糖蛋白的測定方法、試劑及糖鏈標(biāo)記物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種能比過去更精準(zhǔn)地檢測肝病的糖鏈標(biāo)志物糖蛋白的測定方法。本發(fā)明提供一種能比過去更精準(zhǔn)地檢測肝病的肝病檢查方法。本發(fā)明提供一種用于上述測定方法的糖蛋白定量用試劑。本發(fā)明還提供一種能夠根據(jù)肝病病情發(fā)展區(qū)別肝病病情的肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)志物糖蛋白。本發(fā)明提供的糖蛋白測定方法是對采自受檢者的試樣中所含α-1-酸性糖蛋白(AGP)和Mac-2-結(jié)合蛋白（M2BP）至少其中之一的糖蛋白進行測定，當(dāng)糖蛋白為AGP時，測定與選自AOL和MAL的第一凝集素結(jié)合的AGP，當(dāng)糖蛋白為M2BP時，測定與選自WFA、BPL、AAL、RCA120和TJA-II的第二凝集素結(jié)合的M2BP。
【專利說明】糖蛋白的測定方法、試劑及糖鏈標(biāo)記物
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?01080040972. 3、申請日為2010年7月14日、名稱為"糖蛋白 質(zhì)的測定方法、肝病的檢查方法、糖蛋白質(zhì)定量用試劑及肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記糖蛋白質(zhì)" 的由同一 申請人:提交的中國發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002]

【技術(shù)領(lǐng)域】： 本發(fā)明涉及以下內(nèi)容：選自a-1-酸性糖蛋白（AGP)和Mac-2-結(jié)合蛋白（M2BP)中至 少其中之一的糖蛋白測定方法；使用了選自AGP和M2BP中至少一種糖蛋白的肝病的檢查方 法；以及能夠根據(jù)糖鏈的不同檢測出基礎(chǔ)肝?。╱nderlying liver)狀態(tài)，即檢測出肝細胞 癌和炎癥、纖維化等的糖鏈標(biāo)記物糖蛋白。
[0003]

【背景技術(shù)】： 肝癌大致可以分為在肝臟發(fā)生的原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌，普遍認為，原發(fā)性肝癌的 90%都是肝細胞癌。
[0004] 在肝細胞癌患者的基礎(chǔ)疾病中，大多是感染C型肝炎病毒或B型肝炎病毒，并從急 性病毒性肝炎轉(zhuǎn)為慢性病毒性肝炎、肝硬化，大多數(shù)情況下，從患病毒性肝炎起，再經(jīng)過很 長一段時間才會發(fā)生癌變。在肝硬化中，由于炎癥和再生會反復(fù)進行，所以正常肝細胞減 少，從而變?yōu)橛衫w維組織構(gòu)成的器官。如，僅日本就有300萬的C型肝炎患者，在中國和 非洲據(jù)說有1000多萬人。B型和C型肝炎患者從慢性肝炎轉(zhuǎn)為癌癥的比率如下：輕度慢性 肝炎（Fl)的年率為0. 8%，中度慢性肝炎（F2)的年率為0. 9%，而重度慢性肝炎（F3)的年率 達到3. 5%，肝硬化（F4)轉(zhuǎn)為癌癥的概率則上升為年率7% (圖1、2)。患肝病時，隨著病情的 發(fā)展，組織學(xué)圖像會發(fā)生變化（圖3)，如首先在慢性肝炎中，肝功能開始消失，然后，在肝硬 化中出現(xiàn)病態(tài)結(jié)構(gòu)，肝臟逐漸纖維化等。
