中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明實(shí)施例公開了中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法，包括以下步驟：(1)建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)采集供試品溶液的超高效液相色譜圖；(3)測(cè)定供試品中乳酸的含量；其中，所述預(yù)設(shè)的色譜條件包括：色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的固定相；流動(dòng)相：0.01％～1％甲酸水溶液-乙腈，優(yōu)選0.05％～0.5％甲酸水溶液-乙腈，更優(yōu)選0.1％甲酸水溶液-乙腈；和采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，采用特定的色譜條件以及采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，本發(fā)明的方法具有簡(jiǎn)單快速、專屬性強(qiáng)、精密度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。另外，通過(guò)測(cè)定神曲發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的含量可以容易地控制神曲的質(zhì)量，從而保證中藥神曲臨床療效和安全性。
【專利說(shuō)明】中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑領(lǐng)域，特別涉及中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 神曲又名六曲、六神曲，始載于《藥性論》，由面粉、苦杏仁、赤小豆、青蒿、蒼耳、辣 寥按一定比例混勻、發(fā)酵而成。神曲性溫，味甘、辛；歸脾、胃、大腸經(jīng)；具有健脾消食，理氣 化濕的功效，主要用于治療脾胃虛弱、飲食停滯、胸痞腹脹、嘔吐瀉痢、小兒食積等。
[0003] 《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?中藥成方制劑》第十九冊(cè)收載本品，標(biāo)準(zhǔn)中未 收載神曲的鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)，僅收錄檢查項(xiàng)（曲劑項(xiàng)下水分和重量差異項(xiàng)），難以科學(xué)評(píng) 價(jià)和控制產(chǎn)品的質(zhì)量。而藥品的質(zhì)量是保證其臨床療效和安全性的基本前提。因此，亟需 建立一種中藥神曲的質(zhì)量控制方法。
[0004] 神曲作為一味傳統(tǒng)曲劑，是由面粉和多味中藥混合后自然發(fā)酵而成，含有酵母菌 和乳酸桿菌等微生物，可產(chǎn)生大量的乳酸。因此，可通過(guò)測(cè)定神曲發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的含量控制 神曲的質(zhì)量。然而，乳酸缺少共軛/熒光基團(tuán)，無(wú)法采用常規(guī)檢測(cè)器（紫外/熒光檢測(cè)器） 檢測(cè)、分析。
[0005] 因此，如何能建立一種有效測(cè)定神曲中乳酸含量的方法，就顯得尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明公開了一種中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法。技術(shù)方案 如下：
[0007] 中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法，可以包括以下步驟：
[0008] (1)建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0009] 將乳酸鈉對(duì)照品與體積分?jǐn)?shù)為0?100%的甲醇水溶液混合，制成具有已知濃度 的對(duì)照品儲(chǔ)備液；
[0010] 用體積分?jǐn)?shù)為〇?100%的甲醇水溶液將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋成一系列具有不同已 知濃度的對(duì)照品溶液；
[0011] 在相同的預(yù)設(shè)色譜條件下，將體積'的各濃度的對(duì)照品溶液分別注入超高效液相 色譜儀中，獲得各濃度乳酸鈉對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖；
[0012] 以對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖中乳酸色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)或橫 坐標(biāo)，將對(duì)照品溶液的乳酸鈉濃度換算為乳酸的濃度后，相應(yīng)地以乳酸濃度的對(duì)數(shù)值為橫 坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0013] (2)采集供試品溶液的超高效液相色譜圖
[0014] 將質(zhì)量M的神曲粉末，與體積V2的體積分?jǐn)?shù)為0?100%的甲醇水溶液混合后超 聲提取，離心、過(guò)濾后得到供試品溶液；
[0015] 在與以上（1)步驟中相同的預(yù)設(shè)色譜條件下，取體積 ' 供試品溶液注入超高效液 相色譜儀中，獲得供試品溶液的超高效液相色譜圖；
[0016] (3)確定供試品中乳酸含量
[0017] 供試品溶液超高效液相色譜圖中乳酸對(duì)應(yīng)的色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值，采用已建立 的乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出乳酸的濃度對(duì)數(shù)值lgC，并由乳酸的濃度對(duì)數(shù)值lgC計(jì)算出供試品 溶液中乳酸的濃度C#并按照下列公式計(jì)算出供試品中乳酸含量；
