一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，采用的技術(shù)方案是：1)蛋白棒模型體系的制備；2)樣品熒光染色；3)利用激光共聚焦掃描顯微鏡進(jìn)行樣品熒光漂白恢復(fù)測(cè)定。本發(fā)明具有可在線監(jiān)測(cè)乳蛋白棒在貯藏過(guò)程中質(zhì)地發(fā)生變化的程度，進(jìn)而可預(yù)測(cè)蛋白棒等高蛋白產(chǎn)品的品質(zhì)以及貨架期，最終從分子水平揭示蛋白棒在貯藏初期質(zhì)地發(fā)生硬化的內(nèi)在機(jī)理原因。
【專利說(shuō)明】一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，特別是利用熒光漂白恢 復(fù)技術(shù)監(jiān)測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白棒以其蛋白質(zhì)含量高和營(yíng)養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn)，受到軍人、運(yùn)動(dòng)員等特殊人群以及 越來(lái)越多大眾的青睞。但是，目前市場(chǎng)上影響蛋白棒等產(chǎn)品發(fā)展的一個(gè)重要瓶頸原因是蛋 白棒在貯藏過(guò)程中發(fā)生質(zhì)地硬化的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了蛋白棒的貯藏穩(wěn)定性和食用品質(zhì)，限 制了蛋白棒等產(chǎn)品的發(fā)展。而針對(duì)蛋白棒在貯藏過(guò)程中質(zhì)地發(fā)生硬化的內(nèi)在機(jī)理原因尚存 在爭(zhēng)議。
[0003] 熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（FRAP)是通過(guò)采用激光共聚焦掃描顯微鏡的高強(qiáng)度脈沖式激 光照射生物體（例如：細(xì)胞）的某一區(qū)域，使得該區(qū)域的熒光分子淬滅。再利用低強(qiáng)度的激 光掃描，來(lái)檢測(cè)該區(qū)域周?chē)谴銣鐭晒夥肿酉驘晒馄讌^(qū)域的擴(kuò)散過(guò)程。
[0004] 在本發(fā)明中，通過(guò)借助熒光漂白恢復(fù)技術(shù)對(duì)蛋白棒模擬體系進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)， 從分子水平更直觀準(zhǔn)確的來(lái)觀測(cè)蛋白質(zhì)分子的遷移過(guò)程（包括遷移路徑、擴(kuò)散速度等信 息），進(jìn)而揭示造成蛋白棒尤其是在貯藏初期產(chǎn)品質(zhì)地發(fā)生硬化的內(nèi)在機(jī)理原因。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)目前市售蛋白棒等產(chǎn)品在貯藏過(guò)程中發(fā)生質(zhì)地硬化及其硬化機(jī)理尚不明確 等問(wèn)題，本 申請(qǐng)人:經(jīng)過(guò)研究，通過(guò)利用熒光漂白恢復(fù)技術(shù)，提供一種直觀監(jiān)測(cè)蛋白棒在貯藏 過(guò)程中穩(wěn)定性發(fā)生變化的方法，為今后解決有關(guān)蛋白棒質(zhì)地硬化以及預(yù)測(cè)產(chǎn)品貨架期等問(wèn) 題提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，其特征在于步驟如下：
[0008] (1)蛋白棒模型體系的制備。蛋白棒模型體系的配方如表1所示：
[0009] 表1蛋白棒模型體系制備配方
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，其特征是將熒光染色的蛋白棒模型體 系采用熒光漂白恢復(fù)技術(shù)測(cè)定其分子遷移情況。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，其特征是樣品熒 光染色具體工藝為：配制〇. 1?〇. 4mg/mL的異硫氰酸熒光素（FITC) /丙酮染色液，將4? 8 U g該染色液滴加于0. 5?1. 0g的樣品中并進(jìn)行混合；混合均勻后，將其中0. 3g樣品轉(zhuǎn) 移至玻底培養(yǎng)皿中，蓋上蓋玻片，并用AB膠封邊；最后，將染色好的樣品置于25°C恒溫培養(yǎng) 箱中并避光儲(chǔ)存；此后，分別于第l、3、7d進(jìn)行取樣測(cè)定。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種直觀檢測(cè)蛋白棒貯藏穩(wěn)定性變化的方法，其特征是熒光 漂白恢復(fù)技術(shù)具體操作為：將染色好的待測(cè)樣品置于激光掃描顯微鏡的載物臺(tái)上，并設(shè)定 樣品激發(fā)波長(zhǎng)為485?495nm，發(fā)射波長(zhǎng)為500?530nm，在1?20倍目鏡下進(jìn)行樣品觀 測(cè)；在觀察區(qū)域內(nèi)選擇邊長(zhǎng)為20?50 y m的正方形區(qū)域作為漂白范圍；設(shè)定熒光漂白強(qiáng)度 100%，漂白程度為80%?100% ;之后，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)漂白區(qū)域FITC-蛋白體系的熒光恢復(fù)情 況，每隔一段時(shí)間進(jìn)行圖像采集記錄熒光恢復(fù)情況。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104406946SQ201410677500
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】周鵬, 李娟 , 賈曉戈, 陸乃彥, 張軒 申請(qǐng)人:江南大學(xué)