[0005] 在癌癥治療中，癌癥的早期發(fā)現(xiàn)非常重要，在肝細胞癌中也是同樣，早期發(fā)現(xiàn)癌癥 對治療和術(shù)后預(yù)后有很大影響。進行了肝切除治療后的5年存活率在I期為80%，在IV期 則不過38%。
[0006] 迄今為止已知的肝癌標(biāo)記物有甲胎蛋白（AFP)和通過維生素K缺乏或拮抗劑II誘 導(dǎo)的蛋白質(zhì)（PIVKA-II)(專利文件1、2)，但其特異性和靈敏性都不夠。因此，現(xiàn)在為了盡早 發(fā)現(xiàn)肝癌，在檢查和診斷中往往使用肝癌標(biāo)記物、以及超聲波檢查、計算機斷層攝影（CT)、 核磁共振成像法（MRI)等圖像檢查。
[0007] 非專利文件1所記述的內(nèi)容中做了以下嘗試：用AAL凝集素測定血清中的巖藻糖 基化AGP，檢測出肝硬化。然而，從其表2所述結(jié)果可以看出，在非專利文件1中的技術(shù)中， 靈敏性為66%左右，特異性為87%，正確診斷率為77%左右，其肝病檢測功能不能令人十分滿 〇
[0008] 非專利文件2中記述有如下實驗：通過使用RCA凝集素的免疫色譜法，測定健康 人、急性肝炎患者、慢性肝炎患者、肝硬化患者和肝細胞癌患者的血清中的缺乏唾液酸基的 AGP (asialo AGP)，以驗證能否對各種肝病作出陽性判斷。然而，從其表2所述結(jié)果可以看 出，非專利文件2中的技術(shù)中，肝硬化的靈敏度為88%左右，但是慢性肝炎患者中的假陽性 率達到了 63%，從肝病檢測功能上來看不能令人滿意。
[0009] 在先技術(shù)文獻 專利文件 專利文件1 :特開平10-26622號 專利文件2 :特開平8-184594號。
[0010] 非專利文件 非專利文件I :Ingvar Ryden等，a 1-酸性糖蛋白巖藻糖基化在接受肝活檢患者中 的肝硬化診斷準(zhǔn)確性，《臨床化學(xué)》48:12, 2195-2201 (2002) (Diagnostic Accuracy of a I-Acid Glycoprotein Fcosylation for Liver Cirrhosis in Patients Undergoing Hepatic Biopsy，Clinical Chemistry 48:12,2195-2201 (2002)) 非專利文件2 :Eun Young Lee等，用于檢測肝病患者的血清缺乏唾液酸基的a I-酸 性糖蛋白的快速免疫色譜法試紙的進展，《免疫法雜志》，308 (2006) 116-123 (Development of a rapid, immunochromatographic strip test for serum asialo a 1-acid glycoprotein in patients with hepatic disease, Journal of Immunological Methods 308(2006) 116-123)。
[0011]


【發(fā)明內(nèi)容】
： 發(fā)明要解決的課題 本發(fā)明的課題在于：提供一種能夠比過去更精準(zhǔn)地檢測肝病的糖鏈標(biāo)記物糖蛋白的測 定方法。本發(fā)明的課題在于：提供一種能夠比過去更精準(zhǔn)地檢測肝病的肝病檢查方法。本 發(fā)明的課題在于：提供一種用于上述測定方法的糖蛋白定量用試劑。本發(fā)明的課題還在于： 提供一種肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物糖蛋白，該糖鏈標(biāo)記物糖蛋白能夠區(qū)分開與肝病的進展 情況相應(yīng)的肝病病情。