[0018]乳酸％=C供*V2/M*100%
[0019] 其中，所述預(yù)設(shè)的色譜條件包括：
[0020] 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的固定相；
[0021] 流動(dòng)相：0. 01%?1%的甲酸水溶液-乙腈，優(yōu)選0.05%?0.5%的甲酸水溶 液-乙腈，更優(yōu)選0.1 %的甲酸水溶液-乙腈；和采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。
[0022] 其中，預(yù)設(shè)的色譜條件還包括：流動(dòng)相的流速：0. 5?2.OmL/min;柱溫：30? 40°C;進(jìn)樣量：2?10iiL;漂移管溫度35?70°C，氣體壓力20?40psi。
[0023] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述對(duì)照品溶液的濃度為40?2000iig/mL，并 且各對(duì)照品溶液的濃度值滿足等差數(shù)列或者等比數(shù)列，優(yōu)選地采用二倍稀釋法將對(duì)照品儲(chǔ) 備液稀釋成一系列具有不同已知濃度的對(duì)照品溶液。
[0024] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，乳酸鈉對(duì)照品和神曲粉末是精密稱定的；體積 '的對(duì)照品溶液和供試品溶液是精密吸取的。
[0025] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，神曲粉末的質(zhì)量M與甲醇水溶液的體積V2的比 值為0. 01?0.lg/mL，超聲提取。
[0026] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述超聲提取的時(shí)間為10?30分鐘。
[0027] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述離心分離具體為：在14000轉(zhuǎn)/分鐘的條件 下離心8?12分鐘。
[0028] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述過(guò)濾具體為：采用0.2?0.3 微孔濾膜 過(guò)濾。
[0029] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，在步驟（1)和（2)中所采用的甲醇水溶液的體 積濃度為1 %?80%，優(yōu)選為5%?60%，更優(yōu)選為6%?40%，最優(yōu)選為8%?20%。
[0030] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，在步驟（2)中，在將神曲粉末與甲醇水溶液混 合后，超聲提取，然后將提取液進(jìn)行離心，取上清液過(guò)濾，得到供試品溶液。
[0031] 本發(fā)明采用超高效液相色譜法一蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定中藥神曲中乳酸的含量。 本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，采用特定的色譜條件以及采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，本發(fā)明的方法具 有簡(jiǎn)單快速、專屬性強(qiáng)、精密度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。另外，通過(guò)測(cè)定神曲發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的含 量可以容易地控制神曲的質(zhì)量，從而保證中藥神曲臨床療效和安全性。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0032] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0033]圖1為對(duì)照品溶液色譜圖；
[0034]圖2為供試品溶液色譜圖；
[0035] 圖3為不同來(lái)源炒神曲、焦神曲供試品溶液色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0036] 本發(fā)明采用超高效液相色譜法一蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定中藥神曲中乳酸的含量。 在本發(fā)明的技術(shù)方案中，采用乳酸鈉作為對(duì)照品?？梢岳斫獾氖牵景l(fā)明的色譜條件中，由 于流動(dòng)相為甲酸水溶液-乙腈，因此該流動(dòng)相呈酸性，所以乳酸鈉在酸性的色譜條件中會(huì) 轉(zhuǎn)化為乳酸。也就是說(shuō)，在將對(duì)照品溶液注入超高效液相色譜儀中后，對(duì)照品溶液中的乳 酸鈉都會(huì)先轉(zhuǎn)化為乳酸。因此，得到的對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖中出現(xiàn)的是乳酸的 色譜峰，而不是乳酸鈉的色譜峰。同樣地，在將神曲的樣品溶液注入到超高效液相色譜儀 中時(shí)，樣品中所含有的乳酸鈉也會(huì)轉(zhuǎn)化為乳酸。因此，本發(fā)明測(cè)定樣品中的有效乳酸的含量 (即，即使神曲中包含了部分的乳酸鈉，本發(fā)明的方法也能夠?qū)⑵滢D(zhuǎn)化為乳酸，并將其計(jì)入 最終的檢測(cè)結(jié)果中，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性），來(lái)方便、簡(jiǎn)單地評(píng)價(jià)神曲樣品的品質(zhì)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn) 質(zhì)量控制。
