同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜法，先將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取，靜置后過(guò)0.45μm有機(jī)相濾膜，得到待測(cè)樣品溶液；同時(shí)配制6種禁限用添加劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再采用高效液相色譜儀分別對(duì)待測(cè)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，然后以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，計(jì)算出煙用香精香料中6種禁限用添加劑的含量。本發(fā)明可以同時(shí)檢測(cè)芝麻酚、香豆素、β-萘酚、β-細(xì)辛醚、黃樟素和二甲苯麝香6種禁限用成分，操作簡(jiǎn)單快捷，獲得了滿意的分離效果和定性檢出限，重現(xiàn)性好。本發(fā)明可滿足煙用香精香料中6種禁限用添加劑快速、準(zhǔn)確的同時(shí)檢測(cè)，為煙用香精香料添加劑監(jiān)督檢驗(yàn)工作提供方法參考。
【專利說(shuō)明】同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色 譜法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及煙用香精香料中6種禁限用添加劑的檢測(cè)方法，具體地指一種同時(shí)測(cè) 定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜法。

【背景技術(shù)】
[0002] 在卷煙中添加香精香料，其作用在于改善卷煙的理化特性、圓潤(rùn)香氣、修飾煙香 味、改善吸味、確立產(chǎn)品的風(fēng)格。煙用香精香料是從帶香物質(zhì)中提取或以人工合成方法得到 并且用于煙草中的致香物質(zhì)的總稱，屬食品添加劑范疇。通常情況下，煙用香精香料是由多 種香料和適量溶劑及其他添加劑按照一定的比例和工藝調(diào)配而成，添加在卷煙中起到改善 卷煙刺激性、掩蓋雜氣、提高卷煙感官品質(zhì)等作用。在添加劑中，由于芝麻酚、香豆素、β_萘 酚、β -細(xì)辛醚、黃樟素和二甲苯麝香均有致癌作用，因此被禁止或限制使用。
[0003] 目前，煙用香精香料中這6種添加劑的檢測(cè)方法以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC/MS) 為主，煙草行業(yè)分別頒布了 β -萘酚、β -細(xì)辛醚的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，均采用GC/MS的方法；李晶等 利用GC-MS的方法測(cè)定了香精香料中芝麻酚；香豆素、黃樟素的檢測(cè)采用GC/MS的方法很 多；廖惠云等均分別使用氘代內(nèi)標(biāo)GC-MS的方法對(duì)香精香料中二甲苯麝香進(jìn)行了檢測(cè)。由 于GC/MS的方法測(cè)定這6種禁限用添加劑所需時(shí)間均較長(zhǎng)，且香豆素等添加劑沸點(diǎn)較高，容 易造成殘留。因此，亟需一種能同時(shí)并快速檢測(cè)煙用香精香料中6種禁限用添加劑的檢測(cè) 方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的就是要克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足，提供一種同時(shí)測(cè)定煙用香精香 料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜法，旨在為煙用香精香料的質(zhì)量安全控制提供參 考。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所提供的同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的 高效液相色譜法：先將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取，靜置后過(guò)〇. 45 μ m有機(jī)相 濾膜，得到待測(cè)樣品溶液；同時(shí)配制6種禁限用添加劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再采用高效液相色譜儀 分別對(duì)待測(cè)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，然后以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，計(jì)算出煙用 香精香料中6種禁限用添加劑的含量；所述6種禁限用添加劑為芝麻酚、香豆素 、β -萘酚、 β -細(xì)辛醚、黃樟素和二甲苯麝香；其中，高效液相色譜儀的檢測(cè)條件：
[0006] 米用色譜柱為 Phenomenex Luna C18 柱，其尺寸為 150_X 4. 6mmi. d.，5 μ m， 1 00人；柱溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm ;
[0007] 采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈；流速為lmL/min ;進(jìn)樣量：20μ L ; 梯度洗脫程序如下，其中下述比例為體積比：
[0008] Omin時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相Β = 60 :40 ;
[0009] 5min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ;
[0010] 12min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ;
[0011] 14min 時(shí)，流動(dòng)相 A :流動(dòng)相 B = 60 :40 ;
[0012] 15min 時(shí)，流動(dòng)相 A :流動(dòng)相 B = 60 :40。
[0013] 本發(fā)明將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取時(shí)，所述萃取溶劑為甲醇、乙醇 和乙腈，振蕩萃取的速率為200r/min，振蕩萃取時(shí)間20?30min ;優(yōu)選地，萃取溶劑為乙醇， 所述煙用香精香料與萃取溶劑的萃取比例為〇. 〇5g/mL，振蕩萃取時(shí)間20min。