[0012] 解決課題的手段 選自以下物質(zhì)中的至少一種的糖蛋白測定方法，其中上述物質(zhì)為采自受檢者的試樣中 所含a-1-酸性糖蛋白（AGP)和Mac-2-結(jié)合蛋白（M2BP)，在該糖蛋白測定方法中，當(dāng)糖蛋 白為AGP時，測定與第一凝集素結(jié)合的AGP，其中所述第一凝集素選自AOL和MAL，當(dāng)糖蛋白 為M2BP時，測定與第二凝集素結(jié)合的M2BP，其中所述第二凝集素選自WFA、BPL、AAL、RCA120 和 TJAII。
[0013] 發(fā)明的效果 用本發(fā)明的測定方法可以簡便地測定糖鏈標(biāo)記物糖蛋白，其中該糖鏈標(biāo)記物糖蛋白能 夠高可信度地檢查肝硬化等肝病。
[0014] 用本發(fā)明的肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物糖蛋白所進行的檢查中，其正確診斷率比現(xiàn) 有的標(biāo)記物高，且用微量血清即可檢查，通過本發(fā)明的肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物糖蛋白，不 僅能監(jiān)視肝纖維化的進展情況，把握病情發(fā)展，還能夠?qū)M行了干擾素等抗病毒療法后的 肝纖維化和炎癥的改善進行評估。

【專利附圖】

【附圖說明】 [0015] ：
[圖1]顯示的是從感染C型肝炎到患肝細胞癌的時間推移和肝狀態(tài)的變化；
[圖2]為由慢性肝炎轉(zhuǎn)為肝細胞癌的比率的示圖；
[圖3]為肝硬化轉(zhuǎn)為肝細胞癌的比率示圖；
[圖4]為基礎(chǔ)肝組織的變化與患癌的關(guān)系圖；
[圖5]為從感染到患癌的肝結(jié)構(gòu)變化的示圖；
[圖6]顯示的是肝的狀態(tài)變化與診斷治療方案的關(guān)系；
[圖7]為以凝集素微陣列為基礎(chǔ)的生物標(biāo)記物候選分子的驗證實驗的步驟流程圖； [圖8]是一張結(jié)果圖，其顯示的是通過抗體鋪覆凝集素微陣列對肝病病情指標(biāo)標(biāo)記物 糖蛋白之一的a 1酸性糖蛋白（AGP)進行比較糖鏈分析的結(jié)果；
[圖9]是一張結(jié)果圖，其顯示的是通過抗體鋪覆凝集素微陣列，對肝病病情指標(biāo)標(biāo)記 物糖蛋白之一的90K/Mac-2-結(jié)合蛋白（M2BP)進行比較糖鏈分析的結(jié)果；
[圖10]的附圖顯示的是以下兩者之間的相關(guān)性：肝臟的纖維化進展、以及通過AGP的 抗體鋪覆凝集素陣列分析獲得的凝集素信號強度變化；
[圖11]顯示的是：根據(jù)肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物，即AGP的抗體鋪覆凝集素微陣列分 析而制定的肝硬化檢測方案；
[圖12]是將AGP作為能夠監(jiān)視肝臟的纖維化進展的標(biāo)記物的干擾素的治療的效果判 斷圖；
[圖13]為在第一快速測定法中使用DSA時的稀釋線性示意圖；
[圖14]為在第一快速測定法中使用ML時的稀釋線性示意圖；
[圖15]為在第一快速測定法中使用AOL時的稀釋線性示意圖；
[圖16]為在第一快速測定法中，對市場出售的樣本使用MAL時的測定結(jié)果示意圖； [圖17]為在第一快速測定法中，對市場出售的樣本使用AOL時的測定結(jié)果示意圖； [圖18]為在凝集素陣列法中，對市場出售的樣本使用ML時的測定結(jié)果示意圖；
[圖19]為在凝集素陣列法中，對市場出售的樣本使用AOL時的測定結(jié)果示意圖；
[圖20]為在第二快速測定法中使用DSA時的稀釋線性示意圖；
[圖21]為在第二快速測定法中使用ML時的稀釋線性示意圖；
[圖22]為在第二快速測定法中使用AOL時的稀釋線性示意圖；