[0037] 在進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)試時(shí)，色譜條件如下：色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合 硅膠的固定相；流動(dòng)相：〇. 01%?1%的甲酸水溶液-乙腈，優(yōu)選0.05%?0.5%的甲酸水 溶液-乙腈，更優(yōu)選0. 1 %的甲酸水溶液_乙腈；和采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。發(fā)明人意 外地發(fā)現(xiàn)采用如上色譜條件能夠非常簡(jiǎn)單、方便、準(zhǔn)確地測(cè)定神曲中乳酸的含量，并且在該 色譜條件下，乳酸檢測(cè)的重現(xiàn)性非常高，這確保了本發(fā)明的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定各種神曲 樣品中乳酸的含量。對(duì)于其他更為具體的色譜條件，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要 進(jìn)行確定，例如，流動(dòng)相的流速可以為〇. 5?2.OmL/min;柱溫可以為30?40°C;進(jìn)樣量可 以為2?10iiL;漂移管溫度可以為35?70°C，氣體壓力可以為20?40psi。
[0038] 發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，意外的發(fā)現(xiàn)，對(duì)照品溶液的濃度為40?2000yg/mL，且 各對(duì)照品溶液的濃度值滿足等差數(shù)列或者等比數(shù)列時(shí)，尤其是采用二倍稀釋法將對(duì)照品儲(chǔ) 備液稀釋成一系列具有不同已知濃度的對(duì)照品溶液時(shí)，以對(duì)照品色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值 (IgA)和濃度的對(duì)數(shù)值（lgC)進(jìn)行線性回歸所得到的回歸方程的線性關(guān)系更好，所說(shuō)的二 倍稀釋法是指1體積對(duì)照品溶液用1體積的溶劑稀釋，使得對(duì)照品溶液濃度減半的方法。
[0039] 在制備供試品溶液時(shí)，發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)神曲粉末的質(zhì)量M與甲醇水溶液的 體積V2的比值為0. 01?0.lg/mL時(shí)，能夠確保神曲粉末中所有的乳酸和可能存在的乳酸 鈉都能夠充分溶解在甲醇水溶液中，并且所制備的供試品溶液在進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)試 時(shí)，在所獲得的超高效液相色譜圖中，乳酸的色譜峰與其它物質(zhì)的色譜峰的分離度更好。
[0040] 儀器與試藥
[0041]WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色譜儀（美國(guó)，Waters公司），配有四 元溶劑梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；SCIENTZ25-12超聲清洗儀（中國(guó)， 寧波新芝生物技術(shù)股份有限公司）；METTLERTOLEDOAL204(瑞士，METTLERTOLEDO公司）； Milli-Q純水系統(tǒng)（美國(guó)，Millipore公司）。
[0042] 乳酸鈉購(gòu)自SigmaAldrich(美國(guó)，Sigma公司），甲酸購(gòu)自MREDA(美國(guó)，MREDA公 司）；甲醇、乙腈購(gòu)自SigmaAldrich(美國(guó)，Sigma公司）；實(shí)驗(yàn)用樣品為市售不同產(chǎn)家/ 不同藥房的神曲，其中炒神曲分別購(gòu)自北京同仁堂藥店（TRT-CSQ)，天津醫(yī)藥集團(tuán)敬一堂連 鎖股份有限公司（JYT-CSQ)，華一堂藥店（HYT-CSQ)，南樓大藥店（NL-CSQ)，天津市華豐大 藥房（HF-CSQ);焦神曲分別購(gòu)自北京同仁堂藥店（TRT-JSQ)，天津醫(yī)藥集團(tuán)敬一堂連鎖股 份有限公司（JYT-JSQ)，華一堂藥店（HYT-JSQ)，南樓大藥店（NL-JSQ)，天津市華豐大藥房 (HF-JSQ)。
[0043] 本發(fā)明中所提及的術(shù)語(yǔ)"精密稱定":精密稱定系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的 千分之一。"精密吸取":系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該計(jì)量器具的精確度 要求。
[0044] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0045] 實(shí)施例1
[0046] 確定色譜條件
[0047] 色譜柱：AgilentSB-C18(4.6X100mm, 1.8iim);流動(dòng)相：0? 1% 甲酸水溶液-乙腈 (98:2)等度洗脫3min;流速：0. 5mL/min;柱溫30°C;進(jìn)樣量：2iiL;采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 檢測(cè)，漂移管溫度：40°C，氣體壓力：20psi，增益：100。
[0048] 對(duì)照品溶液制備
[0049]精密稱取乳酸鈉40. 16mg(折算成乳酸為32. 27mg)，置于10mL容量瓶中，加入體積 濃度10%甲醇水溶液定容至刻度，制成每lmL溶液中含3. 227mg乳酸的對(duì)照品儲(chǔ)備液。
[0050] 采用二倍稀釋法，用體積分?jǐn)?shù)為10%甲醇水溶液將對(duì)照品儲(chǔ)備液分別稀釋成 濃度分另IJ為 1613.6iig/mL、806.8iig/mL、403.4iig/mL、201.7iig/mL、100.8iig/mL及 50. 42yg/mL的對(duì)照品溶液。
