一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品安全【技術領域】，具體涉及一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法。本發(fā)明前處理方法包括待測樣品的稱量、提取、回旋振蕩、離心、凈化、衍生化等操作；所用儀器包括離心機、振蕩器、恒溫干燥箱和氮吹儀等；用本前處理方法制備出的樣品溶液可以直接用氣相色譜－質譜法進行檢測。該前處理方法與現(xiàn)有方法相比，具有操作成本低、高重現(xiàn)性、高準確性、高靈敏度等優(yōu)點，具有很強的可操作性，有望在農業(yè)、質檢部門及出入境檢驗檢疫等行業(yè)大規(guī)模推廣應用，具有顯著的經濟效益。本發(fā)明可以準確檢測到肉類中是否含有氯霉素，經檢測后的動物產品食用是安全的，并符合我國國家標準的要求。
【專利說明】一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全【技術領域】，具體涉及一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法。

【背景技術】
[0002]氯霉素是一種高效廣譜的抗生素，在各種動物傳染性疾病的防治方面得到了廣泛的應用，由于氯霉素有嚴重的毒副作用，長期微量攝入氯霉素不僅會使大腸桿菌、沙門氏菌等多種菌株產生耐藥性，而且會引起動物機體正常菌群失調、抵抗力降低、易感染各種疾病。氯霉素在食用動物中的殘留，可通過食物鏈在人體中富集，因此對人類的健康構成了潛在危害。許多國家和地區(qū)已經相繼禁止或嚴格限制使用氯霉素，1999年9月13日，我國農業(yè)部發(fā)布了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知，規(guī)定了氯霉素在所有食品動物的可食用組織中不得檢出。但由于氯霉素抑菌效果好，價格低廉，目前違法使用的現(xiàn)象時有發(fā)生。因此，建立高靈敏度、特異性強、簡便易行而又經濟的氯霉素殘留的分析方法已經成為一項迫切的任務。
[0003]現(xiàn)有檢測動物產品中氯霉素含量的方法包括氯霉素檢測方法包括微生物法、色譜法、免疫測定法。微生物法易操作，費用低，但靈敏度低，特異性差；免疫測定具有靈敏度高、特異性強、對儀器設備和人員素質要求低以及樣品前處理簡單等優(yōu)點，適于現(xiàn)場監(jiān)控和大規(guī)模樣品篩選，但其影響因素較多，易出現(xiàn)假陽性結果，抗體批次不同，測定結果也會出現(xiàn)差異等；色譜法精確可靠、靈敏度高，檢測極限可達到0.1 μ gPkg，但前處理步驟多，回收率偏低，所以急需一種操作成本低，具備高重現(xiàn)性、高準確性、高靈敏度的前處理方法。


【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明前處理方法包括待測樣品的稱量、提取、回旋振蕩、離心、凈化、衍生化等操作；所用儀器包括離心機、振蕩器、恒溫干燥箱和氮吹儀等；用本前處理方法制備出的樣品溶液可以直接用氣相色譜一質譜法進行檢測。該前處理方法與現(xiàn)有方法相比，具有操作成本低、高重現(xiàn)性、高準確性、高靈敏度等優(yōu)點，具有很強的可操作性，有望在農業(yè)、質檢部門及出入境檢驗檢疫等行業(yè)大規(guī)模推廣應用，具有顯著的經濟效益。本發(fā)明可以準確檢測到肉類中是否含有氯霉素，經檢測后的動物產品食用是安全的，并符合我國國家標準的要求。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0006](I)提取；稱取3?8g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入15?25mL乙酸乙酯，均質0.5?1.5min,回旋振蕩15?25min, 2500?3500r/min離心3?8min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用10?20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干；
[0007](2)凈化；加入0.5?1.5mL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入15?25mL質量分數為3%?8%氯化鈉和5?15mL正己燒；回旋振蕩5?15min,棄去正己燒層；再加入10?20mL乙酸乙酯，回旋振蕩5?15min，靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至 0.5 ?1.5mL ；
[0008](3)衍生化；將上述液體移入5mL具塞離心管中，用I?3mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C?60°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入90?110 μ L正己烷，90?110 μ L硅烷化試劑，混勻20?40s，于恒溫干燥箱中110°C?130°C反應20?40min，氮氣吹干；加入0.3?0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0009]所述步驟(I)進一步優(yōu)選為稱取5.0g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯,均質Imin,回旋振蕩20min, 3000r/min離心5min ;取上清液轉入另一10mL離心管中，試樣中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干。
[0010]所述步驟((2)進一步優(yōu)選為加入ImL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入20mL 5%氯化鈉和1mL正己燒；回旋振蕩lOmin。棄去正己燒層；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振蕩1min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至lmL。
[0011]所述步驟(3)進一步優(yōu)選為將上述液體移入5mL具塞離心管中，用2mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入10yL正己烷，100 μ L硅烷化試劑，混勻30s，于恒溫干燥箱中120°C反應30min，氮氣吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0012]本發(fā)明具有定量準確、靈敏度高、檢出限低、操作簡單、分析時間短、適用范圍廣等優(yōu)點，能夠滿足國內食品安全的標準和出口有關要求，與現(xiàn)有技術相比，具有如下特點:
[0013]1.操作成本低。其他專利技術一般是采用固相萃取方法進行凈化，提高了檢測成本。本專利創(chuàng)新采取液液萃取方法，在保證凈化效果前提下，極大降低前處理檢測成本(一個固相萃取柱約30元)，具有廣闊的應用前景。
[0014]2.操作簡單、分析時間短。一般人員經過簡單的培訓即可掌握，前處理時間比其他專利技術方法短，能夠更適用于滿足企業(yè)和各類檢測機構快速檢測的需要。
[0015]3.適用范圍廣。其他專利技術方法一般只適用于雞肉或豬肉相比，本發(fā)明技術方法經實驗證明，可廣泛的適用于包括肉類、蛋類、動物內臟等動物產品，適用范圍廣等優(yōu)點。