[圖23]為在第二快速測定法中，對市場出售的樣本使用MAL時的測定結(jié)果示意圖； [圖24]為在第二快速測定法中，對市場出售的樣本使用AOL時的測定結(jié)果示意圖； [圖25]為在第二快速測定法中對臨床樣本使用MAL時的測定結(jié)果示意圖；
[圖26]為在第二快速測定法中對臨床樣本使用AOL時的測定結(jié)果示意圖；
[圖27]為在凝集素陣列法中對臨床樣本使用MAL時的測定結(jié)果示意圖；
[圖28]為在凝集素陣列法中對臨床樣本使用AOL時的測定結(jié)果示意圖；
[圖29]是以125例HCV感染患者的血清為對象，用第二快速測定法進行測定后的結(jié)果 示意圖；
[圖30]是以100例健康者的樣本為對象，用凝集素陣列法和第二快速測定法進行測定 后的結(jié)果的比較圖；
[圖31]的附圖顯示的是以下兩者之間的相關(guān)性：肝臟的纖維化進展、以及通過M2BP 的抗體鋪覆凝集素陣列分析獲得的凝集素信號強度的變化；
[圖32]為肝細胞癌患者術(shù)前術(shù)后的血清中M2BP上糖鏈變化的示圖；
[圖33]為檢測WFA結(jié)合性M2BP的最佳方式，即凝集素-抗體三明治型ELISA的模型 圖；
[圖34]為肝癌癥患者術(shù)后血清中WFA結(jié)合性M2BP量的隨時間變化的示意圖；
[圖35]顯示的是用ELISA檢測WFA結(jié)合性M2BP時，樣本加熱處理的有無對檢測靈敏 性的影響；
[圖36]顯示的是在用第二快速測定法測定M2BP時，在以HepG2培養(yǎng)細胞的上清為試 樣的情況下，使用WFA進行測定的稀釋線性示意圖；
[圖37]顯示的是在用第二快速測定法測定M2BP時，在以重組人半乳糖凝集素-3BP (Recombinant Human Galectin-3BP)/MAC_2BP為試樣的情況下，使用WFA進行測定的稀釋 線性示意圖。
[0016]

【具體實施方式】： 1.慢性肝病的現(xiàn)狀 1-1.肝病的病情 人在感染B型肝炎病毒或C型肝炎病毒后，從急性期炎癥開始，經(jīng)過5-15年會發(fā)展為 慢性期炎癥。特別是進入慢性期的C型肝炎很少自愈，肝功能會逐漸降低，直至肝硬化。圖 1顯示的是從感染C型肝炎起，直到發(fā)展為肝細胞癌的時間推移與肝狀態(tài)的變化。為了定義 從慢性肝炎到肝硬化的病情，從病理形態(tài)學(xué)角度捕捉肝臟的格利森區(qū)域（Glisson)和肝小 葉的纖維性變化，并將其分類為輕度（Fl)、中度（F2 )、重度（F3 )和肝硬化期（F4)。纖維化進 展與肝細胞癌患癌風(fēng)險的上升之間存在關(guān)聯(lián)，如圖2所示，F(xiàn)l或2的年率為1%以下，與此 相對應(yīng)，F(xiàn)3中上升到每年3-4%。在對纖維化程度進一步發(fā)展的組織學(xué)圖像進行確認，并診 斷為肝硬化的（F4)中，如圖3所示，肝細胞癌出現(xiàn)的概率為年率7%。因此，為了有效發(fā)現(xiàn)并 治療肝細胞癌，重要的是簡便地甄別出處于F3及F4狀態(tài)的患者，并將其作為精密檢查的對 象進行跟蹤。
[0017] 在日本的B型肝炎和C型肝炎患者醫(yī)療補助事業(yè)中，主要針對的對象是：在肝活檢 標(biāo)本的病理組織學(xué)診斷中，判斷為纖維化程度為F1-3的患者。當(dāng)診斷為F4時，將其歸類為 肝硬化，在干擾素治療的B型肝炎和C型肝炎患者醫(yī)療補助事業(yè)中，僅有其中的一部分成為 補助對象，無法取得滿意的治療結(jié)果。
[0018] 1-2.對于抗病毒療法控制纖維化進行評估 慢性C型肝炎適用于PEG-IFN+RBV療法，C型肝炎硬化代償期則適合單獨用干擾素治 療。另一方面，B型肝炎(慢性肝炎、肝硬化）的治療中主要使用核酸類似物，因此必須有炎 癥和纖維化評估標(biāo)記物。尤其是血清生物標(biāo)記物有望廣泛應(yīng)用于臨床診斷和評估。