[0051] 上述的對(duì)照品溶液的制備雖然具體說(shuō)明了乳酸鈉的量、甲醇水溶液的量及其體積 分?jǐn)?shù)，但需要說(shuō)明的是，上述的對(duì)照品溶液的制備過(guò)程只是代表一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，不應(yīng)構(gòu) 成對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的限制。在實(shí)際對(duì)照品溶液的制備中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際 情況來(lái)選擇乳酸鈉的量、甲醇水溶液的量，例如選擇10?l〇〇mg的乳酸鈉，在5?25mL容量 瓶中定容。甲醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)可以是〇?100%，這是合理的，可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù) 方案，但是，在實(shí)際供試品溶液的制備中，所采用的甲醇水溶液的體積濃度為1%?80%， 優(yōu)選為5%?60%，更優(yōu)選為6%?40%，最優(yōu)選為8%?20%。
[0052] 建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0053] 在確定的相同色譜條件下，精密吸取各濃度的對(duì)照品溶液2yL分別注入超高效 液相色譜儀中，獲得各對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖；
[0054] 需要說(shuō)明的是，精密吸取的對(duì)照品溶液的體積 ' 具體值可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根 據(jù)超高效液相色譜儀的要求及實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，本發(fā)明在此不作具體限定。
[0055] 記錄各濃度對(duì)照品溶液超高效液相色譜圖中乳酸的峰面積，以峰面積的對(duì) 數(shù)值（IgA)和對(duì)照品溶液的濃度的對(duì)數(shù)值（lgC)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為IgA= 1. 5424 (lgC) +0. 6666,相關(guān)系數(shù)r= 0. 9997,表明該方法在此線性范圍內(nèi)具有良好的線性 關(guān)系。對(duì)照品超高效液相色譜圖如圖1所示。
[0056] 供試品溶液的制備
[0057] 取神曲粉末〇1^-050)0.4§，精密稱定，置于501^錐形瓶中，加入101^10%甲醇 水溶液，超聲提取l〇min，14000rpm離心lOmin，取上清液0. 22ym濾膜過(guò)濾，即得；
[0058] 上述的供試品溶液的制備雖然具體說(shuō)明了神曲粉末質(zhì)量M、甲醇水溶液的體積V2 及其提取溶劑的體積分?jǐn)?shù)，以及超聲提取的參數(shù)等，但需要說(shuō)明的是，上述的供試品溶液的 制備只是代表一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，不應(yīng)構(gòu)成對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的限制。在實(shí)際供試品溶液 的制備中，甲醇水溶液的體積v2只要能夠滿足可以充分溶解質(zhì)量M的神曲粉末中的乳酸即 可，例如可以選擇0. 2?0. 6g的神曲粉末，5?50mL的甲醇水溶液。甲醇水溶液的體積分 數(shù)可以是〇?100%，這是合理的，可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案，但是，在實(shí)際供試品溶液的 制備中，所采用的甲醇水溶液的體積濃度可以為1 %?80 %，優(yōu)選為5 %?60 %，更優(yōu)選為 6%?40%，最優(yōu)選為8%?20%。而超聲提取的時(shí)間可以為10?30分鐘。
[0059] 在確定的色譜條件下，精密吸取供試品溶液2yL注入超高效液相色譜儀中，獲得 供試品溶液的超高效液相色譜圖；供試品溶液色譜圖如圖2所示。
[0060]供試品溶液超高效液相色譜圖中乳酸對(duì)應(yīng)的色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值（IgA)，采用 已建立的乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出乳酸濃度的對(duì)數(shù)值lgC，并由乳酸的濃度對(duì)數(shù)值lgC計(jì)算出 供試品溶液中乳酸的濃度C#并根據(jù)下列公式計(jì)算出供試品中乳酸的含量：
[0061]乳酸％=C供*V2/M*100%
[0062] 精密度試驗(yàn)
[0063] 取神曲粉末（TRT-CSQ) 0. 4g，精密稱定，按實(shí)施例1的方法制備供試品溶液，并在 實(shí)施例1的色譜條件下測(cè)定，連續(xù)測(cè)試6次作為日內(nèi)精密度，連續(xù)測(cè)試三天作為日間精密 度，神曲中乳酸的日內(nèi)和日間精密度的RSD分別為2. 63 %和2. 56%，表明該方法精密度良 好，結(jié)果見表1。
[0064] 重復(fù)性試驗(yàn)
[0065]取神曲粉末0. 4g(TRT-CSQ)，精密稱定，按實(shí)施例1的方法，平行制備供試品溶液6份，并在實(shí)施例1的色譜條件下測(cè)定，神曲中乳酸的平均含量為13. 34mg/g，RSD為1. 67%， 表明該方法的重復(fù)性良好。具體結(jié)果見表1。
