人熱休克蛋白gp96在制備篩查肝病的產品中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了人熱休克蛋白gp96在制備篩查肝病的產品中的應用。本發(fā)明公開檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷疾病的預后的產品中的應用。本發(fā)明證明人熱休克蛋白可以作為一種新的肝硬化、肝癌標志物。本發(fā)明公開的試劑盒對于肝硬化、肝癌的早期篩查、預防、治療和治療后監(jiān)測具有重大意義。
【專利說明】人熱休克蛋白gp96在制備篩查肝病的產品中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及人熱休克蛋白gp96在制備篩查肝病的產品中的應用，屬于生物醫(yī)學 領域。

【背景技術】
[0002] 熱休克蛋白gp96,即GRP94 (glucose-regulatedprotein94)，是存在于真核生物 細胞內質網中分子量約為96kDa的熱休克蛋白。它屬于HSP90家族，是胞質HSP90的旁系 同源蛋白，約占細胞總蛋白的1%。在正常的生理條件下，gp96定位于細胞內質網中，也存 在細胞的質膜上。gp96N端的21個疏水性氨基酸的信號肽介導gp96分子進入內質網，在內 質網中在蛋白酶的作用下將信號肽被切除，gp96分子通過C端的KDEL序列與內質網膜上 的KDEL受體相互作用使gp96分子滯留于內質網中，在內質網中被加工。gp96在進化過程 中是高度保守，成熟的gp96蛋白由四個結構域組成：N端結構域，含有ATP結合區(qū)及結合抗 原肽的區(qū)域；帶電鉸鏈區(qū)，是gp96發(fā)揮活性必需的，具有調節(jié)gp96構象的改變，帶電鉸鏈區(qū) 又可以分為E/D-密集序列和多聚賴氨酸重復序列，E/D-密集序列含有1-2個鈣離子結合 位點；中間結構域，含有參與蛋白-蛋白互作用的亮氨酸拉鏈區(qū)和KEKE區(qū)；C端結構域，含 有二聚體區(qū)，還有與內質網上受體結合的KEDL序列。
[0003] 肝硬化是臨床常見的慢性肝病，由一種或多種病因長期或反復作用形成的彌漫性 肝損害。在我國大多數由肝炎轉變肝硬化，少部分為酒精和血吸蟲導致肝硬化。早期肝硬 化肝臟代償功能較強可無明顯癥狀，后期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現(xiàn)，并有多 系統(tǒng)受累，晚期常出現(xiàn)上消化道出血、肝性腦病、繼發(fā)感染、脾功能亢進、腹水、癌變等并發(fā) 癥而死亡。因此，迫切需要找到新的標志物作為早期肝硬化的檢測指標。
[0004]原發(fā)性肝細胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC，簡稱肝癌），在全世界范圍內 發(fā)病率排在第六位，每年全世界的發(fā)病人數是62. 6萬，我國每年死于肝癌約11萬人，占全 世界肝癌死亡人數的45%。相對于高死亡率，早期肝癌的發(fā)現(xiàn)比例卻非常低。近年來，雖然 針對肝癌的治療手段不斷更新（包括手術切除、肝移植術、放射治療、介入治療、微創(chuàng)消融 治療等），但肝癌治療的總體療效并無明顯提高，復發(fā)和轉移仍然是影響肝癌預后的最主要 因素。目前肝硬化、肝癌的檢測主要通過影像學、組織活檢等，血清學檢測的靈敏度和特異 性不高，多數患者一旦確診即為肝硬化或肝癌的晚期，失去了最佳的治療時期。因此，急需 挖掘對肝硬化、肝癌早期篩查的分子標志物和簡便易行的檢測方法。


【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供人熱休克蛋白gp96在制備篩查肝病的產品中的應用。
[0006] 本發(fā)明提供檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質在制備篩查或輔助診斷疾病的產 品或輔助判斷疾病的預后的產品中的應用；
[0007] 所述人熱休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。
[0008]上述應用中，所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質包含人熱休克蛋白gp96和 /或人熱休克蛋白gp96的抗體；
[0009] 所述人熱休克蛋白gp96的抗體具體為人熱休克蛋白gp96的單克隆抗體、人熱休 克蛋白gp96的多克隆抗體或人熱休克蛋白gp96的基因工程抗體。