[0019] 1-3?肝細胞癌 一般認為，患肝細胞癌是由于以下兩種因子活躍地交互作用所致：B型肝炎病毒或C型 肝炎病毒感染所產(chǎn)生的微生物學(xué)因子、以及環(huán)境因子。在日本，已知肝細胞癌患者的約9成 感染過B型肝炎或C型肝炎病毒，肝細胞癌患者的約9成出現(xiàn)在慢性肝炎和肝硬化患者中。 據(jù)認為，肝細胞癌的癌變危險因子中，除病毒以外，還有男性、高齡、大量飲酒、抽煙、以及毒 枝菌素中的黃曲霉毒素等。（肝癌診療指南，（財）國際醫(yī)學(xué)情報中心)。
[0020] 1-4.肝細胞癌的早期診斷 目前，肝細胞癌的發(fā)現(xiàn)主要靠以下方法：測定受檢者血清樣本中的AFP和PIVKA-II等 肝癌標(biāo)記物、以及以超聲波檢查（回聲檢查)為中心的圖像診斷。在圖像診斷中，通常將超聲 波檢查或CT作為初次檢查，這些檢查中發(fā)現(xiàn)某種異常時，再做MRI和血管造影。
[0021] 1-5.從預(yù)防肝細胞癌的觀點出發(fā)，篩選癌癥高危人群 在日本，肝細胞癌患者的約9成來自于感染B型肝炎病毒或C型肝炎病毒的肝炎患者， 可以以病毒感染和肝功能下降為指標(biāo)，篩選成為精密檢查的對象的患者。
[0022] 然而，即使是肝細胞癌以7%的年率出現(xiàn)的肝硬化（F4)患者，為早期發(fā)現(xiàn)并治療癌 癥，需要每隔三個月進行一次高額的高侵襲性精密檢查，不得不說，這對患者的經(jīng)濟和身體 都是很大的負擔(dān)。每年癌變率為3-4%的F3更是如此。此外，考慮到通過干擾素治療C型 肝炎病毒的成功率只有5成左右，就更需要對眾多干擾素治療未奏效的慢性肝炎患者進行 臨床跟蹤，明確其處于肝硬化和肝細胞癌進程中的哪個階段。即在目前的肝炎到肝細胞癌 的疾病治療中，需要通過血液檢查等簡易的檢查，權(quán)衡肝炎到肝硬化患者的癌變風(fēng)險，并進 行與之相應(yīng)的肝細胞癌的診斷治療。
[0023] 在臨床病理學(xué)上，纖維化程度與肝硬化和肝細胞癌的風(fēng)險之間存在著相關(guān)性，這 一點入手，我們發(fā)現(xiàn)，開發(fā)出一種能夠以血清學(xué)方式定量測定纖維化進展的檢查技術(shù)，便可 以解決上述問題。如圖4所示，肝臟中的C型肝炎病毒感染會引起受損肝細胞的再生，以及 切口修復(fù)，即纖維化。隨著肝臟纖維化的發(fā)展，患癌的風(fēng)險升高，因此，"纖維化程度"是一項 向癌癥發(fā)展的指標(biāo)。在出現(xiàn)癌的基礎(chǔ)肝組織中，由于結(jié)構(gòu)細胞發(fā)生變化，因此可以預(yù)測到， 伴隨著纖維化的發(fā)展會發(fā)生糖鏈變化。如圖5所示，從感染起逐漸發(fā)展成癌癥，此時，可以 觀察到肝喪失了其正常結(jié)構(gòu)和功能的常規(guī)活性，同時出現(xiàn)了以纖維化為特征的病態(tài)結(jié)構(gòu)。 已知在肝細胞癌中，早期肝細胞癌發(fā)展為典型肝細胞癌，細胞特性發(fā)生變化，超過2cm后， 早期肝細胞癌中就會出現(xiàn)典型肝細胞癌。圖6顯示了肝的狀態(tài)變化與診治方案的關(guān)系。對 于慢性肝炎采用的是聚乙二醇干擾素和病毒唑并用療法（PEG-IFN+RBV療法)，對于早期肝 細胞癌采用的是無線電頻率燒灼術(shù)（RFA)。對肝硬化沒有診斷檢查法及有效的治療方法。 本發(fā)明的糖鏈標(biāo)記物糖蛋白能夠區(qū)分慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌，因此是肝硬化的新治 療方法的開發(fā)中的一項指標(biāo)。此外，將其與FibroScan共用，有望對纖維化進行定量評估， 因此也能夠用糖鏈標(biāo)記物糖蛋白圈定纖維化（F3-F4)病例。除了纖維化的定量診斷外，在 以抑制肝纖維化的發(fā)展和癌變?yōu)槟康牡闹委熤?，也有望臨床導(dǎo)入該成果，并將其作為治療 效果的血清評估標(biāo)記物使用。