[0014] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明可以同時(shí)檢測(cè)煙用香精香料樣品中芝麻酚、香豆 素、β-萘酚、β-細(xì)辛醚、黃樟素和二甲苯麝香6種禁限用成分，操作簡(jiǎn)單快捷，獲得了滿意 的分離效果和定性檢出限，重現(xiàn)性好，回收率在91. 9%?107. 5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)小 于10%。本發(fā)明可滿足煙用香精香料中6種禁限用添加劑快速、準(zhǔn)確的同時(shí)檢測(cè)，為煙用香 精香料添加劑監(jiān)督檢驗(yàn)工作提供方法參考。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖。
[0016] 圖2為樣品溶液的液相色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō) 明，但它們不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限定。
[0018] 實(shí)施例
[0019] 本實(shí)施例所采用的材料、試劑與儀器如下：
[0020] Dionex Ρ680高效液相色譜儀（美國(guó)DI0NEX公司），配DAD檢測(cè)器；AL204電子天 平（感量：〇.〇〇〇lg,瑞士 METTLER TOLEDO 公司）；Milli-Q Advantage A10 超純水儀（美國(guó) Millipore公司）；HY-5A回旋式振蕩器（金壇市城東新瑞儀器廠）。
[0021] 6種添加劑標(biāo)準(zhǔn)品：芝麻酚（純度> 98. 0%，上海詩(shī)丹德生物技術(shù)有限公司）、 β-萘酚（純度彡"·〇%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）、β-細(xì)辛醚（純度彡71.0%， 德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH公司、黃棒素（純度99. 4%，美國(guó)Chem Sevvice公司）:香曰 素（純度99. 4%，美國(guó)Sigma公司）；二甲苯廣香（lmL的lOOng/μ L環(huán)己燒溶液，德國(guó)德國(guó) Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司）。
[0022] 甲醇、乙醇、乙腈（CP，德國(guó)CNW公司），水為超純水。
[0023] 測(cè)定方法如下：
[0024] 先稱取0. 5g煙用香精香料樣品于50mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入10mL乙醇，在振蕩器 上以200r/min速率振蕩萃取20min，靜置后過(guò)0. 45 μ m有機(jī)相濾膜，得到待測(cè)樣品溶液；同 時(shí)配制6種禁限用添加劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再采用高效液相色譜儀分別對(duì)待測(cè)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn) 溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，然后以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，計(jì)算出煙用香精香料中6種禁限用添加 劑的含量；其中，高效液相色譜儀的檢測(cè)條件：
[0025] 米用色譜柱為 Phenomenex Luna C18 柱，其尺寸為 150_X 4. 6mmi. d.，5 μ m， 1 00 A ;柱溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm ;
[0026] 采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈；流速為lmL/min ;進(jìn)樣量：20μ L ; 梯度洗脫程序如下，其中下述比例為體積比：
[0027] Omin時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 60 :40 ;
[0028] 5min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ;
[0029] 12min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ;
[0030] 14min 時(shí)，流動(dòng)相 A :流動(dòng)相 B = 60 :40 ;
[0031] 15min 時(shí)，流動(dòng)相 A :流動(dòng)相 B = 60 :40。
[0032] 采用本發(fā)明的方法檢測(cè)了湖北省煙草產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站接受的委托檢測(cè)樣留 樣，19個(gè)煙用香精香料樣品中均未檢出上述6種添加劑，如圖2所示。說(shuō)明煙草行業(yè)對(duì)禁限 用添加劑有著較為嚴(yán)格控制，芝麻酚、香豆素、β-萘酚、β-細(xì)辛醚、黃樟素和二甲苯麝香 這6種禁限用添加劑在煙草行業(yè)中的使用比較規(guī)范。
[0033] 樣品前處理?xiàng)l件的選擇及優(yōu)化
[0034] 1、萃取溶劑的選擇
[0035] 為選擇合適的萃取溶劑，通過(guò)在同一樣品中加標(biāo)的方法，選擇甲醇、乙醇、乙腈為 萃取溶劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，甲醇、乙醇和乙腈的萃取效率相當(dāng)，考慮到甲醇和乙腈的毒 性較大，本發(fā)明優(yōu)選乙醇為萃取溶劑。
[0036] 2、萃取體積的選擇
[0037] 通過(guò)在同一樣品中加標(biāo)的方法考察萃取體積對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，分別加入4種不同體 積的乙醇（5、10、15、和2〇 1^)進(jìn)行萃取，發(fā)現(xiàn)選擇51^時(shí)，萃取液須離心，操作繁瑣，當(dāng)萃取 體積較大時(shí)信號(hào)值較小，易受基線噪音影響，為兼顧樣品萃取的完全和檢測(cè)的準(zhǔn)確度，本發(fā) 明優(yōu)選萃取劑體積為10mL。
[0038] 3、萃取方式的選擇
