基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的sers基底制備方法
【專利摘要】一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，通過滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長單鏈變成伸展雙鏈的過程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號放大、核殼納米結(jié)構(gòu)自身以及通過DNA雜交實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號疊加，實(shí)現(xiàn)信號高效相對均一的SERS基底制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測、生物傳感器領(lǐng)域。該技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號放大、實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號疊加，實(shí)現(xiàn)信號高效相對均一的SERS基底制備。
【專利說明】基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于DNA納米技術(shù)及納米材料的功能化及應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)及核殼納米金結(jié)構(gòu)的高效SERS基底的制備方法，可應(yīng)用于生物分子檢測、生物傳感器等領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]表面增強(qiáng)拉曼散射(SurfaceEnhanced Raman scattering, SERS)是指位于粗糖金屬表面的小分子本身的拉曼信號得到增強(qiáng)的現(xiàn)象。這種現(xiàn)象已在表面科學(xué)、分析科學(xué)和生物科學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，為深入表征各種表面(界面)的結(jié)構(gòu)和過程提供分子水平上的信息，如鑒別分子或離子在表面的鍵合、構(gòu)型和取向以及材料的表面結(jié)構(gòu)。關(guān)于SERS的增強(qiáng)機(jī)制，雖然到目前仍存在爭議，但較為認(rèn)可的是電磁場增強(qiáng)機(jī)理，而該機(jī)理中涉及到的“熱點(diǎn)”(hot spot)—般是指在一些納米粒子組成的聚集體中，相鄰的納米粒子之間的空隙之處的區(qū)域。此區(qū)域的SERS效應(yīng)最強(qiáng)。如何能構(gòu)建高效均一含有更多的“熱點(diǎn)”的SERS基底，已成為SERS研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
[0003]現(xiàn)在的研究中，構(gòu)建高效均一基底的常見方法有如下幾種:
a:金屬電極活性基底，這是目前使用較為廣泛的一種基底。通過電極表面進(jìn)行適當(dāng)?shù)拇植诨幚?，可以產(chǎn)生粗糙度基本處于宏觀粗糙度與亞微觀粗糙度范圍內(nèi)。這種方式的缺點(diǎn)是多數(shù)金屬經(jīng)過處理后，表面粗糙尺度變化范圍較大，造成基底上個(gè)點(diǎn)表面增強(qiáng)效應(yīng)變化很大，這種結(jié)構(gòu)上的不均一性直接影響了吸附分子的SERS光譜的穩(wěn)定性及數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。
[0004]b:化學(xué)刻蝕和化學(xué)沉積的活性基底，是通過強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)把金屬表面的原子通過化學(xué)反應(yīng)溶解掉來達(dá)到表面粗糙化的目的。這種方式的缺點(diǎn)是反應(yīng)條件較難控制、沉積的時(shí)間、反應(yīng)的溫度、試劑的濃度等都對基底的粗糙度有影響。
[0005]另外還有平板印刷技術(shù)、自助裝技術(shù)、有序組裝技術(shù)等來制備活性基底，但都存在各自的缺點(diǎn)從而限制了 SERS技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)及核殼納米金結(jié)構(gòu)的高效SERS基底的制備方法。
[0007]—種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，通過滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長單鏈變成伸展雙鏈的過程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，通過納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號，實(shí)現(xiàn)高效SERS基底的制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測、生物傳感器領(lǐng)域；
所述的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)為單引物的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)以及多引物的超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)。
[0008]所述的小段引物為長度在10_40bp的一段無標(biāo)記人工合成單鏈DNA。
[0009]所述的核殼納米金結(jié)構(gòu)為尺寸介于30_50nm的納米金核殼結(jié)構(gòu)，核殼中間存在l_3nm縫隙，且縫隙里吸附有拉曼小分子，如DTNB (5D0,全稱是5，5’-dith1bis (2-nitrobenzoic acid),中文名:5, 5’-二硫雙(2-硝基苯甲酸))，Cy3(cyanine-3), Cy5 (cyanine-5)，F(xiàn)ITC (fluorescein isoth1cyannate)，批P定。
[0010]所述的互補(bǔ)單鏈為序列上與擴(kuò)增所用的環(huán)模板相同或部分相同的一段經(jīng)過巰基或生物素標(biāo)記的一段DNA序列。
[0011]所述的彎曲易折的長單鏈為滾環(huán)擴(kuò)增后所得的數(shù)量可達(dá)幾十kbp，長度可達(dá)數(shù)微米的單鏈DNA。
[0012]所述的伸展雙鏈為擴(kuò)增產(chǎn)物長單鏈與互補(bǔ)鏈雜交后，單鏈本身的二級結(jié)構(gòu)等打開，形成的均一雙鏈或是間斷性均一雙鏈。
[0013]所述的等距離地嵌入到雙鏈為納米金通過組裝巰基的互補(bǔ)鏈或組裝有親和素的納米金與生物素標(biāo)記的互補(bǔ)鏈連接，實(shí)現(xiàn)嵌入。
[0014]所述的納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號為核殼納米金自身拉曼信號以及核殼結(jié)構(gòu)之間形成的拉曼信號的疊加。
[0015]利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號放大、核殼納米結(jié)構(gòu)自身以及通過DNA雜交實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號疊加，實(shí)現(xiàn)信號高效相對均一的SERS基底制備。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]附圖1為經(jīng)過滾環(huán)擴(kuò)增之后，得到長單鏈DNA與互補(bǔ)序列充分雜交后所得的雙鏈結(jié)構(gòu)的AFM成像，圖中雙鏈結(jié)構(gòu)較為均一，伸展性良好。圖片掃描尺寸為10 μ m。

【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)施例1:
5 μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ M待測核酸序列加入到0.5mL離心管中。C混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液，為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0018]8μ L milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA模板(6μ L)，dNTPs (2 μ L, 10 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0019]3μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L )預(yù)成環(huán) DNA (100 μ Μ, 3 μ L), ΤΑΕ 緩沖液(125mM Mg2+，2yL)總體積為20yL混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C (每20s降低0.2°C)，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。雜交溶液2 ix L加入18 μ L milliQ 7欠，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode 成像。