[0024] 2.新肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物糖蛋白的肝病特異性糖鏈變化 本發(fā)明中的新肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物糖蛋白，即AGP和M2BP會產(chǎn)生糖鏈變化，該糖 鏈變化使得以下各項具有各自的特征：因病毒感染而引起的疾病在其發(fā)生、發(fā)展過程中出 現(xiàn)的慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌。將這種以病毒性肝病的病情發(fā)展中所伴隨的糖鏈變化 為指標(biāo)，能夠判斷肝病病情的標(biāo)記物糖蛋白稱為肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物。
[0025] 對本發(fā)明的新肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物，即對AGP和M2BP的糖鏈變化的檢測中， 能反映出病毒性肝病的各種病情的特征，即能夠反映出肝細胞癌、肝硬化、肝纖維化（F3和 F4標(biāo)記物）或慢性肝炎的特征，能夠鑒別出上述各種疾病。然而因疾病的種類和進展程度 的不同，這些標(biāo)記物的糖鏈變化也會表現(xiàn)為不同的種類和比率。因此，為了充分利用標(biāo)記 物，并制造出專門針對各個對象的檢測試劑盒，就需要從統(tǒng)計學(xué)的角度，選擇反映疾病特異 性糖鏈變化的凝集素探針。
[0026] 3.糖鏈標(biāo)記物糖蛋白的肝病特異性糖鏈變化的驗證 用后述凝集素陣列驗證了 AGP和M2BP上的糖鏈的疾病特異性變化。最好使用抗體鋪 覆凝集素陣列法。根據(jù)用凝集素陣列測定上述標(biāo)記物糖蛋白的結(jié)果，研究1)隨著病情的進 展，在哪個凝集素信號中看出多少測定值變化，2)測定值的變化在哪個疾病階段(初期還是 晚期）最明顯，3)測定值變化的信息是否有利于疾病的控制，以評估其有用性，驗證該標(biāo)記 物適用于哪種肝病病情。
[0027] 下面將更具體地介以下方法：將糖鏈標(biāo)記物糖蛋白用于肝纖維化的進展監(jiān)視和肝 硬化檢測時，如何選擇適合的凝集素探針。
[0028] 對于從(病毒性）肝炎患者、肝硬化患者和肝細胞癌患者的血清中采集的糖蛋白 (AGP和M2BP)，用抗體鋪覆凝集素陣列法等比較糖鏈特征。首先，從(病毒性）肝炎患者、慢 性肝炎、肝硬化患者和肝細胞癌患者采集血樣。在采集的各個血樣中，分別用抗體對AGP和 M2BP進行免疫沉降，濃縮提純，用抗體鋪覆凝集素陣列確認了可以將其作為肝病病情的糖 鏈標(biāo)記物糖蛋白使用。更具體而言，如圖7所示，以肝炎病毒感染者的血清為對象，就AGP和 M2BP進行比較糖鏈分析。通過使用抗AGP抗體和抗M2BP抗體的免疫沉降法，可以分別簡 單地對AGP和M2BP進行濃縮。凝集素微陣列是高靈敏性的比較糖鏈分析裝置，有100納克 的蛋白質(zhì)制備量就足夠進行分析，因此，可以以小規(guī)模進行上述前處理。將濃縮后的AGP和 M2BP迅速地添加到凝集素微陣列中，反應(yīng)一定時間后，通過抗體鋪覆凝集素微陣列法，獲得 AGP和M2BP的糖鏈探針。