[0010] 上述任一所述的應用中，所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質還包含通過酶 聯(lián)免疫吸附法測定人熱休克蛋白gp96含量所需的試劑中除人熱休克蛋白gp96和人熱休克 蛋白gp96的抗體之外的試劑和所需的儀器。
[0011] 上述任一所述的應用中，所述酶聯(lián)免疫吸附測定法為ELISA雙抗體夾心法；
[0012] 所述ELISA雙抗體夾心法中人熱休克蛋白gp96的抗體具體為人熱休克蛋白gp96 的單鏈抗體和/或人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體和/或標記的抗所述人熱休克蛋白 gp96的多克隆抗體的二抗；
[0013] 所述標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗具體為酶標記的抗所 述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗；
[0014] 所述酶標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗的酶可以催化底物 顯色；
[0015] 所述人熱休克蛋白gp96的單鏈抗體具體為gp96-scFv_comp抗體，該抗體的序列 如SEQIDNo.1所示，該抗體能特異性結合人熱休克蛋白gp96的N端；
[0016] 所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體具體的商品名稱為山羊多克隆抗體，該抗 體購自SantaCruzBiotech，產品目錄號為SC-1794,該抗體特異性結合于人熱休克蛋白 gp96的C端；
[0017] 所述酶標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗具體的商品名稱為 兔抗山羊二抗-HRP，該二抗購自SantaCruzBiotech，產品目錄號為SC-2922。
[0018] 含有人熱休克蛋白gp96編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌作 為制備人熱休克蛋白gp96所需的生物材料在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷 疾病的預后的產品中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍；
[0019] 所述人熱休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。
[0020] 上述應用中，所述人熱休克蛋白gp96的編碼基因為如下1)-3)任一所示：
[0021] 1)SEQIDNo. 3 所示的DNA分子；
[0022] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼人熱休克蛋白gp96的DNA分 子；
[0023] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼人熱休克蛋白gp96 的DNA分子。
[0024] 含有人熱休克蛋白gp96的抗體的編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或 重組菌或人熱休克蛋白gp96的抗體的免疫原或抗原作為制備人熱休克蛋白gp96的抗體所 需的生物材料在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷疾病的預后的產品中的應用 也屬于本發(fā)明的保護范圍；
[0025] 所述人熱休克蛋白gp96的抗體為人熱休克蛋白gp96的單克隆抗體或人熱休克蛋 白gp96的多克隆抗體或人熱休克蛋白gp96的基因工程抗體；
[0026] 所述人熱休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。
[0027] 上述任一所述的應用中，所述疾病為肝硬化或肝癌。
[0028] -種篩查或輔助診斷疾病或輔助判斷疾病的預后的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護 范圍，該試劑盒包含檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質；
