基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法，該方法采用離體的心肌細胞培養(yǎng)，構建高性能且成本低廉的心肌細胞傳感器，采用圖像采集、RGB圖像轉灰度圖像、圖像二值化、圖像矩陣化和峰值檢測算法計算檢測出心肌細胞機械搏動時搏動圖像的變化，并使用搏動圖像差異值來量化心肌細胞機械搏動，實現心肌細胞機械搏動的速率、幅度和搏動間隙的檢測；通過分析藥物作用下的心肌細胞機械搏動狀態(tài)隨時間的變化，評價藥物的心臟毒性；較現有的藥物心臟毒性檢測分析方法，本發(fā)明具有無標記，無損，成本低廉，操作步驟簡單，并能夠直觀，長時間且單一性地觀察評價藥物的心臟毒性等優(yōu)點。
【專利說明】 基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物心臟毒性檢測分析技術，尤其涉及一種基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法。

【背景技術】
[0002]心臟安全是新藥開發(fā)、批準和使用中最為關注的問題，但是目前許多藥物由于在心臟安全上存在問題而受到限制或從市場上撤回，從而造成藥物損耗。引起尖端扭轉(況?)是大多藥物對心臟的副作用。1(1？是一種室性心動過速，在心電圖上表現為基線處附近的振蕩形態(tài)。1(1？的成因是心肌細胞膜上的快速延遲整流1(+離子通道1X1'受到抑制，而I&由人類相關基因仏服冊61:1161—8-80-80-1-6181:6(1 ^6116,112^6)編碼。1X1'是人類心室肌細胞主要的復極化電流，當受到抑制時，會引起去極化與復極化的時間延長，最終導致1(1？。因此，為了評估藥物是否會產生1(1？，研發(fā)中的候選藥物需要進行抑制的篩選。鑒于藥物心臟安全性評價的重要性，目前國內外，大量的離體組織、在體動物、生物方法和模型等用于進行藥物分析。離體組織和在體動物實驗方法可以直接測試藥物心臟毒性，但同時具有通量較低、操作復雜且成本較高等缺點。證如抑制劑與受體蛋白的生物方法無法體現心臟在藥物作用后的連續(xù)和長時間地變化過程。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法。
[0004]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現的:一種基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法，該方法在藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)上實現，所述藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)包括:心肌細胞傳感器培養(yǎng)板、正立顯微鏡、攝像頭和計算機；其中，心肌細胞傳感器培養(yǎng)板固定在正立顯微鏡的載物臺上《⑶攝像頭固定在正立顯微鏡上方《⑶攝像頭通過舊8連接線與計算機連接；該方法包括以下步驟:
(1)心肌細胞培養(yǎng):獲取待測心肌細胞，在高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制成心肌細胞的細胞懸液；經過活細胞計數后，將原細胞懸液配制成170，000個加1的細胞懸液；最后在心肌細胞傳感器培養(yǎng)板中任意選擇一個孔中加入100沿細胞懸液，使孔中細胞數量為17000個丨孔，將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)96小時，使得心肌細胞良好貼附于心肌細胞傳感器培養(yǎng)板的表面，構建出心肌細胞傳感器；
(2)配制待測藥物標準樣品溶液:用二甲基亞砜(0130)配制成1.6禮的標準樣品溶液儲存液；用高糖培養(yǎng)基依次稀釋儲存液，得到不同濃度梯度的工作液；
(3)對照組心肌細胞傳感器機械搏動狀態(tài)檢測:首先將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板放置在正立顯微鏡的在載物臺上，使用40倍物鏡和10倍目鏡，調整正立顯微鏡載物臺的位置和調焦旋鈕，在視野中能清晰看到心肌細胞；其次通過計算機控制冗0攝像頭進行心肌細胞搏動圖像采集，然后計算心肌細胞的機械搏動曲線；最后通過心肌細胞的機械搏動曲線計算對照組搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數，處理過程包括以下子步驟:
(3.1)將采集的心肌細胞搏動圖像的第一幀作為對照幀圖像；
(3.2)將對照幀圖像進行灰度化，采用的灰度化公式為:
0^=^0.299+0X0^ 587+8^0.114
其中，以^7指圖像像素二值化后的灰度值，和8分別指原始圖像像素紅、綠和藍通道的值；
(3.3)采用大律法對步驟3.2灰度化后的圖像進行二值化，將I記為圖像前景和背景的分割閾值，％記為前景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像前景平均灰度為％ 為背景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像背景平均灰度為％ ；將11記為圖像的總平均灰度，計算公式為；6記為最大類間方差，從最小灰度到最大灰度值遍歷I，依據計算公式(+-11)2,當I使得6最大時，取此時的I為最佳的分割閾值；然后依據I，將圖像像素灰度值小于I的取為0，圖像像素灰度值大于I的取為1，實現灰度圖像的二值化；
(3.4)采集隨后的心肌細胞搏動圖像的序列幀圖像作為實時幀圖像，按照步驟(3.2)和(3.3)對實時幀圖像進行灰度化和二值化處理；
(3.5)將灰度化后的實時幀圖像與灰度化后的對照幀圖像做圖像減法，獲得減法圖像；然后將減法圖像進行圖像像素點的矩陣化，獲得圖像矩陣，此時矩陣元素值為-1、0和1三者其中之一；
(3.6)對圖像矩陣元素進行絕對值化，然后對絕對值化后的圖像矩陣進行元素求和，其和即為搏動圖像差異值；
(3.7)以時間為橫坐標，步驟3.6計算出的實時幀圖像的搏動圖像差異值為縱坐標繪制曲線，該曲線即為心肌細胞機械搏動曲線；
(3.8)對心肌細胞機械搏動曲線進行小波變換，采用7層多尺度分析方法；
(3.9)將7層多尺度分析結果中的近似分量八7、細節(jié)分量01、02和03進行置零，然后采用小波逆變換重構心肌細胞機械搏動曲線，即得到去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線.(3.10)計算去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的均方差，并將其定為閾值:將去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線中大于閾值的位點記為1，小于閾值的位點記為0，然后再進行差分，曲線結果數值為1、0和-1三者之一；其中曲線值為1的位點為波峰位點的左邊緣，曲線值為-1的位點為波峰位點的右邊緣；
(3.11)依據步驟(3.10)中得出的左邊緣和右邊緣位點，求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最大值，最大值位點即為波峰位點；求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最小值，最小值位點即為波谷位點；最大值與最小值的差即為心肌細胞機械搏動幅度；連續(xù)的波峰位點之間的時間間隔比值，即為心肌細胞機械搏動間隙；
(3.12)每隔30秒統(tǒng)計波峰位點個數、搏動幅度和搏動間隙，將統(tǒng)計波峰位點個數記為30秒內心肌細胞搏動的平均速率；以時間為X軸，心肌細胞搏動的平均速率為7軸，構建心肌細胞搏動平均速率曲線；以時間為X軸，搏動幅度為7軸，構建心肌細胞搏動幅度曲線；以時間為X軸，心肌細胞搏動間隙為1軸，構建心肌細胞搏動間隙曲線； (4)分析藥物溶液樣品的心臟毒性:將步驟(2)稀釋后的體積為20沿的不同濃度梯度的工作液分別加入心肌細胞傳感器培養(yǎng)板中，重復步驟(3),檢測心肌細胞在不同濃度梯度的工作液作用下的搏動曲線、搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數；將所得的搏動速率、搏動幅度和搏動間隙與步驟(3)對照組所得的相同參數，采用歸一化處理，即以對照組的每個時間點的狀態(tài)參數作為基準，藥物作用下的狀態(tài)參數與同一時刻對照組的基準相比，進行歸一化計算，通過計算結果，便可分析藥物心臟毒性對心肌細胞搏動速率，搏動幅度和搏動間隙的影響。
