFR靶向藥物治療前，需進(jìn)行EGFR基因表達(dá)水平檢測。
[0005] 臨床研究表明，腫瘤標(biāo)志物的存在或量變已經(jīng)成為腫瘤診斷、預(yù)后、及治療過程中 的重要指標(biāo)，而且腫瘤標(biāo)志物的含量與腫瘤惡性程度往往正相關(guān)。雖然DNA檢測可以提供 重要的診斷信息，而蛋白質(zhì)是正常和病變細(xì)胞各種生理過程中更直接的介質(zhì)。因此，某些腫 瘤標(biāo)志物蛋白質(zhì)表達(dá)量的測定，可提供更為準(zhǔn)確、直接的診斷、預(yù)后信息，用于患者病情監(jiān) 測和療效評(píng)價(jià)。為此，我們基于分子靶向藥物Gefitinib特異性調(diào)控EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的 干預(yù)模式，構(gòu)建了一種生物活性熒光探針分子，實(shí)現(xiàn)了對(duì)活細(xì)胞中EGFR的定量分析。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有癌癥診斷和治療功能的喹唑啉類熒光探針，該探 針兼具癌癥診斷和治療功能。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0008] -類具有癌癥診斷和治療功能的喹唑啉類熒光探針，其含有熒光發(fā)色基團(tuán)和吉非 替尼骨架結(jié)構(gòu)，通式如下：
[0009]

【權(quán)利要求】
1. 一類具有癌癥治療和診斷功能的喹唑啉類熒光探針，其特征在于：含有熒光發(fā)色基 團(tuán)和吉非替尼骨架結(jié)構(gòu)，通式如下：
其中η取值為1?5。
2. -種權(quán)利要求1所述熒光探針的制備方法，其中具體步驟如下： (1) 在有機(jī)溶劑中，30°C?50°C溫度下，溴乙酸乙酯、4-(3'_氯-4'-氟苯氨基）-7-甲 氧基-6-羥基喹唑啉和碳酸鉀混合，得到乙酸酯衍生物； (2) 將乙酸酯衍生物中間體與強(qiáng)堿在第二混合溶劑體系中接觸，再與酸液接觸，反應(yīng)得 到乙酸衍生物； (3) 將步驟（2)得到的乙酸衍生物與5-氨基熒光素，在催化劑作用下于第三有機(jī)溶劑 中接觸反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物喹唑啉類熒光探針。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟（1)中的有機(jī)溶劑為 DMF，所述溫度為40°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟（2)中第二混合溶劑 體系為水-甲醇-四氫呋喃的混合溶劑，體積比為1:1:3 ;所述強(qiáng)堿為NaOH，所述酸液為 HCl。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟（3)中第三有機(jī)溶劑 為吡啶，催化劑為1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽。
6. 權(quán)利要求1所述的熒光探針在癌癥診斷和治療中的應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的熒光探針在癌癥診斷和治療中的應(yīng)用，其中癌癥診斷通過 相對(duì)定量檢測細(xì)胞中EGFR含量進(jìn)行，具體步驟如下：（1)所述熒光探針作用細(xì)胞一段時(shí)間 后，使熒光強(qiáng)度穩(wěn)定；（2)采用流式細(xì)胞儀檢測所述熒光探針作用細(xì)胞后熒光強(qiáng)度的增強(qiáng) 倍數(shù)；（3)采用分子生物學(xué)方法測定細(xì)胞中EGFR含量；(4)根據(jù)測得的熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)倍 數(shù)與細(xì)胞中EGFR含量的正相關(guān)性，對(duì)細(xì)胞中EGFR含量進(jìn)行相對(duì)定量分析。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的熒光探針在癌癥診斷和治療中的應(yīng)用，所述熒光探針作用細(xì) 胞后熒光強(qiáng)度穩(wěn)定時(shí)間為1?4h，所述熒光探針在細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度為1?50μM。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的熒光探針在癌癥診斷和治療中的應(yīng)用，所述熒光探針作用細(xì) 胞后熒光強(qiáng)度穩(wěn)定時(shí)間為3h，所述熒光探針在細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度為10μΜ。
10. 權(quán)利要求1所述的熒光探針在癌細(xì)胞成像中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104212440SQ201410447314
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月3日
【發(fā)明者】汪福意, 羅群, 鄭偉 申請(qǐng)人:無錫艾德美特生物科技有限公司