[0020]實(shí)施例2:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(lOOOOrpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0021]8μ L milliQ加入以下溶液:環(huán)狀DNA模板(6μ L)，b1-dNTPs (2 μ L, 1 mM),RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0022]3μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L )預(yù)成環(huán) DNA (100 μ Μ, 3 μ L), ΤΑΕ 緩沖液(125mM Mg2+，2yL)總體積為20yL混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C (每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0023]2uL lOmM avidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L mi 11 iQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mi 11 i_Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0024]實(shí)施例3:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0025]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0026]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0027]2uL 10mM avidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L mi 11 iQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mi 11 i_Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0028]實(shí)施例4:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0029]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0030]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0031]lmL 5nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200yL BSA (10%)溶液，封閉30min后，超濾管過濾，回收100 μ LAu-streptavidin 產(chǎn)物。
[0032]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0033]實(shí)施例5
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0034]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0035]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0036]lmL 5nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200yL BSA (10%)溶液，封閉30min后，超濾管過濾，回收100 μ LAu-streptavidin 產(chǎn)物。
[0037]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0038]實(shí)施例6:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0039]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0040]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0041]lmL 15nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接 lh，加入 200yL BSA (10%)溶液，封閉 30min后，離心洗滌 3 次(12500rpm/min, 20min)回收 100 μ L Au-streptavidin 產(chǎn)物。
[0042]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0043]實(shí)施例7: 5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ M待測核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0044]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0045]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0046]10(^1^，1011]\1粒徑為1511111的納米金中加入4 4 1^，10(^]\1 SH-polyA (15 個(gè) A 序列)DNA，室溫輕微振蕩過夜；后加入老化液0.1M PB (pH7.4)溶液10 μ L，室溫條件350rpm/min振蕩30min，后加入2M NaCl 20 μ L，分四次加入，間隔為30min，室溫下350rpm/min振蕩過夜；4°C，12000rpm/min，20min條件下進(jìn)行離心洗滌三次，洗滌液為lOmMPB，后lmL0.1M PBS重懸??；100 μ L 0.1Μ 5D0小分子溶液加入到500 μ L上述溶液中，室溫下350rpm/min振蕩，吸附 2-3 天。取 100 μ L 上述溶液然后加入 50 μ L1%PVP, 25 μ L lOmM NH20H *HC1,25 μ L5mM HAuC14，混勻振蕩lmin后20°C 4000rpm/min,每次6min離心洗漆三次，洗漆液為MilliQ水，后100μ LMilliQ水重懸??；該方式制備得到的粒徑在35nm左右，濃度為InM，具備高增強(qiáng)特征峰的一種核殼納米金結(jié)構(gòu)。
[0047]lmL核殼納米金結(jié)構(gòu)中，加入20 μ L lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200 μ L BSA (10%)溶液，封閉30min后，離心洗滌3次(8000rpm/min，20min)回收 100 μ L 核殼 Au-streptavidin 產(chǎn)物。10 μ L 核殼 Au-streptavidin 加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。取10 μ L滴到錫箔上，進(jìn)行ΤΕΜ成像。取10 μ L滴到硅片上，進(jìn)行SERS信號檢測。
【權(quán)利要求】
1.一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，通過滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長單鏈變成伸展雙鏈的過程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，通過納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號，實(shí)現(xiàn)高效SERS基底的制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測、生物傳感器領(lǐng)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)為單引物的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)以及多引物的超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的小段引物為長度在10-40bp的一段無標(biāo)記人工合成單鏈DNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的核殼納米金結(jié)構(gòu)為尺寸介于30-50nm的納米金核殼結(jié)構(gòu)，核殼中間存在l_3nm縫隙，且縫隙里吸附有拉曼小分子，如DTNB (MO，全稱是5，5’-dith1bis (2-nitrobenzoic acid),中文名:5, 5’-二硫雙(2-硝基苯甲酸))，Cy3(cyanine-3), Cy5 (cyanine-5)，F(xiàn)ITC (fluorescein isoth1cyannate)，批P定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的互補(bǔ)單鏈為序列上與擴(kuò)增所用的環(huán)模板相同或部分相同的一段經(jīng)過巰基或生物素標(biāo)記的一段DNA序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的彎曲易折的長單鏈為滾環(huán)擴(kuò)增后所得的數(shù)量可達(dá)幾十kbp，長度可達(dá)數(shù)微米的單鏈DNA。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述、基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的伸展雙鏈為擴(kuò)增產(chǎn)物長單鏈與互補(bǔ)鏈雜交后，單鏈本身的二級結(jié)構(gòu)等打開，形成的均一雙鏈或是間斷性均一雙鏈。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的等距離地嵌入到雙鏈為納米金通過組裝巰基的互補(bǔ)鏈或組裝有親和素的納米金與生物素標(biāo)記的互補(bǔ)鏈連接，實(shí)現(xiàn)嵌入。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號為核殼納米金自身拉曼信號以及核殼結(jié)構(gòu)之間形成的拉曼信號的疊加。
【文檔編號】G01N21/65GK104406952SQ201410661203
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】何丹農(nóng), 顏娟, 胡沖婭 申請人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司