[0005]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明方法具有成本低廉且能夠長時間、直觀化地觀察藥物對心肌細胞的作用變化從而評估藥物心臟毒性等優(yōu)點。本發(fā)明較現有的藥物心臟安全性分析方法上，具有操作步驟簡單，成本低和長時直觀化地觀察藥物心臟毒性作用變化等優(yōu)點，除了配制標準品溶液和接種細胞等簡單步驟外無需其他步驟。根據以上優(yōu)點，本發(fā)明方法可成為藥物篩選領域的新工具，并廣泛應用于該領域。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0006]圖1是本發(fā)明方法所使用的檢測系統(tǒng)整體結構圖；
圖2是本發(fā)明方法流程圖；
圖3是本發(fā)明心肌細胞傳感器檢測阿霉素心臟毒性的搏動曲線結果圖；
圖4是本發(fā)明阿霉素心臟毒性分析的搏動速率結果圖；
圖5是本發(fā)明阿霉素心臟毒性分析的搏動幅度結果圖；
圖6是本發(fā)明阿霉素心臟毒性分析的搏動間隙結果圖；
圖中:心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1、…8連接線2、正立顯微鏡3、攝像頭4、計算機5。

【具體實施方式】
[0007]以下結合附圖及具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述，但并不是限制本發(fā)明。
[0008]本發(fā)明基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法，該方法在藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)上實現，如圖1所示，所述藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)包括:心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1、正立顯微鏡攝像頭4和計算機5 ；其中，心肌細胞貼附在心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1的表面；心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1固定在正立顯微鏡3的載物臺上《⑶攝像頭4固定在正立顯微鏡3上方《⑶攝像頭4通過…8連接線2與計算機5連接，從而將采集信號傳輸給計算機5進行后處理；該方法包括以下步驟:
(1)心肌細胞培養(yǎng):將大鼠心臟心尖部置于預冷的高糖培養(yǎng)基(0121)中；然后將漂洗后的心尖組織在預冷的0121中去除心房和血管組織；之后在501玻璃瓶中加入201預冷的平衡鹽溶液￠833)，將心尖轉移到耶33中，剪成1臟3的小塊，加入膠原酶溶液，該膠原酶溶液由質量分數為0.07%胰蛋白酶和質量分數為0.05%小鼠膠原酶II在耶33中混合而成；在玻璃瓶中，經膠原酶溶液消化后的殘余組織塊中加入5“含有體積百分比10%胎牛血清(^88)的0腿1培養(yǎng)基，收集上清液置于含有體積百分比10%？83的0腿1培養(yǎng)基中；將混合后的上清液800印111離心5111111，在沉淀中加入501高糖培養(yǎng)基輕輕吹打以重懸細胞；將重懸的心肌細胞過200目細胞篩，并將細胞收集到51111高糖培養(yǎng)基，組成新的細胞懸液放入501111離心管中；將細胞懸液收集到培養(yǎng)瓶中，進行差速貼壁2次，每次4501??！，以去除纖維細胞和其它細胞；之后將差速貼壁后的心肌細胞懸液轉移到50“離心管中進行細胞計數；而后吸取100耵細胞懸液，混合加入100耵臺盼藍染液并置于室溫下，加化后進行活細胞計數；經過計數后，將培養(yǎng)瓶中的細胞懸液配制成170，000個加1的細胞懸液；最后在心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1中任意選擇一個孔中加入100沿細胞懸液，使孔中細胞數量為17000個丨孔，將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)96小時，使得心肌細胞良好貼附于心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1，構建出心肌細胞傳感器。