[0029] 所述人熱休克蛋白gp96的氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示。
[0030] 上述試劑盒中，所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質包含人熱休克蛋白gp96 和/或人熱休克蛋白gp96的抗體；
[0031] 所述人熱休克蛋白gp96的抗體為人熱休克蛋白gp96的單克隆抗體或人熱休克蛋 白gp96的多克隆抗體或人熱休克蛋白gp96的基因工程抗體。
[0032] 上述任一所述的試劑盒中，所述疾病為肝硬化或肝癌；
[0033] 所述試劑盒還包含使用說明書，說明書中記載如以下1)和/或2)和/或3)所示 的內容：
[0034] 1)以待測患者的血清為檢測對象，如果待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量 < 70ng/mL，該待測患者候選為非肝硬化患者或非肝癌患者；如果待檢血清中人熱休克蛋 白gp96含量彡220ng/mL并且<800ng/mL,該待測患者候選為肝硬化患者；如果待檢血清中 人熱休克蛋白gp96含量彡500ng/mL,該待測患者候選為肝癌患者；
[0035] 2)以肝硬化患者的血清為檢測對象，待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量<500ng/ mL的肝硬化患者預判斷為5年內肝癌發(fā)病率低于待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量 彡500ng/mL的肝硬化患者5年內肝癌發(fā)病率的肝硬化患者；
[0036] 或，
[0037] 血清中人熱休克蛋白gp96含量<500ng/mL的肝硬化患者的5年內肝癌發(fā)病率低， 血清中人熱休克蛋白gp96含量彡500ng/mL的肝硬化患者的5年內肝癌發(fā)病率高；
[0038] 所述低是指肝癌發(fā)病率彡4. 3 % ;
[0039] 所述高是指肝癌發(fā)病率彡12. 7% ;
[0040] 3)以肝癌患者的血清為檢測對象，待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量<800ng/mL 的肝癌患者預判斷為總生存期長于待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量> 800ng/mL的肝癌 患者的總生存期的肝癌患者；
[0041] 或，
[0042] 血清中人熱休克蛋白gp96含量<800ng/mL的肝癌患者的總生存期為2. 8±0. 7 年，血清中人熱休克蛋白gp96含量彡800ng/mL的肝癌患者的總生存期為1. 2±0. 4年； [0043] 所述總生存期為從隨機化開始至因任何原因引起死亡的時間。
[0044] 上述任一所述的試劑盒中，所述酶聯(lián)免疫吸附測定法為ELISA雙抗體夾心法；
[0045] 所述ELISA雙抗體夾心法中人熱休克蛋白gp96的抗體具體為人熱休克蛋白gp96 的單鏈抗體和/或人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體和/或標記的抗所述人熱休克蛋白 gp96的多克隆抗體的二抗；
[0046] 所述標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗具體為酶標記的抗所 述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗；
[0047] 所述酶標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗的酶可以催化底物 顯色；
[0048] 所述人熱休克蛋白gp96的單鏈抗體具體為gp96-scFv_comp抗體，該抗體的序列 如SEQIDNo. 1所示，該抗體能特異性結合人熱休克蛋白gp96的N端；
[0049] 所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體具體的商品名稱為山羊多克隆抗體，該抗 體購自SantaCruzBiotech，產品目錄號為SC-1794,該抗體特異性結合于人熱休克蛋白 gp96的C端；
[0050] 所述酶標記的抗所述人熱休克蛋白gp96的多克隆抗體的二抗具體的商品名稱為 兔抗山羊二抗-HRP，該二抗購自SantaCruzBiotech，產品目錄號為SC-2922。
