一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物及其制備與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物及其制備與應(yīng)用，所述化合物為香豆素衍生物：7-(二乙胺基)香豆素-3-（N-8-喹啉）-甲酰胺（DQCC）；該化合物由7-(二乙胺基)香豆素-3-羧酸和8-氨基喹啉在含有O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二異丙基乙胺的DMF溶液中反應(yīng)制得；可利用該化合物對(duì)Cu2+進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明化合物的制備反應(yīng)條件簡(jiǎn)單，處理步驟方便，易于生產(chǎn)；其應(yīng)用方法采用紫外-可見分光光度法或熒光分光光度法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)二價(jià)銅離子顯示出了高靈敏度、高選擇性及操作簡(jiǎn)便、肉眼容易觀測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)條件的調(diào)試下，可以實(shí)現(xiàn)環(huán)境及生物樣品中銅離子的檢測(cè)。
【專利說明】一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物及其制備與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于具體涉及一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物及其制備與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]銅是生物體中基本的微量元素之一，在不同的生理過程如線粒體的呼吸、鐵的吸收及超氧化歧化酶和酪氨酸酶等的氧化還原過程中作為催化輔助因子起著重要作用。人體內(nèi)如果銅元素缺乏會(huì)導(dǎo)致生長和代謝的紊亂，但生物體內(nèi)攝入過量的銅也會(huì)產(chǎn)生毒性，從而引起一些嚴(yán)重的神經(jīng)退行性疾病，包括門克斯和威爾遜疾病、阿爾茨海默氏癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、朊毒體病等。此外，由于人類長期大量的過度使用，銅已成為環(huán)境中的一種重要污染物。因此，定量檢測(cè)銅離子，尤其對(duì)于跟蹤其在環(huán)境和生命活動(dòng)中的作用具有重要意義。
[0003]目前，很多方法如電化學(xué)法、原子吸收光譜法、分光光度法、熒光法、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法等方法都被用于檢測(cè)銅離子的濃度，而熒光分析法具有檢測(cè)靈敏度高(可實(shí)現(xiàn)單分子檢測(cè))、選擇性好、成本低、易操作等優(yōu)點(diǎn)，因此備受人們關(guān)注。其中，香豆素類中的熒光基團(tuán)具有較高的熒光量，在產(chǎn)率、光量子穩(wěn)定性、Stokes位移較大等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用來設(shè)計(jì)熒光探針。本發(fā)明通過對(duì)香豆素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，合成出具有全新化學(xué)結(jié)構(gòu)的香豆素衍生物，其對(duì)二價(jià)銅離子顯示出了高靈敏度、高選擇性及操作簡(jiǎn)便、肉眼容易觀測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，能用于環(huán)境及生物樣品中銅離子的定量檢測(cè)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物及其制備與應(yīng)用，其合成體系簡(jiǎn)單、操作方便，檢測(cè)時(shí)選擇性高、靈敏度高、生物相容性好，適用于環(huán)境及生物樣品中銅離子的定量檢測(cè)。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物為香豆素衍生物，其化學(xué)名稱為:7-( 二乙胺基)香豆素-3- (N-8-喹啉)-甲酰胺(DQCC)，結(jié)構(gòu)式為:

【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物，其特征在于:所述化合物為香豆素衍生物，其化學(xué)名稱為:7_( 二乙胺基)香顯素-3- (N-8-喹啉)-甲酰胺，結(jié)構(gòu)式為:
2.一種如權(quán)利要求1所述檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物的制備方法，其特征在于:將7-( 二乙胺基)香豆素-3-羧酸和8-氨基喹啉按摩爾比1:1溶解在DMF中，冰浴下加入與7-( 二乙胺基)香豆素-3-羧酸等摩爾的O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯和其2倍摩爾的N，N- 二異丙基乙胺，常溫反應(yīng)16小時(shí)后，用乙酸乙酯和水萃取，取有機(jī)相濃縮，過硅膠柱即得。
3.—種如權(quán)利要求1所述檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物的應(yīng)用，其特征在于:采用紫外-可見分光光度法或熒光分光光度法對(duì)環(huán)境及生物樣品中Cu2+進(jìn)行定量檢測(cè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物的應(yīng)用，其特征在于:所述紫外-可見分光光度法具體包括如下步驟: 1)配制pH=7.4、濃度為20 mM的HEPES緩沖溶液，并用DMSO配制2 mM的化合物溶液； 2)將20UL的化合物溶液加入到5 mL離心管中，分別加入0、2、4、6、8、10、12、14、16、18.20μ L濃度為2 mM的Cu2+溶液，再加入HEPES緩沖溶液使終體積為2 mL,混合后加入到紫外比色皿中，在紫外-可見分光光度儀上測(cè)定446 nm波長處對(duì)應(yīng)的吸收值，然后以Cu2+濃度為橫坐標(biāo)，以吸收值為縱坐標(biāo)繪制Cu2+濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并得出線性回歸方程； 3)將20μ L的化合物溶液加入到5 mL離心管中，加入一定體積的待測(cè)樣品溶液，再加入HEPES緩沖溶液使終體積為2 mL,混合后加入到紫外比色皿中，在紫外-可見分光光度儀上測(cè)定446 nm波長處對(duì)應(yīng)的吸收值，將此吸收值帶入步驟2)的線性回歸方程，求得待測(cè)樣品中Cu2+的濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物的應(yīng)用，其特征在于:所述熒光分光光度法具有包括如下步驟: 1)配制pH=7.4、濃度為20 mM的HEPES緩沖溶液，并用DMSO配制2 mM的化合物溶液； 2)將20UL的化合物溶液加入到5 mL離心管中，分別加入0、2、4、6、8、10、12、14、16、18.20μ L濃度為2 mM的Cu2+溶液，再加入HEPES緩沖溶液使終體積為2 mL,混合后加入到熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上以442nm作為激發(fā)波長，測(cè)定566 nm波長處對(duì)應(yīng)的熒光值，然后以Cu2+濃度為橫坐標(biāo)，以熒光值為縱坐標(biāo)繪制Cu2+濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并得出線性回歸方程； 3)將20μ L的化合物溶液加入到5 mL離心管中，加入一定體積的待測(cè)樣品溶液，再加入HEPES緩沖溶液使終體積為2 mL,混合后加入到熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上以442nm作為激發(fā)波長，測(cè)定566 nm波長處對(duì)應(yīng)的熒光值，將此熒光值帶入步驟2)的線性回歸方程，求得待測(cè)樣品中Cu2+的濃度。
6.一種如權(quán)利要求1所述檢測(cè)二價(jià)銅離子的化合物的應(yīng)用，其特征在于:用于細(xì)胞中Cu2+的定性檢測(cè) 。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104177341SQ201410468509
【公開日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年9月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月15日
【發(fā)明者】高瑜, 陳海軍 申請(qǐng)人:福州大學(xué)