此時，添加到凝集素陣列中的蛋白質(zhì)的量因蛋白質(zhì)而不同，大概 從1納克到數(shù)十納克。只對統(tǒng)計分析所需數(shù)量的樣本進行陣列分析，然后，用其數(shù)據(jù)集進行 T檢驗（Student-T test)等二群比較分析。以此，可以客觀地選擇出隨病情變化而在信號 上產(chǎn)生顯著性差異（significant difference)的凝集素。凝集素微陣列比如可以使用固化 多個凝集素的凝集素微陣列，其中所述多個凝集素包含下面的表2所述凝集素的部分或全 部，更具體而言，可以使用Kuno A?等，《自然方法學(xué)》（Nat. Methods) 2,851-856(2005) 中所記述的凝集素微陣列或GP生物科學(xué)公司生產(chǎn)的LecChip。抗體可以使用表1所列抗體
[表1]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于測定采自受檢者的試樣中所含a-1-酸性糖蛋白（AGP)的AGP定量用試 齊U，其特征在于，該AGP定量用試劑具有以下物質(zhì)：固定有選自AOL和MAL中的凝集素的磁 性粒子、以及標(biāo)記抗AGP抗體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述AGP定量用試劑，其特征在于，該試劑包括固定有AOL的磁性粒 子和固定有MAL的磁性粒子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述AGP定量用試劑，其特征在于，所述標(biāo)記抗AGP抗體的標(biāo)記物是 經(jīng)過去糖基處理的堿性磷酸酶。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述AGP定量用試劑，其特征在于，所述標(biāo)記抗AGP抗體的抗AGP抗 體是經(jīng)過去糖基處理的抗AGP抗體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述AGP定量用試劑，其特征在于，還具有反應(yīng)性不隨AGP的糖鏈結(jié) 構(gòu)變化而變化的標(biāo)準(zhǔn)化用凝集素。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述AGP定量用試劑，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)化用凝集素是DSA。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述AGP定量用試劑，其特征在于，該試劑包括固定有DSA的磁性粒 子。
8. -種肝病病情指標(biāo)糖鏈標(biāo)記物，該標(biāo)記物由具有肝病特異性糖鏈變化、且與選自 AOL和MAL中的凝集素結(jié)合了的a -1-酸性糖蛋白（AGP)構(gòu)成。
【文檔編號】G01N33/68GK104374919SQ201410474611
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2010年7月14日 優(yōu)先權(quán)日:2009年7月14日
【發(fā)明者】成松久, 池原讓, 久野敦, 曾我部萬紀(jì), 田中靖人, 溝上雅史, 伊藤清顯, 松原俊介, 鶴野親是, 高浜洋一, 香川孝司, 永井慎也 申請人:獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所, 公立大學(xué)法人名古屋市立大學(xué), 獨立行政法人國立國際醫(yī)療研究中心, 希森美康株式會社