[0051] 本發(fā)明證明人熱休克蛋白gp96可以作為一種新的肝硬化、肝癌標志物。本發(fā)明提 供的試劑盒對于肝硬化、肝癌的早期篩查、預防、治療和治療后監(jiān)測具有重大意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0052] 圖1為人熱休克蛋白gp96含量檢測標準曲線。
[0053] 圖2為健康人群、肝硬化和肝癌患者血清中人熱休克蛋白gp96水平的檢測與統(tǒng)計 分析結果。

【具體實施方式】
[0054] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0055] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0056] 下述實施例中的定量實驗，均設置三次重復，結果取平均值。
[0057] 包被液（簡稱CB)按照如下方法制備：將1. 59gNa2C03、2. 93NaHC03、0. 2gNaN3溶 于適量蒸餾水，加蒸餾水定容至1L，再調溶液的pH至9. 6,最后將溶液用0. 22yM的濾膜過 濾。
[0058]PBS緩沖液按照如下方法制備：將 8gNaCl、0. 2gKC1、3. 625gNa2HP04 ? 12H20、 0. 24gKH2P04溶于適量蒸餾水，加蒸餾水定容至1L，再調溶液的pH至7. 3。
[0059]PBST緩沖液按照如下方法制備：將 8gNaCl、0. 2gKC1、3. 625gNa2HP04 ? 12H20、 0. 24gKH2P04溶于適量蒸餾水，加5mL的吐溫-20,再加蒸餾水定容至1L，再調溶液的pH至 7. 3。
[0060] 封閉液按照如下方法制備：將5g牛血清白蛋白（BSA)用PBS緩沖液溶解，再用PBS 緩沖液定容至l〇〇mL。
[0061] 終止液按照如下方法制備：將21. 7ml濃硫酸（98%)加入到蒸餾水中，并用蒸餾 水定容至200mL。
[0062] gp96-scFv_comp抗體按照文獻"桂明明，武慧英，孫I路，等.畢赤酵母表達 gp96-SCFv抗體及生物活性測定[J].生物工程學報，2014, 30 (4) : 595?604. "公開的方法 進行制備，該抗體特異性結合于人熱休克蛋白gp96的N端。
[0063] 山羊多克隆抗體購自SantaCruzBiotech,產品目錄號為SC-1794,該抗體特異性 結合于人熱休克蛋白gp96的C端。
[0064] 兔抗山羊二抗-HRP購自SantaCruzBiotech，產品目錄號為SC-2922。
[0065]TMB購自eBioscience，產品目錄號為 00-4201-56。
[0066] 下述實施例中的健康人血液、肝硬化患者血液、肝癌患者血液或未知血液樣本由 中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院和北京佑安醫(yī)院提供，所有血樣采集均經過血液提供者的知情同 意，并且均簽署知情同意書。
[0067]實施例1、采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)建立人熱休克蛋白gp96含量檢測標準曲 線
[0068] 人熱休克蛋白gp96標準曲線的建立是采用ELISA雙抗體夾心法，具體如下：[0069]一、包被：用包被液稀釋gp96-scFv_comp抗體（其氨基酸序列如SEQIDNo. 1所 示）至其濃度為1Ug/mL,包被于96孔板中，每孔100iiL,于4°C包被過夜。
[0070] 二、洗滌：用PBST緩沖液洗滌3次，每次lmin。
[0071] 三、封閉：每孔加入200iiL封閉液，置于37°C封閉2h。
[0072] 四、洗滌：用PBST緩沖液洗滌3次，每次lmin。
[0073] 五、加樣：將人熱休克蛋白gp96(其氨基酸序列如SEQIDNo. 2所示，編碼基因序 列如SEQIDNo. 3所示）用封閉液稀釋，配制成20000ng/mL的濃度，并用封閉液進行2倍 倍比稀釋，最終濃度為31. 25ng/mL，得到系列梯度稀釋的gp96蛋白溶液，將具有不同濃度 的系列梯度稀釋的gp96蛋白溶液加入96孔板，每孔100iiL，每1個濃度重復3個孔，為實 驗孔。同時設置空白孔（不加gp96蛋白溶液只加100iiL封閉液），于37°C孵育2h。
[0074] 六、洗滌：用PBST緩沖液洗滌5次，每次lmin。
[0075] 七、加檢測抗體：用封閉液稀釋檢測抗體（山羊多克隆抗體）（封閉液與檢測抗體 的體積比為1000:1)得到檢測抗體溶液，每孔加入100UL，置于37°C孵育lh。
[0076] 八、洗滌：用PBST洗滌5次，每次lmin。