[0009](2)配制待測藥物標準樣品溶液:用二甲基亞砜(0130)配制成1.6禮的標準樣品溶液儲存液；用高糖培養(yǎng)基依次稀釋儲存液，得到不同濃度梯度的工作液。
[0010](3)對照組心肌細胞傳感器機械搏動狀態(tài)檢測:首先將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1放置在正立顯微鏡3的在載物臺上，使用40倍物鏡和10倍目鏡，調整正立顯微鏡3載物臺的位置和調焦旋鈕，在視野中能清晰看到心肌細胞^將^⑶攝像頭4的幀率設置為24^8 ；其次如圖2所示，通過計算機5控制冗0攝像頭4進行心肌細胞搏動圖像采集，然后計算心肌細胞的機械搏動曲線；最后通過心肌細胞的機械搏動曲線計算對照組搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數，處理過程包括以下子步驟:
(3.1)將采集的心肌細胞搏動圖像的第一幀作為對照幀圖像；
(3.2)將對照幀圖像進行灰度化，采用的灰度化公式為:
61-87=^^0.299+6^0.587+8^0.114
其中，以^7指圖像像素二值化后的灰度值，I？』和8分別指原始圖像像素紅、綠和藍通道的值；
(3.3)采用大律法對步驟3.2灰度化后的圖像進行二值化，將I記為圖像前景和背景的分割閾值，％記為前景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像前景平均灰度為％ 為背景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像背景平均灰度為111 ；將11記為圖像的總平均灰度，計算公式為；6記為最大類間方差，從最小灰度到最大灰度值遍歷I，依據計算公式(+-11)2,當I使得6最大時，取此時的I為最佳的分割閾值；然后依據I，將圖像像素灰度值小于I的取為0，圖像像素灰度值大于I的取為1，實現灰度圖像的二值化；
(3.4)采集隨后的心肌細胞搏動圖像的序列幀圖像作為實時幀圖像，按照步驟(3.2)和(3.3)對實時幀圖像進行灰度化和二值化處理；
(3.5)將灰度化后的實時幀圖像與灰度化后的對照幀圖像做圖像減法，獲得減法圖像；然后將減法圖像進行圖像像素點的矩陣化，獲得圖像矩陣，此時矩陣元素值為-1、0和1三者其中之一；
(3.6)對圖像矩陣元素進行絕對值化，然后對絕對值化后的圖像矩陣進行元素求和，其和即為搏動圖像差異值；
(3.7)以時間為橫坐標，步驟3.6計算出的實時幀圖像的搏動圖像差異值為縱坐標繪制曲線，該曲線即為心肌細胞機械搏動曲線；
(3.8)對心肌細胞機械搏動曲線進行小波變換，采用7層多尺度分析方法；
(3.9)將7層多尺度分析結果中的近似分量八7、細節(jié)分量01、02和03進行置零，然后采用小波逆變換重構心肌細胞機械搏動曲線，即得到去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線.， (3.10)計算去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的均方差，并將其定為閾值:將去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線中大于閾值的位點記為1，小于閾值的位點記為0，然后再進行差分，曲線結果數值為1、0和-1三者之一；其中曲線值為1的位點為波峰位點的左邊緣，曲線值為-1的位點為波峰位點的右邊緣；
(3.11)依據步驟(3.10)中得到的左邊緣和右邊緣位點，求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最大值，最大值位點即為波峰位點；求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最小值，最小值位點即為波谷位點；最大值與最小值的差即為心肌細胞機械搏動幅度；連續(xù)的波峰位點之間的時間間隔比值，即為心肌細胞機械搏動間隙；