[0039] 煙用香精香料中添加劑萃取方式較多，本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)中考察了超聲和振蕩兩種方 式的萃取效果。以乙醇為萃取劑，為選擇合適的萃取方式，選取同一樣品，通過(guò)在樣品中加 標(biāo)的方法進(jìn)行考察。結(jié)果表明，在25°C時(shí)振蕩和超聲萃取效果相當(dāng)，考慮到超聲萃取溫度不 易控制，因此，本發(fā)明選擇振蕩萃取的方式。
[0040] 4、萃取時(shí)間的選擇
[0041] 通過(guò)在樣品中加標(biāo)的方法，在其他條件不變的情況下，本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)中考察了振 蕩時(shí)間分別為1〇、15、20、25和30min時(shí)，對(duì)提取效率的影響。結(jié)果表明，隨著振蕩時(shí)間的增 力口，被檢出的添加劑的濃度逐漸增大，當(dāng)振蕩時(shí)間達(dá)到20min后，繼續(xù)增加時(shí)間提取效率沒(méi) 有明顯變化。因此，本發(fā)明選擇振蕩時(shí)間為20min。
[0042] 色譜條件的優(yōu)化
[0043] 本發(fā)明分別對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm、214nm、254nm、280nm和298nm進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn) 在214nm時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)樣品中的6種添加劑響應(yīng)值較高。本發(fā)明還考察了乙腈-水、甲醇-水、 乙腈-乙酸水溶液等不同體系及比例流動(dòng)相下樣品的分離情況，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相體系選擇乙 腈-水為體系梯度洗脫時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)樣品及實(shí)際樣品中6種添加劑分離效果最佳。在梯度洗脫 條件下，6種添加劑有最佳分離效果，標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖和典型的樣品溶液的色譜圖分別如 圖1、2所示，其中β-細(xì)辛醚由于異構(gòu)體的存在，圖形為雙峰，如圖1所示。
[0044] 工作曲線及檢測(cè)限
[0045] 以乙醇為溶劑，配制6種添加劑濃度分別為0. 1、0. 2、0. 5、1、2、5、10和20μ g/ml 的系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，并分別對(duì)其進(jìn)行HPLC分析。采用外標(biāo)法定量，以各目標(biāo)物的峰面積 (Y)對(duì)其相應(yīng)濃度（X，μ g/ml)進(jìn)行回歸分析，并按3倍信噪比（S/N)和10倍S/N來(lái)確定 各分析物的定性檢出限（LOD)和定量檢出限（LOQ)，得到的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢測(cè) 限，如表1所示。
[0046] 表1 6種添加劑的工作曲線及檢出限
[0047]

【權(quán)利要求】
1. 一種同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜法，其特征在于： 先將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取，靜置后過(guò)〇. 45 y m有機(jī)相濾膜，得到待測(cè)樣 品溶液；同時(shí)配制6種禁限用添加劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再采用高效液相色譜儀分別對(duì)待測(cè)樣品 溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，然后以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，計(jì)算出煙用香精香料中6種 禁限用添加劑的含量；所述6種禁限用添加劑為芝麻酚、香豆素、萘酚、細(xì)辛醚、黃 樟素和二甲苯麝香；其中，高效液相色譜儀的檢測(cè)條件： 采用色譜柱為Phenomenex Luna C18柱，其尺寸為150臟\4.6臟;1.(1.，511111，丨00人；柱 溫為30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm ; 采用梯度洗脫，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈；流速為lmL/min ;進(jìn)樣量：20 y L ;梯度 洗脫程序如下，其中下述比例為體積比： Omin時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 60 :40 ; 5min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ; 12min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 5 :95 ; 14min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 60 :40 ; 15min時(shí)，流動(dòng)相A :流動(dòng)相B = 60 :40。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜 法，其特征在于：將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取時(shí)，所述萃取溶劑為甲醇、乙醇 和乙腈，振蕩萃取的速率為200r/min，振蕩萃取時(shí)間20?30min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定煙用香精香料中6種禁限用添加劑的高效液相色譜 法，其特征在于：將煙用香精香料用萃取溶劑進(jìn)行振蕩萃取時(shí)，所述萃取溶劑為乙醇，所述 煙用香精香料與萃取溶劑的萃取比例為〇. 〇5g/mL，振蕩萃取的速率為200r/min，振蕩萃取 時(shí)間20min。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104280505SQ201410591724
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月29日
【發(fā)明者】李韻, 汪宏毅, 廖曉玲, 肖少紅, 王康 申請(qǐng)人:中國(guó)煙草總公司湖北省公司