[0066]穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0067]取神曲粉末（TRT-CSQ) 0. 4g，精密稱定，按實(shí)施例1的方法制備供試品溶液，并在 實(shí)施例1的色譜條件下測(cè)定，于0、1、2、3、4、6、8h測(cè)定，乳酸穩(wěn)定性研究的RSD為2. 47 %，表 明供試品溶液中乳酸在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。具體結(jié)果見表1。
[0068] 表1乳酸的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0069]

【權(quán)利要求】
1. 中藥神曲中乳酸的含量測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 將乳酸鈉對(duì)照品與體積分?jǐn)?shù)為0?100%的甲醇水溶液混合，制成具有已知濃度的對(duì) 照品儲(chǔ)備液； 用體積分?jǐn)?shù)為0?100%的甲醇水溶液將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋成一系列具有不同已知濃 度的對(duì)照品溶液； 在相同的預(yù)設(shè)色譜條件下，將體積'的各濃度的對(duì)照品溶液分別注入超高效液相色譜 儀中，獲得各濃度乳酸鈉對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖； 以對(duì)照品溶液的超高效液相色譜圖中乳酸色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)， 將對(duì)照品溶液的乳酸鈉濃度換算為乳酸的濃度后，相應(yīng)地以乳酸濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)或 縱坐標(biāo)，建立乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2) 采集供試品溶液的超高效液相色譜圖 將質(zhì)量M的神曲粉末，與體積V2的體積分?jǐn)?shù)0?100%的甲醇水溶液混合后超聲提取， 離心、過(guò)濾后得到供試品溶液； 在與以上（1)步驟中相同的預(yù)設(shè)色譜條件下，取體積'供試品溶液注入超高效液相色 譜儀中，獲得供試品溶液的超高效液相色譜圖； (3) 確定供試品中乳酸含量 供試品溶液超高效液相色譜圖中乳酸對(duì)應(yīng)的色譜峰峰面積的對(duì)數(shù)值，采用已建立的乳 酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出乳酸濃度的對(duì)數(shù)值lgC，并由乳酸的濃度對(duì)數(shù)值lgC計(jì)算出供試品溶液 中乳酸的濃度C#并按照下列公式計(jì)算出供試品中乳酸含量； 乳酸 ％= C供 *V2/M*100% 其中，所述預(yù)設(shè)的色譜條件包括： 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的固定相； 流動(dòng)相：0. 01 %?1 %的甲酸水溶液-乙腈，優(yōu)選0. 05 %?0. 5 %的甲酸水溶液-乙腈， 更優(yōu)選0. 1 %的甲酸水溶液-乙腈；和采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，預(yù)設(shè)的色譜條件還包括：流動(dòng)相的流速： 0? 5?2. OmL/min ;柱溫：30?40°C ;進(jìn)樣量：2?10 ii L ;漂移管溫度35?70°C，氣體壓力 20 ?40psi。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對(duì)照品溶液的濃度為40?2000 y g/ mL，并且各對(duì)照品溶液的濃度值滿足等差數(shù)列或者等比數(shù)列，優(yōu)選地采用二倍稀釋法將對(duì) 照品儲(chǔ)備液稀釋成一系列具有不同已知濃度的對(duì)照品溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，乳酸鈉對(duì)照品和神曲粉末是精密稱定的；體 積％的對(duì)照品溶液和供試品溶液是精密吸取的。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，神曲粉末的質(zhì)量M與甲醇水溶液的體積V2的比值為〇. 01?〇. lg/mL，超聲提取。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述超聲提取的時(shí)間為10?30分鐘。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述離心分離具體為：在14000轉(zhuǎn)/分鐘的 條件下尚心8?12分鐘。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述過(guò)濾具體為：采用0. 2?0. 3 y m微孔 濾膜過(guò)濾。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟⑴和⑵中所采用的甲醇水溶液的 體積分?jǐn)?shù)為1 %?80%，優(yōu)選為5%?60%，更優(yōu)選為6%?40%，最優(yōu)選為8%?20%。
10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（2)中，在將神曲粉末與甲醇水溶液 混合后，超聲提取，然后將提取液進(jìn)行離心，取上清液過(guò)濾，得到供試品溶液。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104458946SQ201410712756
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】王躍飛, 江振作, 張蕾, 劉二偉, 劉雙, 朱彥, 楊靜 申請(qǐng)人:天津中醫(yī)藥大學(xué)