[0077] 九、加酶標抗體：用封閉液稀釋辣根過氧化物酶標記的兔抗山羊二抗（兔抗山羊 二抗-HRP)(封閉液與兔抗山羊二抗-HRP的體積比為1000:1)得到二抗溶液，每孔加入lOOuL，置于 37°C孵育lh。
[0078] 十、洗滌：用PBST洗滌7次，每次lmin。
[0079] i^一、加底物液顯色：每孔加入100ULTMB底物液，37°C避光反應10min。
[0080] 十二、終止反應：每孔加入50iiL終止液，室溫反應5min。
[0081] 十三、讀數：將96孔板置于酶標檢測儀上，于450nm處讀取各孔的吸光值。
[0082] 十四、數據分析：計算每一濃度的3個重復孔的吸光值的平均值，再分別減去空白 孔的吸光值，得到實驗孔的0D450。
[0083] 十五、繪制標準曲線：以實驗孔的0D450為橫坐標，人熱休克蛋白gp96的質量為縱 坐標，繪制標準曲線，得到標準曲線公式。
[0084] 人熱休克蛋白gp96含量檢測標準曲線如圖1所示。
[0085] 圖1表明，當人熱休克蛋白gp96溶液的濃度在0?20000ng/mL范圍內，0D450與 人熱休克蛋白gp96質量的線性關系良好，相關系數為0.9991。空白孔0D450在0.05以下， 本方法可以特異的檢測到濃度為Ing/mL的人熱休克蛋白gp96,靈敏度高。
[0086] 實施例2、健康人群、肝硬化和肝癌患者血清中人熱休克蛋白gp96水平的檢測與 統(tǒng)計分析
[0087] 一、健康人群、肝硬化和肝癌患者血清分離
[0088] (1)按照臨床采血方法抽取患者的血液5mL于離心管中，4°C靜置3h。
[0089](2)將離心管于 4°C，2000rpm?3000rpm離心 10min。
[0090] (3)移液器吸取上層淡黃色的血清，將收集的血清于-20°c保存。
[0091] 共臨床收集健康人血清樣本20例，肝硬化患者血清樣本30例，肝癌患者血清樣本 30例。
[0092] 二、采用實施例1的ELISA雙抗體夾心法檢測健康人群、肝硬化和肝癌患者血清樣 本中人熱休克蛋白gp96蛋白含量。其中僅將步驟五中的人熱休克蛋白gp96溶液替換為步 驟一制備的待檢血清樣本，得到樣本的0D450值，將該值帶入實施例1得到的標準曲線公 式，計算得到樣本的人熱休克蛋白gp96的質量，并換算得到樣本的人熱休克蛋白gp96的含 量。
[0093] 健康人群、肝硬化和肝癌患者血清中人熱休克蛋白gp96水平的檢測與統(tǒng)計分析 結果如圖2所示。圖2中，正常代表健康人群的血清；肝硬化代表肝硬化患者的血清；肝癌 代表肝癌患者的血清。
[0094] 圖2表明，分別與健康人群相比，肝硬化患者、肝癌患者血清中人熱休克蛋白gp96 含量顯著升高且具有極顯著性差異（p〈0.01)。
[0095] 通過對大量健康人血清，肝硬化患者血清，肝癌患者血清樣本進行上述人熱休克 蛋白gp96水平的檢測與統(tǒng)計分析，建立如下評判標準：
[0096] 檢測對象的血清中人熱休克蛋白gp96含量< 70ng/mL，該檢測對象候選為非肝硬 化患者或非肝癌患者。
[0097] 檢測對象的血清中人熱休克蛋白gp96含量彡220ng/mL并<800ng/mL，該檢測對象 候選為肝硬化患者。
[0098] 檢測對象的血清中人熱休克蛋白gp96含量> 500ng/mL，該檢測對象候選為肝癌 患者。
[0099] 實施例3、評判標準的準確性分析
[0100] 一、對未知血液樣本進行實施例2的檢測，根據實施例2的評判標準統(tǒng)計得到健康 人的檢測樣本數，肝硬化患者的檢測樣本數，肝癌患者的檢測樣本數。
[0101] 二、根據腫瘤標記物的檢測、超聲顯像、電子計算機斷層掃描CT、磁共振成像、放射 性、肝組織活檢或細胞學檢查等綜合指標對未知血液樣本進行檢測，得到健康人的實際樣 本數，肝硬化患者的實際樣本數，肝癌患者的實際樣本數。
[0102] 三、對檢測結果按金標準確定的二項分類總體，如病例與對照（分別記為D+與 D-)，采用診斷試驗檢測的結果可分別寫成陽性與陰性（記為T+與T-)，資料可列成四格表 形式，如表1所示。表1中有四個可能結果，其中兩個是正確的，即病例（肝硬化或肝癌患 者）被診斷為陽性（真陽性，TP)和對照（健康人）被診斷為陰性（真陰性，TN);兩個是錯 誤的，即病例（肝硬化或肝癌患者）被診斷為陰性（假陰性，F(xiàn)N)和對照（健康人）被診斷 為陽性（假陽性，F(xiàn)P)。
[0103] 表1診斷資料2x2四格表。

【權利要求】
1. 檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷 疾病的預后的產品中的應用。