(3.12)每隔30秒統(tǒng)計波峰位點個數、搏動幅度和搏動間隙，將統(tǒng)計波峰位點個數記為30秒內心肌細胞搏動的平均速率；以時間為X軸，心肌細胞搏動的平均速率為1軸，構建心肌細胞搏動平均速率曲線；以時間為X軸，搏動幅度為7軸，構建心肌細胞搏動幅度曲線；以時間為X軸，心肌細胞搏動間隙為1軸，構建心肌細胞搏動間隙曲線；
(4)分析藥物溶液樣品的心臟毒性:將步驟(2)稀釋后的體積為20沿的不同濃度梯度的工作液分別加入心肌細胞傳感器培養(yǎng)板1中，重復步驟(3),檢測心肌細胞在不同濃度梯度的工作液作用下的搏動曲線、搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數；將所得的搏動速率、搏動幅度和搏動間隙與步驟(3)對照組所得的相同參數，采用歸一化處理，即以對照組的每個時間點的狀態(tài)參數作為基準，藥物作用下的狀態(tài)參數與同一時刻對照組的基準相比，進行歸一化計算，通過計算結果，便可分析藥物心臟毒性對心肌細胞搏動速率，搏動幅度和搏動間隙的影響。
[0011]根據上述的基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法，評價1、4和16 三種不同濃度的阿霉素藥物樣品溶液心臟毒性。如圖3所示，為10分鐘時，對照組、和16 阿霉素溶液心肌細胞的機械搏動曲線圖。如圖4、5和6所示，分別為搏動速率、搏動幅度和搏動間隙歸一化計算結果。不同濃度的藥物阿霉素在作用10分鐘后，使心肌細胞搏動速率分別降為對照組的57.35%、51 15%和35.29%，使搏動幅度分別降為對照組的75.38%、64 42%和58.98%，使搏動間隙分別降為對照組的342.509(^297.78%和240.00%。實驗結果證明本發(fā)明方法能夠進行藥物心臟毒性檢測分析。
【權利要求】
1.一種基于心肌細胞傳感器的藥物心臟毒性檢測分析方法，該方法在藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)上實現，所述藥物心臟毒性檢測分析系統(tǒng)包括:心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)、正立顯微鏡(3)、CXD攝像頭(4)和計算機(5);其中，心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)固定在正立顯微鏡(3)的載物臺上；(XD攝像頭(4)固定在正立顯微鏡(3)上方；(XD攝像頭(4)通過USB連接線(2)與計算機(5)連接；其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)心肌細胞培養(yǎng):獲取待測心肌細胞，在高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制成心肌細胞的細胞懸液；經過活細胞計數后，將原細胞懸液配制成170，000個/ml的細胞懸液；最后在心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)中任意選擇一個孔中加入ΙΟΟμΙ細胞懸液，使孔中細胞數量為17000個/孔，將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)96小時，使得心肌細胞良好貼附于心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)的表面，構建出心肌細胞傳感器； (2)配制待測藥物標準樣品溶液:用二甲基亞砜配制成1.6mM的標準樣品溶液儲存液；用高糖培養(yǎng)基依次稀釋儲存液，得到不同濃度梯度的工作液； (3)對照組心肌細胞傳感器機械搏動狀態(tài)檢測:首先將心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)放置在正立顯微鏡(3)的在載物臺上，使用40倍物鏡和10倍目鏡，調整正立顯微鏡(3)載物臺的位置和調焦旋鈕，在視野中能清晰看到心肌細胞；其次通過計算機(5)控制CXD攝像頭(4)進行心肌細胞搏動圖像采集，然后計算心肌細胞的機械搏動曲線；最后通過心肌細胞的機械搏動曲線計算對照組搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數，處理過程包括以下子步驟: (3.1)將采集的心肌細胞搏動圖像的第一幀作為對照幀圖像； (3.2)將對照幀圖像進行灰度化，采用的灰度化公式為:
Gray=RX0.299+GX0.587+BX0.114 其中，Gray指圖像像素二值化后的灰度值，R、G和B分別指原始圖像像素紅、綠和藍通道的值； (3.3)采用大律法對步驟3.2灰度化后的圖像進行二值化，將T記為圖像前景和背景的分割閾值，Wtl記為前景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像前景平均灰度為Utl ；w,為背景像素點數與圖像總像素點數的比例，圖像背景平均灰度為U1 ;將u記為圖像的總平均灰度，計算公式為U=WciXuc^W1Xu1 ；G記為最大類間方差,從最小灰度到最大灰度值遍歷T,依據計算公式G=WtlX (Utl-U)^lX (U1-U)2,當T使得G最大時，取此時的T為最佳的分割閾值；然后依據T，將圖像像素灰度值小于T的取為0，圖像像素灰度值大于T的取為1，實現灰度圖像的二值化； (3.4)采集隨后的心肌細胞搏動圖像的序列幀圖像作為實時幀圖像，按照步驟(3.2)和(3.3)對實時幀圖像進行灰度化和二值化處理； (3.5)將灰度化后的實時幀圖像與灰度化后的對照幀圖像做圖像減法，獲得減法圖像；然后將減法圖像進行圖像像素點的矩陣化，獲得圖像矩陣，此時矩陣元素值為_1、0和I三者其中之一； (3.6)對圖像矩陣元素進行絕對值化，然后對絕對值化后的圖像矩陣進行元素求和，其和即為搏動圖像差異值； (3.7)以時間為橫坐標，步驟3.6計算出的實時幀圖像的搏動圖像差異值為縱坐標繪制曲線，該曲線即為心肌細胞機械搏動曲線； (3.8)對心肌細胞機械搏動曲線進行小波變換，采用7層多尺度分析方法； (3.9)將7層多尺度分析結果中的近似分量A7、細節(jié)分量Dl、D2和D3進行置零，然后采用小波逆變換重構心肌細胞機械搏動曲線，即得到去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線.(3.10)計算去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的均方差，并將其定為閾值:將去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線中大于閾值的位點記為1，小于閾值的位點記為0，然后再進行差分，曲線結果數值為1、0和-1三者之一；其中曲線值為I的位點為波峰位點的左邊緣，曲線值為-1的位點為波峰位點的右邊緣； (3.11)依據步驟(3.10)中得出的左邊緣和右邊緣位點，求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最大值，最大值位點即為波峰位點；求出其區(qū)間中去基線降噪后的心肌細胞機械搏動曲線的最小值，最小值位點即為波谷位點；最大值與最小值的差即為心肌細胞機械搏動幅度；連續(xù)的波峰位點之間的時間間隔比值，即為心肌細胞機械搏動間隙； (3.12)每隔30秒統(tǒng)計波峰位點個數、搏動幅度和搏動間隙，將統(tǒng)計波峰位點個數記為30秒內心肌細胞搏動的平均速率；以時間為X軸，心肌細胞搏動的平均速率為I軸，構建心肌細胞搏動平均速率曲線；以時間為X軸，搏動幅度為y軸，構建心肌細胞搏動幅度曲線；以時間為X軸，心肌細胞搏動間隙為y軸，構建心肌細胞搏動間隙曲線； (4)分析藥物溶液樣品的心臟毒性:將步驟(2)稀釋后的體積為20μ1的不同濃度梯度的工作液分別加入心肌細胞傳感器培養(yǎng)板(I)中，重復步驟(3)，檢測心肌細胞在不同濃度梯度的工作液作用下的搏動曲線、搏動速率、搏動幅度和搏動間隙狀態(tài)參數；將所得的搏動速率、搏動幅度和搏動間隙與步驟(3)對照組所得的相同參數，采用歸一化處理，即以對照組的每個時間點的狀態(tài)參數作為基準，藥物作用下的狀態(tài)參數與同一時刻對照組的基準相t匕，進行歸一化計算，通過計算結果，便可分析藥物心臟毒性對心肌細胞搏動速率，搏動幅度和搏動間隙的影響。
【文檔編號】G01N21/84GK104297249SQ201410469093
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月15日 優(yōu)先權日:2014年9月15日
【發(fā)明者】王平, 蘇凱麒, 胡寧, 王琴, 鄒玲, 黎洪波, 鄒瞿超, 曹端喜 申請人:浙江大學