【具體實施方式】
[0016]為使本發(fā)明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例子僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017]實施例1:
[0018]一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0019](I)提??；稱取5.0g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯，均質Imin,回旋振蕩20min, 3000r/min離心5min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干；
[0020](2)凈化；加入ImL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入20mL 5%氯化鈉和1mL正己烷；回旋振蕩lOmin。棄去正己燒層；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振蕩1min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至ImL ；
[0021](3)衍生化；將上述液體移入5mL具塞離心管中，用2mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入100 μ L正己烷，100 μ L硅烷化試劑，混勻30s，于恒溫干燥箱中120°C反應30min，氮氣吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0022]實施例2:
[0023]一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0024](I)提??；稱取3g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入25mL乙酸乙酯，均質0.5min,回旋振蕩25min, 2500r/min離心8min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用1mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干；
[0025](2)凈化；加入1.5mL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入15mL濃度為8%氯化鈉和5mL正己燒；回旋振蕩15min,棄去正己燒層；再加入1mL乙酸乙酯，回旋振蕩15min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至0.5mL ；
[0026](3)衍生化；將上述液體移入5mL具塞離心管中，用3mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入IlOyL正己烷，90yL硅烷化試劑，混勻40s，于恒溫干燥箱中110°C反應40min，氮氣吹干；加入0.3mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0027]實施例3:
[0028]一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，由以下步驟組成:
[0029](I)提??；稱取8g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入15mL乙酸乙酯，均質1.5min,回旋振蕩15min, 3500r/min離心3min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干；
[0030](2)凈化；加入0.5mL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入25mL濃度為3%氯化鈉和15mL正己燒；回旋振蕩5min,棄去正己燒層；再加入20mL乙酸乙酯，回旋振蕩5min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至1.5mL ；
[0031](3)衍生化；將上述液體移入5mL具塞離心管中，用ImL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用60°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入90 μ L正己烷，110 μ L硅烷化試劑，混勻20s，于恒溫干燥箱中130°C反應20min，氮氣吹干；加入0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
[0032]以上已將本發(fā)明做一詳細說明，以上所述，僅為本發(fā)明之較佳實施例而已，當不能限定本發(fā)明實施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋范圍內。
【權利要求】
1.一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)提?。环Q取3?8g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入15?25mL乙酸乙酯，均質0.5?1.5min,回旋振蕩15?25min, 2500?3500r/min離心3?8min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用10?20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干； (2)凈化；加入0.5?1.5mL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入15?25mL質量分數為3%?8%氯化鈉和5?15mL正己燒；回旋振蕩5?15min,棄去正己燒層；再加入10?20mL乙酸乙酯，回旋振蕩5?15min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至0.5?1.5mL ； (3)衍生化；將上述液體移入5mL具塞離心管中，用I?3mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C?60°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入90?110 μ L正己烷，90?110 μ L硅烷化試劑，混勻20?40s，于恒溫干燥箱中110°C?130°C反應20?40min，氮氣吹干；加入0.3?0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
2.如權利要求1所述的一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(I)為稱取5.0g勻漿后的肉類或蛋類置于10mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯，均質Imin,回旋振蕩20min, 3000r/min離心5min ;取上清液轉入另一 10mL離心管中，試樣中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮氣吹干。
3.如權利要求1所述的一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(2)為加入ImL甲醇超聲溶解殘渣，依次加入20mL 5%氯化鈉和1mL正己烷；回旋振蕩lOmin。棄去正己燒層；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振蕩1min,靜置分層，吸取上層轉入15mL具塞離心管中，氮氣吹至ImL。
4.如權利要求1所述的一種動物產品中氯霉素檢測的前處理方法，其特征在于:所述步驟(3)為將上述液體移入5mL具塞離心管中，用2mL乙酸乙酯洗原離心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮氣蒸發(fā)至干；向殘余物中依次加入100 μ L正己燒，100 μ L硅烷化試劑，混勻30s，于恒溫干燥箱中120°C反應30min，氮氣吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測液。
【文檔編號】G01N30/06GK104280483SQ201410493782
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年9月24日 優(yōu)先權日:2014年9月24日
【發(fā)明者】路平 申請人:中國動物衛(wèi)生與流行病學中心