2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的物質 包含人熱休克蛋白gp96和/或人熱休克蛋白gp96的抗體。
3. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的 物質還包含通過酶聯(lián)免疫吸附法測定人熱休克蛋白gp96含量所需的試劑中除人熱休克蛋 白gp96和人熱休克蛋白gp96的抗體之外的試劑和所需的儀器。
4. 含有人熱休克蛋白gp96編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌作為 制備人熱休克蛋白gp96所需的生物材料在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷疾 病的預后的產品中的應用。
5. 根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述人熱休克蛋白gp96的編碼基因為如 下1)-3)任一所示： 1. SEQ ID No. 3所示的DNA分子； 2) 在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼人熱休克蛋白gp96的DNA分子； 3) 與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼人熱休克蛋白gp96的 DNA分子。
6. 含有人熱休克蛋白gp96的抗體的編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重 組菌或人熱休克蛋白gp96的抗體的免疫原或抗原作為制備人熱休克蛋白gp96的抗體所需 的生物材料在制備篩查或輔助診斷疾病的產品或輔助判斷疾病的預后的產品中的應用。
7. 根據權利要求1-6任一所述的應用，其特征在于：所述疾病為肝硬化或肝癌。
8. -種篩查或輔助診斷疾病或輔助判斷疾病的預后的試劑盒，該試劑盒包含檢測人熱 休克蛋白gp96含量的物質。
9. 根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述檢測人熱休克蛋白gp96含量的物 質包含人熱休克蛋白gp96和/或人熱休克蛋白gp96的抗體。
10. 根據權利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于：所述疾病為肝硬化或肝癌； 所述試劑盒還包含使用說明書，說明書中記載如以下1)和/或2)和/或3)所示的內 容： 1) 以待測患者的血清為檢測對象，如果待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量< 70ng/ mL，該待測患者候選為非肝硬化患者或非肝癌患者；如果待檢血清中人熱休克蛋白gp96含 量彡220ng/mL并且<800ng/mL，該待測患者候選為肝硬化患者；如果待檢血清中人熱休克 蛋白gp96含量彡500ng/mL,該待測患者候選為肝癌患者； 2) 以肝硬化患者的血清為檢測對象，待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量<500ng/mL的 肝硬化患者預判斷為5年內肝癌發(fā)病率低于待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量> 500ng/ mL的肝硬化患者5年內肝癌發(fā)病率的肝硬化患者； 或， 血清中人熱休克蛋白gp96含量<500ng/mL的肝硬化患者的5年內肝癌發(fā)病率低，血清 中人熱休克蛋白gp96含量彡500ng/mL的肝硬化患者的5年內肝癌發(fā)病率高； 3) 以肝癌患者的血清為檢測對象，待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量<800ng/mL的肝 癌患者預判斷為總生存期長于待檢血清中人熱休克蛋白gp96含量> 800ng/mL的肝癌患者 的總生存期的肝癌患者； 或， 血清中人熱休克蛋白gp96含量<800ng/mL的肝癌患者的總生存期為2. 8±0. 7年，血 清中人熱休克蛋白gp96含量彡800ng/mL的肝癌患者的總生存期為1. 2±0. 4年。
【文檔編號】G01N33/68GK104330570SQ201410535528
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年10月11日 優(yōu)先權日:2014年10月11日
【發(fā)明者】孟頌東, 桂明明, 趙報 申請人:中國科學院微生物研究所